臨床醫(yī)學檢驗技士考試輔導之2019年檢驗技士體驗課

2019年檢驗技士精選體驗課

四、血液涂片制備

一張良好的血片

①厚薄適宜

②頭體尾明顯

③細胞分布均勻

④血膜邊緣整齊

⑤并留有一定空隙

血涂片的制備

①手工推片法25°?30°夾角

血滴大小、推片與載玻片間夾角、推片速度、血細胞比容。

②厚血膜涂片法瘧原蟲、微絲蜘等。

新鮮血。液闔

載坡片中央

0

推片繚抹1.5cm圖形血膜（內(nèi)向外旅）

自然干燥滴加蒸溜水，再干后染色造檢

五、血液細胞染色

瑞氏染色法

1.染料組成

染料組成

酸性染料伊紅(E)鈉鹽陰離子

堿性染料亞甲藍(M+)氯鹽陽離子

將適量伊紅、亞甲藍溶解在甲醇中。

甲醇的作用：一是溶解亞甲藍和伊紅；二是固定細胞形態(tài)。

2.染色原理物理吸附與化學親和作用

①堿性物質(zhì)酸性染料嗜酸性物質(zhì)

嗜酸性果心〉+伊紅紅色:

②酸性物質(zhì)堿性染料嗜堿性物菌

細胞核蛋白、

+亞甲藍紫藍色或藍色

L及B胞質(zhì)

③中性顆粒呈等電狀態(tài)與E和M'結(jié)合一淡紫紅色

④紅細胞

原始紅細胞、早幼紅細胞胞質(zhì)、核仁，染成較濃厚的藍色；中幼紅細胞既含酸性物質(zhì)，又含堿性物質(zhì)，染成

紅藍色或灰紅色；完全成熟紅細胞，酸性物質(zhì)徹底消失后，染成粉紅色。

3.pH值的影響

細胞各種成分均屬蛋白質(zhì)，由于蛋白質(zhì)系兩性電解質(zhì)，所帶電荷隨溶液pH而定，在偏酸性環(huán)境中正電荷增

多，易與伊紅結(jié)合，紅細胞和嗜酸性粒細胞染色偏紅，細胞核呈淡藍色或不染色；在偏堿性環(huán)境中負電荷增多，

易與美藍結(jié)合，所有細胞呈灰藍色，顆粒呈深暗，嗜酸性顆粒呈暗褐，甚至棕黑色，中性顆粒偏粗，呈紫黑色。

①pHVpIfPr帶正電荷多f易與易結(jié)合f染色偏紅

②pH>pIfPr帶負電荷多f易與易結(jié)合f染色偏藍

磷酸鹽緩沖液(PH6.4—6.8)

保證細胞受色時恒定最佳pH條件

4.注意事項

(1)血涂片干透后固定，否則細胞在染色過程中容易脫落。

(2)沖洗時應以流水沖洗，不能先倒掉染液，以防染料沉著在血涂片上。沖洗時間不能過久，以防脫色。

如血涂片上有染料顆粒沉積，可滴加甲醇，然后立即用流水沖洗。

(3)染色過淡可以復染，復染時應先加緩沖液，然后加染液。染色過深可用流水沖洗或浸泡，也可用甲醇

脫色。

六、方法學評價

1.血涂片制備

用血量少、操作簡單，是應用最廣泛的方法。

瘧原蟲、微絲拗等檢查可采用厚血膜涂片法。

2.血液細胞染色

瑞氏染色法：最經(jīng)典、最常用。對于細胞質(zhì)成分、中性顆粒等可獲得很好的染色效果，但對細胞核的著色

能力略差。

吉姆薩染色法：對細胞核、寄生蟲（如瘧原蟲等）著色較好，結(jié)構(gòu)更清晰，但對細胞質(zhì)成分的著色能力略

差。

瑞-吉姆薩復合染色：使細胞胞質(zhì)、顆粒、胞核等均獲得滿意的染色效果。

瑞氏染料的質(zhì)量規(guī)格用吸光度比值（rA）來評價。

新配制染料rA接近2,降到（1.3±0.1）染料即可使用.

