豆芽中氯苯氧乙酸氟苯氧乙酸等簡(jiǎn)要編制說(shuō)明

DB北京市食品安全地方標(biāo)準(zhǔn)DB11/XXXXX—XXXX食品安全地方標(biāo)準(zhǔn)4-氯苯氧乙酸、4-氟苯氧乙酸、6-芐基腺嘌呤、異戊烯腺嘌呤、吲哚乙酸、7種植物生長(zhǎng)調(diào)整劑及福美雙的測(cè)定XXXX-XX-XX公布 XXXX-XX-XX實(shí)施北京市衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì) 發(fā)布DB11/DB11/XXXXX—XXXX前 言本標(biāo)準(zhǔn)代替DB11/T379-2023《豆芽中4-氯苯氧乙酸鈉、6-芐基腺嘌呤、2,4-滴、赤霉素、福美雙的測(cè)定》。本標(biāo)準(zhǔn)與DB11/T379-2023相比，主要變化如下：——對(duì)原標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)展構(gòu)造調(diào)整，刪除了2,4-滴的檢測(cè)方法；——增加了4-氯苯氧乙酸、4-氟苯氧乙酸、6-芐基腺嘌呤、吲哚乙酸、吲哚丁酸、異戊烯腺嘌呤6種植物生長(zhǎng)調(diào)整劑的液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)方法；——修改了標(biāo)準(zhǔn)的中文名稱，標(biāo)準(zhǔn)中文名稱改為《食品安全地方標(biāo)準(zhǔn)豆芽中4-氯苯氧乙酸、4-氟苯氧乙酸、6-芐基腺嘌呤、異戊烯腺嘌呤、吲哚乙酸、吲哚丁酸、赤霉素7種植物生長(zhǎng)調(diào)整劑及福美雙的測(cè)定》?！矅?guó)家食品質(zhì)量安全監(jiān)視檢驗(yàn)中心〕。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：第一法〔仲裁法〕：劉平、范賽、吳國(guó)華、趙榕、劉偉、趙旭東；其次法：曹紅、金瑛、劉艷琴、許華、王浩、田艷玲、林立。原標(biāo)準(zhǔn)于2023年首次公布，本次為第一次修訂。IDB11/DB11/XXXXX—XXXX14食品安全地方標(biāo)準(zhǔn)豆芽中4-氯苯氧乙酸、4-氟苯氧乙酸、6-芐基腺嘌呤、異戊烯腺嘌呤、吲哚乙酸、吲哚丁酸、赤霉素7種植物生長(zhǎng)調(diào)整劑及福美雙測(cè)定范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了豆芽中4-氯苯氧乙酸〔4-CPA〕、4-氟苯氧乙酸(4-FPA)、6-芐基腺嘌呤(6-BAP)、異戊烯腺嘌呤(z-IP)、吲哚乙酸(IAA)、吲哚丁酸(IBA)、赤霉素〔GA〕7種植物生長(zhǎng)調(diào)整劑及福美雙的測(cè)定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于豆芽中4-氯苯氧乙酸、4-氟苯氧乙酸、6-芐基腺嘌呤、異戊烯腺嘌呤、吲哚乙酸、吲哚丁酸、赤霉素7種植物生長(zhǎng)調(diào)整劑及福美雙殘留量的測(cè)定。原理試樣經(jīng)乙腈提取，在酸性條件下鹽析脫水，離心后，分散固相萃取管凈化進(jìn)液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜系統(tǒng)分析，外標(biāo)法定量。試劑和材料除非另有說(shuō)明，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。試劑乙腈：色譜純。甲醇：色譜純。QuEChERS4gMgSO4、1gNaCl、1g0.5g十八烷基硅烷〔C18〕。標(biāo)準(zhǔn)品44-6->99.0%。標(biāo)準(zhǔn)溶液配制標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)藏液：分別準(zhǔn)確稱取植物生長(zhǎng)調(diào)整劑標(biāo)準(zhǔn)品0.01g(準(zhǔn)確到0.0001g)，用甲醇溶解并移入10mL1.00mg4-氯苯氧乙酸、4-氟苯氧乙酸、6-芐基腺嘌呤、異戊烯腺嘌呤、吲哚丁酸單標(biāo)儲(chǔ)藏液100μL10mL0.01mg200μL10mL容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度。此溶液每毫升相當(dāng)于0.02mg植物生長(zhǎng)調(diào)整劑。上述儲(chǔ)藏液存放于-20℃冰箱冷凍備用。6100μL，4-氯苯氧乙酸、4-氟苯氧乙酸、吲哚乙酸、吲哚丁酸單標(biāo)儲(chǔ)藏液1mL10mL0.1μg61μg44-2μg100μL10mL0.01μg60.1μg44-0.2μg-20℃冰箱冷凍備用。