新鮮配制的染料偏堿，須在室溫或是37℃下貯存一定時間，待亞甲藍逐漸變?yōu)樘烨郆,貯存時間愈久，染色

效果愈好。在貯存過程中,必須加塞，以防甲醇揮發(fā)和氧化成甲酸。所用甲醇須為AR級，若其中含過多丙酮，

會使染色偏酸，白細胞著色不良。

七、質(zhì)量控制

1.血涂片制備

血滴愈大、角度愈大、推片速度愈快，血膜愈厚，反之則愈薄。

血細胞比容增高、血液黏度較高時，采用小血滴、小角度、慢推；血細胞比容減低、血液較稀時，應采用

大血滴、大角度、快推。

2.血液細胞染色

染色深淺與血涂片中細胞數(shù)量、血膜厚度、染色時間、染液濃度、pH值密切相關。

血清與血漿的區(qū)別是A.血清缺少某些凝血因子B.血漿缺少某些凝血因子C.血清缺少凝血酶

D.血漿缺少凝血酶E.血清缺少纖維蛋白

r正確答案』Ar答案解析』血清與血漿的差別是：血清缺少某些凝血因子，如凝血因子I（纖維蛋白原）、

II（凝血酶原）、v、vm等。

嬰幼兒做血常規(guī)檢查時，多使用的采血部位是A.頸外靜脈B.耳垂毛細血管C.足跟毛細血管

D.肘部靜脈E.以上都是

［正確答案』C『答案解析』手指采血操作方便，檢查結(jié)果比較恒定，世界衛(wèi)生組織（WHO）推薦采集左手無

名指指端內(nèi)側(cè)血液，嬰幼兒可采集大跑趾或足跟內(nèi)外側(cè)緣血液，嚴重燒傷患者，可選擇皮膚完整處采血。

下列說法錯誤的是A.采血前要仔細檢查針頭是否安裝牢固B.采血前要仔細檢查針筒內(nèi)是否有空氣

和水分C.使針頭與皮膚成30°角斜行快速刺入皮膚D.抽血時針栓可以外抽和內(nèi)推E.取下注射器

針頭，將血液沿試管壁緩緩注入抗凝管中

『正確答案』D『答案解析』抽血時只能外抽，不能內(nèi)推。

導致溶血的因素不包括A.抽血速度太快B.血液注入容器時未取下針頭C.注入抗凝管后劇烈

振蕩混勻D.注射器干燥E.取血后直接放入4℃冰箱

［正確答案』D『答案解析』注射器中有水會導致溶血，干燥不會。

血液標本保存，可使血液分析儀A.紅細胞計數(shù)結(jié)果減低B.紅細胞分布寬度增加C.血小板

計數(shù)結(jié)果增加D.血小板計數(shù)結(jié)果減低E.白細胞計數(shù)結(jié)果減低

『正確答案』D『答案解析』血漿在40c保存24h后，某些凝血因子活性減少95%,低溫（4℃）保存血液可使

血小板計數(shù)結(jié)果減低。

影響血涂片時血膜厚度的因素有A.血滴大小B.血黏度高低C.推片角度D.推片速度

E.以上都是

『正確答案』E『答案解析』制備涂片時，血滴愈大、角度愈大、推片速度愈快，血膜愈厚，反之則愈薄。血

細胞比容增高、血液黏度較高時，應采用小血滴、小角度、慢推，可得滿意結(jié)果；血細胞比容減低、血液較稀

時，應采用大血滴、大角度、快推。

瑞氏染色中起溶解作用的有機溶劑是A.無水乙醇B.甲醇C.氯仿D.二甲苯E.乙二醇

『正確答案』Br答案解析』瑞氏染色中甲爵的作用：一是溶解亞甲藍和伊紅；二是固定細胞形態(tài)。

下列有關瑞氏染色法的敘述中，哪項是正確的A.是酸性染料亞甲藍和堿性染料伊紅組合的復合染料

B.細胞核被染成紅色C.新鮮配制的染料可以馬上使用D.對細胞的染色原理僅有正負電荷的作用

E.是血涂片染色最常用的方法

r正確答案』E『答案解析』瑞氏染色法：是最經(jīng)典、最常用的血涂片染色方法。對于細胞質(zhì)成分、中性顆粒

等可獲得很好的染色效果，但對細胞核的著色能力略差。

第一節(jié)抗原抗體反應的原理

抗原與抗體能夠特異性結(jié)合是基于抗原決定簇（表位）和抗體超變區(qū)分子間的結(jié)構(gòu)互補性與親和性，這種特

性是由抗原、抗體分子空間構(gòu)型所決定的。

除兩者分子構(gòu)型高度互補外，抗原表位和抗體超變區(qū)必須密切接觸，才有足夠的結(jié)合力。

一、抗原抗體結(jié)合力

抗原抗體是一種非共價結(jié)合，不形成共價鍵。

1.靜電引力（庫倫引力）：是因抗原、抗體帶有相反電荷的氨基與竣基基團間相互吸引的能力，這種吸引力

的大小和兩個電荷間的距離平方成反比。兩個電荷距離越近，靜電引力越大。

2.范德華力:這是原子與原子、分子與分子相互接近時分子極化作用發(fā)生的一種吸引力，是抗原、抗體兩個

大分子外層軌道上電子相互作用時，兩者電子云中的偶極擺動而產(chǎn)生的引力。這種引力的能量小于靜電引力。

3.氫鍵結(jié)合力:是供氫體上的氫原子與受氫體上氫原子間的引力。其結(jié)合力較強于范德華引力。

4.疏水作用：最強。水溶液中兩個疏水基團相互接觸,由于對水分子的排斥而趨向聚集的力。

二、抗原抗體的親和性和親合力

親和性指抗體分子上一個抗原結(jié)合點與對應的抗原表位之間相適應而存在的引力，它是抗原抗體間固有的結(jié)