5.1試樣處理方法提取，必要時(shí)使用LC-MS/MS標(biāo)準(zhǔn)工作溶液系列配制：準(zhǔn)確吸取標(biāo)準(zhǔn)使用液10μL、20μL、50μL、80μL、100μL離心管中，加空白豆芽萃取液〔3.3.3〕1mL，渦旋混勻。配制成濃度依次為6-芐基腺嘌呤、異戊烯腺嘌呤0.1ng/mL、0.2ng/mL、0.5ng/mL、0.8ng/mL、1.0ng/mL；4-氯苯氧乙酸、4-氟苯氧乙酸、吲哚1.0ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL、8.0ng/mL、10.0ng/mL；吲哚乙酸2.0ng/mL、4.0ng/mL、10.0ng/mL、16.0ng/mL、20.0ng/mLLC-MS/MS儀器和設(shè)備本章內(nèi)容要用常規(guī)字體WatersXevoTQ-S〔LC-ESI-MS/MS〕。4.2天平〔0.001g0.0001g〕。渦旋振蕩器。高速冷凍離心機(jī)(最高轉(zhuǎn)速:15,000RPM)。組織搗碎機(jī)。分析步驟試樣制備10g〔0.001g〕50mL10mL乙腈，渦2min4.0gMgSO4、1.0gNaCl、1.0g0.5g檸檬酸二鈉鹽,渦旋1min，10000rap/min5min2mL15ml100mgC18，渦旋混勻，10000rap/min離心5min，準(zhǔn)確吸取上清液100μ L，用超純水定容至1mL，渦旋混勻，供LC-MS/MS分析。儀器參考條件色譜參考條件色譜柱：WATERSACQUITYUPLCBEHC18(100mm×2.1mm，1.7μm)。流淌相A：正離子模式：甲醇；負(fù)離子模式：乙腈。流淌相B：正離子模式：0.1%甲酸水；負(fù)離子模式：0.1%氨水。流速：0.35mL/min。進(jìn)樣量：5uL。柱溫：30℃。表1梯度洗脫條件時(shí)間A〔%〕B〔%〕變化曲線029865703065.5100066.5100067298682986質(zhì)譜參考條件6ESI〔MRM〕,毛細(xì)管電壓：3.17kV；脫溶劑氣流：N1000L/h；脫溶劑溫度：450℃；錐孔氣流：N150L/h；離子源溫度：150℃；碰撞室壓2 2力：3.1×10-3mbar；碰撞氣體:氬氣。吲哚乙酸、吲哚丁酸、對(duì)氟苯氧乙酸、對(duì)氯苯氧乙酸承受EST負(fù)離子掃描模式〔MRM〕，毛細(xì)管電壓：3.0kV；脫溶劑氣流：N1000L/h；脫溶劑溫度：500℃；錐孔氣流：N150L/h；離子2 2源溫度：150℃；碰撞室壓力：3.1×10-3mbar6種植物生長(zhǎng)調(diào)整劑的質(zhì)譜參數(shù)見(jiàn)表2。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作將標(biāo)準(zhǔn)系列工作液(3.3.4度，以標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱座標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。吲哚丁酸1.88202.14-氯苯氧乙酸1.84185.0116.1158.1*111.020吲哚丁酸1.88202.14-氯苯氧乙酸1.84185.0116.1158.1*111.0202020171517名稱保存時(shí)間〔min〕母離子子離子錐孔電壓碰撞能量91.1*25206-芐基腺嘌呤3.90226．5148.0252069.22510異戊烯腺嘌呤3.83204.4136.0*2520148.13114128.01915吲哚乙酸1.37174.1130.0*198174.1193127.0*20144-氟苯氧乙酸1.48169.1111.1*2014125.0125.02015*為定量離子,全部質(zhì)譜參數(shù)均在WatersXevoTQ-S上完成，承受離子阱質(zhì)譜采集時(shí)，子離子碎片或碰撞能量有可能消滅差異，以各自儀器為準(zhǔn)。試樣溶液的測(cè)定將試樣溶液注入超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀中，得到樣品中相應(yīng)植物生長(zhǎng)調(diào)整劑的峰面積，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測(cè)液中相應(yīng)植物生長(zhǎng)調(diào)整劑的濃度，平行測(cè)定次數(shù)不少于兩次。分析結(jié)果的表述試樣中植物生長(zhǎng)調(diào)整劑含量按式〔1〕計(jì)算：Af1000Xm