合力。親和性用平衡常數(shù)K來表示，K值越大，親和性越強,與抗原結(jié)合也越牢固。

抗體的親合力指抗體結(jié)合部位與抗原表位間結(jié)合的強度，與抗體結(jié)合價、抗體的親和性、抗原有效表位數(shù)目

等相關。

三、親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體

抗體和大多數(shù)的抗原同屬蛋白質(zhì)，在通常的血清學反應條件下帶有負電荷,形成水化層，成為新水膠體，因

此，蛋白質(zhì)分子不會相互凝集或沉淀。

當抗原與抗體結(jié)合，使其表面電荷減少，水化層變薄，失去親水性能，抗原抗體復合物成為疏水膠體。在電

解質(zhì)作用下，膠體粒子表面的電荷被中和，使疏水膠體進一步靠攏，形成可見的抗原抗體復合物。

第二節(jié)抗原抗體反應的特點

一、特異性

抗原表位與抗體超變區(qū)結(jié)合的特異性，是兩者在化學結(jié)構(gòu)和空間構(gòu)型上呈互補關系所決定的。這一特性，是

應用于臨床診斷的基礎。

但某些天然抗原具有多種抗原表位，與另一物質(zhì)可能有共同抗原表位，對檢驗結(jié)果產(chǎn)生交叉反應。

二、可逆性

抗原抗體是非共價結(jié)合，故不牢固，是一種動態(tài)平衡過程。抗原抗體的親合力及反應條件（如離子強度、pH

等）可影響解離。

親和層析法就是利用這個原理來純化抗原或抗體。

三、比例性

抗原抗體比例合適時，沉淀物形成快而多，稱為抗原抗體反應的等價帶；若抗原或抗體極度過剩則無沉淀

形成，稱為帶現(xiàn)象，抗體過量時，稱為前帶，抗原過量時，稱為后帶。

四、階段性

抗原抗體反應可分為兩個階段。

第一階段：抗原與抗體特異性結(jié)合階段，此階段僅需幾秒至幾分鐘，但不出現(xiàn)可見反應。

第二階段：可見反應階段，此階段需要數(shù)分鐘至數(shù)小時。

反應過程受到反應條件（如溫度、pH、電解質(zhì)、抗原抗體比例等）的影響。

第三節(jié)影響抗原抗體反應的因素

一、反應物自身因素

L抗體：濃度、特異性、親和性和等價帶的寬窄都影響抗原抗體反應.

應選擇高特異性、高親合力的抗體作為診斷試劑。但單克隆抗體不適用于沉淀反應。

2.抗原：理化性狀、分子量、抗原表位的種類及數(shù)目均可影響反應結(jié)果。

顆粒性抗原出現(xiàn)凝集反應，可溶性抗原出現(xiàn)沉淀反應，單價抗原與相應抗體結(jié)合不出現(xiàn)沉淀現(xiàn)象。

二、環(huán)境因素

1.電解質(zhì)：抗原抗體反應時常用0.85%NaCl或各種緩沖液作為抗原及抗體的稀釋液。

2.酸堿度：抗原抗體反應一般在pH6?9之間進行。

3.溫度:一般為15?40℃,常用反應溫度為37℃,如高于56℃,可導致已結(jié)合的抗原抗體解離，甚至變性

或破壞。

4.振蕩：適當振蕩也可加速反應。

第四節(jié)免疫學檢測技術(shù)的類型

免疫學檢測技術(shù)的基礎是抗原抗體反應。

早期包括：凝集現(xiàn)象、沉淀現(xiàn)象、溶血現(xiàn)象等。

免疫組織化學技術(shù)、免疫測定、放射免疫技術(shù)、熒光免疫技術(shù)、酶免疫技術(shù)、化學發(fā)光免疫技術(shù)和金免疫技

術(shù)等。

抗原抗體反應不包括A.特異性B.比例性C.可逆性D.多價性E.電離性

r正確答案』Er答案解析』抗原抗體反應的特點：特異性、可逆性、比例性和階段性。

可以用已知抗原或抗體檢測相應的抗體或抗原，是由于抗原抗體反應的A.特異性B.比例性C.

可逆性D.多價性E.電離性

『正確答案』A『答案解析』抗原抗體的特異性指的是抗原表位與抗體超變區(qū)結(jié)合的特異性，是兩者在化學結(jié)

構(gòu)和空間構(gòu)型上呈互補關系所決定的。

抗原抗體反應需要合適的溫度才有利于二者結(jié)合，其范圍一般為A.4?1（TCB.11~15℃

C.16~20℃D.15~40℃E.41?50℃

『正確答案』D『答案解析』抗原抗體反應的溫度一般為15?40C,常用反應溫度為37℃,如高于56℃,可

導致已結(jié)合的抗原抗體解離，甚至變性或破壞。

不是影響抗原抗體反應的因素是A.溫度B.電解質(zhì)C.pHD.適當振蕩E.隔絕空氣

『正確答案』E『答案解析』影響抗原抗體反應的因素：①反應物自身因素：抗體、抗原。②環(huán)境因素：電解

質(zhì)、酸堿度、溫度、振蕩。

不屬于抗原抗體反應的是A.PCR技術(shù)B.免疫電泳技術(shù)C.酶聯(lián)免疫技術(shù)D.免疫比濁技術(shù)

E.放射免疫技術(shù)

『正確答案』A『答案解析』聚合醐鏈反應（PolymeraseChainReaction,簡稱PCR）又稱無細胞分子克隆或特

異性DNA序列體外引物定向前促擴增技術(shù)。

細菌的化學組成

相同：水+無機鹽+蛋白質(zhì)+糖類+脂類+核酸（DNA/RNA）等。

細菌含有核糖核酸（RNA）和脫氧核糖核酸（DNA）兩種核酸。RNA主要存在于胞質(zhì)中，占細菌干重的10%；

DNA則存在于染色體和質(zhì)粒中，占細菌干重的3沆

特有：肽聚糖、胞壁酸、磷壁酸、脂多糖（LPS）等。

細菌的物理性狀

帶負電荷：可結(jié)合正電荷。染色反應、凝集反應、抑菌和殺菌作用。

菌體小，表面枳大：有利于物質(zhì)交換，生長繁殖迅速。

半透明：染色法、比濁法、分光光度計法。

半透膜：高滲低滲培養(yǎng)基。

營養(yǎng)類型：根據(jù)細菌對營養(yǎng)物質(zhì)需要的不同，將細菌分為兩大營養(yǎng)類型。

（1）自營菌：能以簡單的無機碳化物、氮化物作為碳源、氮源，合成菌體所需的大分子，其能量來自無機

化合物的氧化（化學能），也可通過光合作用而獲得（光能），如固氮菌.

（2）異營菌：不能以無機碳化合物作為唯一的碳源，必須利用有機物如糖類、蛋白質(zhì)、蛋白豚和氨基酸作

為碳源和氮源，僅有少數(shù)異養(yǎng)菌能利用無機氮化物，合成菌體所需的大分子，其所需的能量大多從有機物質(zhì)氧化

而獲得。

細菌的生長繁殖條件

1.營養(yǎng)物質(zhì)：碳、氮源、無機鹽、微量元素、生長因子、水。

2.大多最適pH7.2~7.6（霍亂弧菌嗜堿，結(jié)核分枝桿菌嗜酸）。

3.大多嗜溫菌，最適溫度為37℃。

4.氣體：

（1）需氧菌：必須有氧（空氣）。

（2）微需氧菌：5%左右的低氧環(huán)境。

（3）厭氧菌：必須在無氧的環(huán)境。

（4）兼性厭氧菌：在有氧和無氧環(huán)境中均能生長。

細菌的生長繁殖規(guī)律

繁殖方式

個體：二分裂。

群體：液體培養(yǎng)基或瓊脂平板培養(yǎng)。

繁殖速度

通常每20?30min分裂一次，結(jié)核分枝桿菌18?20h分裂一次。

細菌群體繁殖：生長曲線

一體外培養(yǎng)中細菌群體的生長繁殖規(guī)律（人工培養(yǎng)）

5

一

(。4

OC

JI

E

c

s

i

o

o

J2

O

?

303540

Hours

Totalcelsinpopulation,bveanddead,aleachphase

[|—Fewexnoceils[l-UveceMs■—DeadceHs

①遲緩期②對數(shù)生長期③穩(wěn)定期④衰亡期

生長曲線分為4個時期:

1）遲緩期：是細菌進入新環(huán)境后的適應階段，細菌數(shù)不增加，甚至還稍有減少。

2）對數(shù)期：此期細菌以幾何級數(shù)增長（2°f2i-22-23f2"一…），在生長曲線圖上，活菌數(shù)的對數(shù)呈直線

上升，增長極快。此期細菌的形態(tài)、染色性、生理活性都較典型，對外界環(huán)境因素的作用較為敏感。

3）穩(wěn)定期：由于培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質(zhì)消耗，毒性產(chǎn)物積聚，pH下降使細菌繁殖速度漸趨下降，細菌死亡數(shù)則