………….…(1)式中：X——試樣中植物生長(zhǎng)調(diào)整劑的含量，單位為μg/kg；A——試樣中定量子離子面積對(duì)應(yīng)的植物生長(zhǎng)調(diào)整劑的質(zhì)量，μg；f10；m——試樣的取樣量，g。計(jì)算結(jié)果需扣除空白值，測(cè)定結(jié)果用平行測(cè)定的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保存兩位有效數(shù)字。周密度分析方法的牢靠性。取不少于3份基質(zhì)與實(shí)際試樣相像的空白樣品，分別參加標(biāo)準(zhǔn)溶液。將制備好的加標(biāo)試樣按上述方法進(jìn)展分析，各目標(biāo)化合物的回收率應(yīng)在75-125%范圍內(nèi)，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差〔RSD〕小于20%。其他方法空白每個(gè)批次最多15個(gè)樣品，需做一次方法空白試驗(yàn)。質(zhì)控樣品每個(gè)批次最多15樣品。目標(biāo)化合物的測(cè)定值依據(jù)加標(biāo)濃度應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)值的75%～125%范圍之內(nèi)。方法檢出限與定量限試樣中目標(biāo)化合物色譜峰的保存時(shí)間與相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)色譜峰的保存時(shí)間全都，變化范圍應(yīng)在±2.5%之內(nèi)。待測(cè)化合物的定性離子的重構(gòu)離子色譜峰的信噪比應(yīng)大于等于3〔S/N≥3〕，定量離子的重構(gòu)離子色譜峰的信噪比應(yīng)大于等于10〔S/N≥10〕。所得的方法檢出限與定量限見(jiàn)表3。化合物檢出限定量限表3方法的檢出限和定量限〔化合物檢出限定量限6-芐基腺嘌呤ug/kg0.03ug/kg0.1異戊烯腺嘌呤0.030.14-氯苯氧乙酸0.31.04-氟苯氧乙酸0.31.0吲哚乙酸3.010.0吲哚丁酸0.31.026-Jul-202312:44:33Jul-202311:44:2220230724_11 MRMof9ChannelsES-100 185>127(4-CPA)3.84e500.400.600.801.001.201.401.601.802.002.202.402.602.803.003.203.403.603.804.004.204.404.604.805.005.205.405.605.806.006.206.406.606.807.007.207.407.6020230724_11 MRMof9ChannelsES-100 169.1>111.1(4-FPA)3.66e500.400.600.801.001.201.401.601.802.002.202.402.602.803.003.203.403.603.804.004.204.404.604.805.005.205.405.605.806.006.206.406.606.807.007.207.407.6020230724_11 MRMof9ChannelsES-100 202.1>158.1(IBA)2.85e500.400.600.801.001.201.401.601.802.002.202.402.602.803.003.203.403.603.804.004.204.404.604.805.005.205.405.605.806.006.206.406.606.807.007.207.407.6020230724_11 MRMof9ChannelsES-100 174.1>130(IAA)1.35e40Time0.400.600.801.001.201.401.601.802.002.202.402.602.803.003.203.403.603.804.004.204.404.604.805.005.205.405.605.806.006.206.406.606.807.007.207.407.6016MRM26-Jul-202313:20:2220230726_16 MRMof5ChannelsES+100 226.5>91.1(6-BAP)2.90e600.400.600.801.001.201.401.601.802.002.202.402.602.803.003.203.403.603.804.004.204.404.604.805.005.205.405.605.806.006.206.406.606.807.007.207.407.6020230726_16 MRMof5ChannelsES+100 204.4>136(Z-IP)1.65e4

0 Time0.400.600.801.001.201.401.601.802.002.202.402.602.803.003.203.403.603.804.004.204.404.604.805.005.205.405.605.806.006.206.406.606.807.007.207.407.6024-Jul-202312:11:0920230724_14 MRMof9ChannelsES-100 1.52 185>127(4-CPA)0.660.71

0.84 1.54

4.01e31.50

2.582.761.65

1.78

2.262.320.29

0.54

1.11.20

2.46

3.09

3.33

3.56

3.790.39

1.00

1.231.41

2.95

3.233.34

3.74

4.324.434.604.70

4.94.930 4.740.400.600.801.001.201.401.601.802.002.202.402.602.803.003.203.403.603.804.004.204.404.604.805.005.205.405.605.806.006.206.406.606.807.007.207.407.6020230724_14 MRMof9ChannelsES-100 1.35 169.1>111.1(4-FPA)4.81e30.640.620.570.45

2.061.232.06

1.36

1.85 2.112.19

3.250.350

0.921.18

1.511.591.771.89

2.32.422.62.702.96

3.283.47

3.75 3

4.870.400.600.801.001.201.401.601.802.002.202.402.602.803.003.203.403.603.804.004.204.404.604.805.005.205.405.605.806.006.206.406.606.807.007.207.407.6020230724_14 MRMof9ChannelsES-100 1.35 202.1>158.1(IBA)4.97e41.381.461.590.48

1.61.781.94

2.482.162.232.160

3.03.020.400.600.801.001.201.401.601.802.002.202.402.602.803.003.203.403.603.804.004.204.404.604.805.005.205.405.605.806.006.206.406.606.807.007.207.407.6020230724_14 MRMof9ChannelsES-100 0.60 174.1>130(IAA)1.53e4% 0.64 1.330.40.46 0.60.85