逐漸上升，細菌繁殖數(shù)與死亡數(shù)大致平衡。

4）衰亡期：細菌繁殖逐漸減慢，死亡逐漸增多，死菌數(shù)超過活菌數(shù)。

細菌的能量來源：①細菌生物氧化；②需氧呼吸；③發(fā)酵。

細菌的代謝

分

解.糖類分解一一糖分解試驗（乳糖發(fā)酵試驗）1

蛋白質(zhì)分解一一即朵試蛤、硫化氫試蛉望

代

謝［其他物質(zhì)分解一一枸梅酸鹽利用試場」

原質(zhì)：革蘭陰性菌的菌體脂多糖。注入體內(nèi)能引起發(fā)熱反應。

合毒素和侵襲性酶：與細菌致病性相關。

成色素---------------->鑒定

代

謝抗生素：抑制其他細菌。

細菌素：僅抑制產(chǎn)生該種細菌素的細菌有近絳關系的細菌。

維生素

細菌的死亡菌數(shù)遠遠大于活菌數(shù)的階段是A.遲緩期B.對數(shù)生長期C.衰亡期D.穩(wěn)定期

E.都不是

「正確答案』C『答案解析』衰亡期：細菌死亡速率逐步增加，活菌數(shù)逐步減少，死亡數(shù)大于增加數(shù)。

細菌形態(tài)和生理活性比較典型的階段是A.遲緩期B.對數(shù)增殖期C.穩(wěn)定期D.衰亡期

E.增殖期

f正確答案』B『答案解析』對數(shù)生長期細菌代謝活躍而穩(wěn)定，其大小、形態(tài)、染色性和生化反應典型，對外

界因素反應敏感，是檢測細菌生物學性狀和進行藥物敏感性試驗的適宜階段。

結(jié)核分枝桿菌在適宜條件下分裂一次所需時間為A.20分鐘B.2小時C.5小時1）.10小時

E.18小時

r正確答案』Er答案解析J大多數(shù)細菌繁殖的速度為每20?30min分裂一次，稱為一代，而結(jié)核分枝桿菌則

需要18?20h才能分裂一次，故結(jié)核患者的標本培養(yǎng)需時較長。

第五章溶血性貧血及其實驗診斷

貧血由多種原因引起外周血單位容積內(nèi)血紅蛋白（Hb）濃度、紅細胞計數(shù)（RBC）及血細胞比容（Het）低于

本地區(qū)、相同年齡和性別的人群的參考值下限的一種癥狀。

〈大綱要點〉

一、概述

1.溶血性貧血的定義和分類（熟練掌握）

2.溶血性貧血的實驗診斷步驟（熟練掌握）

3.溶血性貧血檢驗的基本方法（各實驗的臨床意義熟練掌握，其他了解）

以下各部分包括的實驗幾乎要求掌握

二、紅細胞膜缺陷的檢驗

三、紅細胞酶缺陷檢驗

四、珠蛋白合成異常的檢驗

五、免疫性溶血性貧血的檢驗

一、概述

1.定義和分類

（1）是由于某種原因使紅細胞存活期縮短，破壞增加，超過了骨髓代償能力所引起的一類貧血。

（2）分類

1）病因?qū)W分類，見下表。

2）按溶血發(fā)生的部位分類：血管內(nèi)及血管外溶血。

主要溶血性貧血的病因分類

類型疾病名稱

紅細胞內(nèi)在缺陷所致的溶貧（遺傳性/先天性）

遺傳性球形紅細胞增多癥

度缺陷遺傳性橢圓形紅細胞增多癥

遺傳性口形紅細胞增多癥

葡萄糖-6-磷酸脫氫酶缺陷癥

丙酮酸激酶缺陷癥

鹿缺陷

葡萄糖磷酸異構(gòu)酶缺陷癥

啥呢5'核甘酸酶缺陷癥

血紅蛋白病珠蛋白生成障礙性貧血

鐮狀細胞貧血

不穩(wěn)定血紅蛋白病

類型疾病名稱

紅細胞外來因素所致的溶貧(獲得性)

自身免疫性溶血性貧血

冷凝集素綜合征

陣發(fā)性冷性血紅蛋白尿癥

免疫因素

藥物誘發(fā)的免疫性溶血性貧血

新生兒同種免疫性溶血性貧血

溶血性輸血反應

鹿缺陷陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥

微血管病性溶血性貧血

物理因素心源性溶血性貧血

行軍性血紅蛋白尿癥

化學因素碑化物、硝基苯、苯朋、蛇毒等中毒

感染因素溶血性鏈球菌、瘧原蟲、產(chǎn)氣莢膜桿菌等感染

其它脾功能亢進

2.溶血性貧血的實驗診斷步驟

(1)確定有無溶血

項目參考值溶血情況

網(wǎng)織紅細胞

計數(shù)0.5%—1.5%t

絕對值(24?84)X107Lt

異形紅細胞0-0.6%t

嗜多色性紅細胞0.2%~1%t

骨髓

tt,(間期分裂細胞增多，可見核染色質(zhì)小體及

紅系增生活躍

卡波環(huán))

粒紅比例2-4:1縮小或倒置

項目參考值溶血情況

膽紅素

總膽紅素5.1?17.1Hmol/Ltt間接膽紅素為主

間接膽紅素1.7?10.2umol/L

血清游離Hb<40mg/L血管內(nèi)溶血t

血清結(jié)合珠蛋白0.5~1.5g/L1

高鐵血紅素白蛋白——+

血紅蛋白尿——+

Rous試驗—+

血清乳酸脫氫酶109?245U/Lt

51

紅細胞壽命(CrTi/2)25?35天縮短

〈血管內(nèi)溶血的結(jié)果》

血漿游離血紅蛋白增多

1.血紅蛋白血癥

2.血漿結(jié)合珠蛋白降低

3.血紅蛋白尿-快速的血管內(nèi)溶血

4.含鐵血黃素尿-慢性溶血

（尿含鐵血黃素試驗-Rous試驗）

左：正常尿液與血紅蛋白尿；

右：含有鐵顆粒的腎小管上皮細胞（普魯士藍染色）。

〈血管外溶血的結(jié)果》

血紅蛋白代謝產(chǎn)物增多

1.總膽紅素？

2.間接膽紅素？

3.尿膽原排出？

4.糞膽原排出？

日日燈堂7T堂也涌水音回

(2)確定血管內(nèi)與血管外溶血

血管內(nèi)與血管外溶血的鑒別

特征血管內(nèi)溶血血管外溶血

病因紅細胞內(nèi)缺陷，外因素獲得性多見紅細胞內(nèi)缺陷，外因素遺傳性多見

紅細胞主要破壞場所血管內(nèi)單核吞噬細胞系統(tǒng)

病程急性多見常為慢性，可急性加重

貧血、黃疸常見常見

肝、脾腫大少見

紅細胞形態(tài)學改變少見常見

紅細胞脆性改變變化小多有改變

Hb血癥常＞100mg/dl輕度增高

Hb尿常見無或輕微

尿含鐵血黃素慢性可見一般陰性

骨髓再障危象少見急性加重時可見

LDH增高輕度增高

(3)確定溶血的原因

不同類型溶血性貧血的實驗選擇

主要

溶血疑及的溶血性貧血疾病名稱篩選/排除試驗確診試驗

部位

遺傳性球形紅細胞增多癥；紅細胞形態(tài)檢查滲透脆性試驗酸高滲冷溶血試驗膜蛋白電泳

血管遺傳性橢圓形紅細胞增多癥化甘油溶血試驗分析膜脂質(zhì)分析

外自身溶血試驗紅細胞腺甘三磷酸

遺傳性口形紅細胞增多癥膜蛋白基因分析家系調(diào)查

活性Coombs試驗

血管高鐵血紅蛋白還原試驗G6PD熒光紅細胞G-6-PD活性測定；基

G-6-PD-CNSIIA

外斑點試驗硝基四氮嗖藍試驗Heinz因分析

小體生成試驗

PK活性定量測定中間代謝產(chǎn)