2.700.81.050

1.71

2.46 2.883.06 4.40 Time0.400.600.801.001.201.401.601.802.002.202.402.602.803.003.203.403.603.804.004.204.404.604.805.005.205.405.605.806.006.206.406.606.807.007.207.407.602樣品空白的MRMsample1-5sample1-520230726_313.9327-Jul-202311:38:07MRMof5ChannelsES+226.5>91.1(6-BAP)1.36e6%02.803.003.203.403.603.804.0020230726_311003.854.20MRMof5ChannelsES+204.4>136(Z-IP)3.861.22e4%3.873.893.834.122.822.712.852.893.683.823.933.944.084.184.264.363.003.113.293.303.423.433.553.583.784.030 Time2.80 3.00 3.20 3.40 3.60 3.80 4.00 4.20711-SHUANGHUANG20230828_5711-SHUANGHUANG20230828_51001.8428-Aug-202312:00:08MRMof9ChannelsES-3.12e5%00.250.500.751.001.251.501.752.00 2.252.502.753.003.253.503.754.004.254.504.755.0020230828_51002.022.04MRMof9ChannelsES-169.1>111.1(4-FPA)4.17e3%0.460.650.670.910.941.821.8901.491.541.470.250.500.751.081.00 1.251.501.752.002.232.252.272.572.722.773.093.133.582.50 2.75 3.00 3.25 3.503.783.754.034.004.254.504.755.0020230828_51001.501.43MRMof9ChannelsES-202.1>158.1(IBA)1.08e41.55%1.680.620.740.781.060.2400.251.281.251.771.811.932.142.252.482.520.500.751.001.50 1.752.002.252.502.792.753.053.003.283.403.573.253.503.853.754.084.104.384.774.825.084.004.254.504.755.0020230828_51003.16MRMof9ChannelsES-174.1>130(IAA)5.74e30.550.59%0.160.390.470.710.891.561.111.231.311.481.581.681.9501.972.342.362.392.662.683.023.103.203.333.523.763.843.884.274.57 4.77Time3MRM其次法豆芽中其次法豆芽中4-氯苯氧乙酸鈉、6-芐基腺嘌呤、2,4-滴、赤霉素、福美雙的測(cè)定4-氯苯氧乙酸鈉殘留量的測(cè)定原理試樣中的4-氯苯氧乙酸鈉用稀堿提取后，在酸性條件下用固相萃取柱將樣品中的4-氯苯氧乙酸吸量。試劑與材料氫氧化鈉〔AR〕。鹽酸〔AR〕。磷酸〔AR〕。冰醋酸〔AR〕。甲醇〔HPLC〕。氫氧化鈉溶液〔0.01mol/L〕：稱取0.40g氫氧化鈉，溶于水并稀釋至1000mL。10.6g亞鐵氰化鉀[KFe(CN)·3HO]100mL。4 6 2乙酸鋅溶液：稱取22.0g乙酸鋅[Zn(CHCOO)3mL冰醋酸并加水稀釋至3 2100mL。磷酸鹽緩沖液〔0.01mol/L〕：稱取1.56g的磷酸二氫鈉〔NaH2PO4·2H2O〕加水溶解，并定容至1000mL，用50%的磷酸溶液調(diào)整pH值至4.0。44-氯苯氧乙酸〔含量≥99%〕0.1000g，用甲醇溶解并移入100mL容量瓶中，稀釋至刻度。此溶液每毫升相當(dāng)于1.00mg4-氯苯氧乙酸。臨用時(shí)甲醇稀釋濃度為每毫升相當(dāng)于0.10mg4-氯苯氧乙酸。固相萃取小柱〔3ml/500mg〕：ODS-C18小柱，用時(shí)先經(jīng)10mL甲醇洗脫活化，再用10mL水洗去殘留甲醇，保持萃取柱潤(rùn)濕狀態(tài)待用。本標(biāo)準(zhǔn)所用水為經(jīng)純水制備系統(tǒng)制備后的水。儀器與設(shè)備高效液相色譜儀〔帶紫外檢測(cè)器，配ZORBAXSBC18色譜柱〕。超聲波儀。酸度計(jì)。組織搗碎機(jī)。Milli-Q純水制備系統(tǒng)。分析步驟試樣制備稱取搗碎混勻的豆芽樣品20g〔準(zhǔn)確至0.1g〕于100mL容量瓶中，參加40ml氫氧化鈉溶液振搖，然后分別參加亞鐵氰化鉀溶液和乙酸鋅溶液各5mL，混勻，超聲提取30min，用氫氧化鈉溶液稀釋至刻50.0mLpH至2.5，然后以3mL/min的流速通過(guò)活化的ODS-C18小柱。先用3.0mL3.0mL，過(guò)0.45μm濾膜后，供液相色譜分析。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備準(zhǔn)確吸取每毫升相當(dāng)于0.10mg的4-氯苯氧乙酸0.20mL、0.50mL、1.00mL、2.00mL、4.00mL于100mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度。制成濃度依次為0.20mg/L、0.50mg/L、1.00mg/L、2.00mg/L、4.00mg/L的標(biāo)準(zhǔn)使用液，供液相色譜分析。色譜條件色譜柱：ZORBAXSBC18柱〔4.6mm×250mm×5μm〕〔或相當(dāng)型號(hào)色譜柱〕。檢測(cè)波長(zhǎng)：228nm。流淌相：甲醇+0.01mol/L磷酸鹽緩沖液〔50+50〕(V/V)。流速：1.0mL/min。柱溫：30℃。測(cè)定吸取10.0μL2.4.3性，標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量。標(biāo)樣及試樣圖譜見(jiàn)圖4及圖5。計(jì)算按式〔2〕計(jì)算。A×f×1000X= ×1.12 〔2〕m×1000式中：X—試樣中4-氯苯氧乙酸鈉的含量，單位為毫克每千克〔mg/kg〕；A—從標(biāo)準(zhǔn)曲線上求出的試樣液中4-氯苯氧乙酸的質(zhì)量，單位為微克〔μg〕；f—試樣的稀釋倍數(shù)；m—試樣的取樣量，單位為克〔g〕；1.12—4-氯苯氧乙酸轉(zhuǎn)換為4-氯苯氧乙酸鈉的系數(shù)。計(jì)算結(jié)果保存兩位有效數(shù)字。周密度10%。檢測(cè)限在本試驗(yàn)條件下，豆芽中4-氯苯氧乙酸鈉的定量檢測(cè)限為0.10mg/kg。圖4 4－氯苯氧乙酸標(biāo)樣色譜圖54－氯苯氧乙酸色譜圖6-芐基腺嘌呤殘留量的測(cè)定原理豆芽中殘留的6-芐基腺嘌呤經(jīng)酸化甲醇提取后，高效液相色譜法測(cè)定，以保存時(shí)間定性，外標(biāo)法峰面積定量。試劑與材料乙酸〔AR)〕。1%乙酸溶液。乙腈〔HPLC〕。甲醇〔HPLC〕。100ml〔60+40〕(V/V50μL，混勻。660.1000g〔含量≥99.0%〕100mL用甲醇溶解并定容至刻度。此溶液每毫升相當(dāng)于1.00mg6-芐基腺嘌呤。臨用時(shí)用甲醇稀釋濃度為每毫0.010mg6-芐基腺嘌呤。固相萃取小柱〔3ml/500mg〕：ODS-C小柱，用時(shí)先經(jīng)10mL10mL18洗去殘留甲醇，保持萃取柱潤(rùn)濕狀態(tài)待用。本標(biāo)準(zhǔn)所用水為經(jīng)純水制備系統(tǒng)制備后的水。儀器與設(shè)備高效液相色譜儀〔帶紫外檢測(cè)器，配ZORBAXSBC18

色譜柱〕。Ultra-Turrax離心機(jī)〔4500r/min〕。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。組織搗碎機(jī)。Milli-Q分析步驟試樣制備10g〔0.1g〕50mL15mLUltra-Turrax3min,4500r/min10min100mL15mL3mL/minODS-C小柱，先用3.0mL185.0mL0.2μm有機(jī)膜濾過(guò)后，供液相色譜分析。標(biāo)準(zhǔn)溶液系列的配制0.010mg6-0mL、0.20mL、0.40mL、0.80mL、1.0mL、2.0mL5.0mL25mL0mg/L0.08mg/L0.16mg/L、0.32mg/L、0.40mg/L、0.80mg/L、2.00mg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液系列，供液相色譜分析。色譜條件色譜柱：ZORBAXSBC18

柱〔4.6mm×250mm×5μm〕〔或相當(dāng)型號(hào)色譜柱〕。檢測(cè)波長(zhǎng)：267nm。流淌相：甲醇+乙腈+1%乙酸溶液〔60+5+35〕(V/V)。流速：1.0mL/min。柱溫：30℃。測(cè)定10.0μL3.4.3以保存時(shí)間定性，峰面積外標(biāo)法定量。標(biāo)樣及試樣圖譜見(jiàn)圖67。計(jì)算按式〔3〕計(jì)算。式中：

A×f×1000X=m×1000

………………〔3〕X—試樣中6-芐基腺嘌呤的含量，單位為毫克每千克〔mg/kg〕；A—從標(biāo)準(zhǔn)曲線上求出的試樣溶液中6-芐基腺嘌呤的質(zhì)量，單位為微克〔μg〕；f—試樣的稀釋倍數(shù)；m—試樣的取樣量，單位為克〔g〕。計(jì)算結(jié)果保存兩位有效數(shù)字。周密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果確實(shí)定差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的10%。檢測(cè)限60.02mg/kg。6-benzylaminopurine50403020100012345 6 7minmAU60161mAU60161.4mAU140 enirp120 upon100 imaz80 yzne-60 b-6402000 1 2 3 4 5 6 7 min76－芐基腺嘌呤色譜圖2,4-滴〔2,4-二氯苯氧乙酸〕殘留量的測(cè)定原理試樣中2,42,4-滴衍生成2,4-滴甲酯，液-液萃取，面積定量。試劑與材料乙腈〔AR〕。甲醇〔AR〕。正己烷〔AR〕。環(huán)己烷〔AR〕。乙酸乙酯〔AR〕。pH250％稀硫酸調(diào)整水的pH2。氯化鈉〔AR〕。50g/L無(wú)水硫酸鈉：6504h三氟化硼乙醚溶液：47％(V/V)。衍生劑(1429.5mL100mL。2,4-1mL2,4-滴的甲醇標(biāo)準(zhǔn)溶液〔100μg/L〕，用甲醇溶解并100ml1.00μg2,4-滴。本標(biāo)準(zhǔn)所用水除另有規(guī)定外，均為蒸餾水。儀器與設(shè)備氣相色譜儀：配有電子捕獲檢測(cè)器。凝膠滲透色譜凈化系統(tǒng)。組織搗碎機(jī)。恒溫水浴鍋。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器。電動(dòng)振蕩器。20mL〔或密封嚴(yán)密的密封瓶〕。分析步驟提取50.0g〔0.1g〕于具塞錐形瓶?jī)?nèi)，參加20mL50mL30min20mL250mL15g40min，分層，提取乙腈層，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去乙腈，5mL20mL衍生化5mL6545min出玻璃瓶快速置于冰浴中冷卻，將衍生反響液轉(zhuǎn)移至盛有10mL50g/L50mL5mL，合并有機(jī)相，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉脫水，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器揮至近干，用乙酸乙酯:環(huán)己烷〔1:1，V/V〕10mL。2,4-滴甲酯標(biāo)準(zhǔn)工作液的制備5mL2,44.4.22,4-滴甲酯標(biāo)準(zhǔn)工作液，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉脫水，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器揮至近干后，用正己烷準(zhǔn)確定容至5mL。此溶液濃度為每毫升相當(dāng)于1.00μg2,4-滴。凝膠滲透色譜凈化選擇凝膠滲透色譜柱規(guī)格〔200mm×22mmi.d.〕，柱填料為BioBeadsS-X3200-400相乙酸乙酯:環(huán)己烷〔1:1，V:V〕，4.7mL/min5mL11min～15min。衍生化后樣品依據(jù)上述條件凈化，將約20mL5mL。氣相色譜條件氣相色譜儀：附電子捕獲檢測(cè)器〔ECD，Ni63〕。色譜柱：HP-1MSφ30m×250μm×0.25mm。載氣:高純氮,純度＞99.99％。載氣流速：1.0mL/min。進(jìn)樣方式：不分流。301min25℃/min22020min。進(jìn)樣口溫度:250℃。檢測(cè)器溫度:300℃。測(cè)定2,4-滴經(jīng)衍生化的標(biāo)準(zhǔn)工作液、試液各1.0μL4.4.5檢測(cè)，以保存時(shí)間定性，色譜峰面積外標(biāo)法定量。標(biāo)樣及試樣圖譜見(jiàn)圖89。計(jì)算按式〔4〕計(jì)算。A×C×V×2×1000X＝A×A×C×V×2×1000X＝A×m×10000式中:X——2,4-滴殘留量,單位為毫克每千克〔mg/kg〕；A2,4-滴(衍生物)峰面積；A2,4-滴(衍生物)峰面積；、0C2,4-滴(衍生物)濃度,單位為微克每毫升〔μg/mL〕；m——取樣量，單位為克〔g〕；2——樣液稀釋倍數(shù)；V——樣液的定容體積，單位為毫升〔mL〕。11.6周密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果確實(shí)定差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的10％。11.7檢測(cè)限2,4-0.002mg/kg。1——溶劑峰2——2,4-滴峰3——未知峰82,4-滴標(biāo)樣色譜圖1——溶劑峰2——2,4-滴峰3——未知峰92,4-滴色譜圖赤霉素殘留量的測(cè)定原理豆芽中赤霉素經(jīng)提取后，先經(jīng)乙酸乙酯液液萃取初步凈化，再利用凝膠滲透色譜〔GPC〕使目標(biāo)化合物與基體干擾物分別，到達(dá)分別和凈化的目的。用反相高效液相色譜法—DAD檢測(cè)器進(jìn)展色譜分析，計(jì)算定量。試劑與材料甲醇〔AR〕。丙酮〔AR〕。乙酸乙酯〔AR〕。50％硫酸溶液。(V/V)pH2.550％稀硫酸調(diào)整水的pH2.5。無(wú)水硫酸鈉〔AR〕。冰乙酸〔AR〕。固相萃取小柱：WatersSEP-PAK10mL10mL保持萃取柱潤(rùn)濕狀態(tài)待用。赤霉素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)藏液：周密稱取赤霉素〔含量≥99.0%〕0.1g〔準(zhǔn)確到0.0001g〕，用甲醇溶解100mL。此溶液濃度為每毫升相當(dāng)于1.00mg本標(biāo)準(zhǔn)所用水除另有規(guī)定外，均為蒸餾水。儀器與設(shè)備本章內(nèi)容要用常規(guī)字體高效液相色譜儀〔配DAD檢測(cè)器〕。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。組織搗碎機(jī)。電動(dòng)振蕩器。凝膠滲透色譜儀〔GPC〕。分析步驟試樣制備50g〔0.1g〕20mL100mL30min100mL15min，用布氏漏斗抽50mL1000mL30℃水浴上，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器減壓蒸發(fā)除去丙酮。剩下的試樣水溶液用濾紙過(guò)濾，用50mL蒸餾水洗滌燒瓶并通過(guò)同一濾器過(guò)濾，用20mL50pH2.5±0.2。將250mL150mL315g250mL30℃水浴中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干。15mL環(huán)己烷+乙酸乙脂〔1：1〕(V/V)混合液充分溶解，預(yù)備待分析樣品溶液10mL，進(jìn)入滲透色譜13min4.7mL/min6～13min〔GPC〕流302mL0.45μm析。標(biāo)準(zhǔn)溶液系列的配制0mL、0.50mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL、5.00mL100mL用甲醇稀釋定容至刻度。制成濃度依次為0μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、150μg/mL、200μg/mL、500μg/mL色譜條件色譜柱：ZORBAXSB-C18柱：5μm，4.6mm×250mm〔或相當(dāng)型號(hào)色譜柱〕。流淌相：甲醇＋水〔55＋45〕