丙酮酸激醐缺乏癥紅細胞形態(tài)檢查PK熒光斑點試驗

物測定

嗒嚏-5'-核音酶缺乏癥唯咤核昔酶比率口密噬-5'-核昔酶活性測定

紅細胞形態(tài)檢查紅細胞包涵體試紅細胞鐮變試驗血紅蛋白電

珠蛋白生成障礙性貧血血紅

驗異丙醇沉淀試驗熱變性試驗泳珠蛋白肽鏈分析基因分析

蛋白病

Heinz小體生成試驗吸收光譜測定

血管

溫抗體型自身免疫性溶貧紅細胞形態(tài)檢查Coombs試驗

外

冷凝集素綜合征紅細胞形態(tài)檢查Coombs試驗冷凝集素試驗

藥物致免疫性溶血性貧血

紅細胞形態(tài)檢查Coombs試驗加藥后IAGT

(半抗原型、自身免疫型)

紅細胞形態(tài)檢查；Ret；膽紅素代Coombs試驗；孕婦產(chǎn)前免疫性

新生兒同種免疫性溶血癥

血管謝檢查；血型鑒定抗體檢查

外紅細胞形態(tài)檢查；Ret；進一步的

遲發(fā)性溶血性輸血反應Coombs試驗聚凝胺試驗

血型鑒定

Rous試驗尿隱血試驗蔗糖溶血試Ham試驗蛇毒溶血因子試驗

陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥

驗補體敏感性試驗

血管

高鐵血紅蛋白還原試驗G-6-PD熒

內(nèi)紅細胞G-6-PD活性測定；基因

蠶豆病光斑點試驗硝基四氮理藍試驗

分析

Heinz小體生成試驗

陣發(fā)性冷性血紅蛋白尿癥Rous試驗Coombs試驗冷熱溶血試驗

藥物致免疫性溶血性貧血

Coombs試驗IAGT及加藥后的IAGT

(奎尼丁型)

血管

血型鑒定及不同方法的交叉

內(nèi)急發(fā)性溶血性輸血反應Coombs試驗

配血試驗

紅細胞形態(tài)檢查；Ret；血小板計止血與血栓實驗室檢查及其

微血管病性溶血性貧血

數(shù)；血漿游離血紅蛋白測定等他相關檢查

3.溶血性貧血檢驗的基本方法及應用

(1)血漿游離血紅蛋白測定

(2)血清結(jié)合珠蛋白(Hp)測定

(3)血漿高鐵血紅素白蛋白測定

(4)血紅蛋白尿測定

(5)尿含鐵血黃素試驗

各實驗的臨床意義要求熟練掌握

(1)血漿游離血紅蛋白測定

1)原理：利用血紅蛋白具有類過氧化物酶活性的特點，在過氧化氫(11A)參與下，可催化無色的鄰聯(lián)甲苯

胺脫氫而顯藍色，根據(jù)顯色深淺，與同時測定的標準血紅蛋白液對照，可測出血漿游離血紅蛋白的量。

參考值：＜40mg/L。

2)臨床意義：血管內(nèi)溶血時顯著升高;珠蛋白生成障礙性貧血、自身免疫性溶貧時輕度增高；血管外溶血、

紅細胞膜缺陷性溶貧時不增高。

(2)血清結(jié)合珠蛋白(Hp)測定

1)原理：在待測血清中加入一定量的血紅蛋白(Hb)液，使之與待測血清中的結(jié)合珠蛋白(Hp)形成Hp-Hb

復合物。通過電泳法將結(jié)合的Hp-Hb復合物與未結(jié)合的Hb分開，測定Hp-Hb復合物的量，從而得到血清中結(jié)合

珠蛋白的含量。

參考值：0.8?2.7g/L。

2）臨床意義：增高見于妊娠、慢性感染、惡性腫瘤等，但不能排除溶血；減低見于各種溶血、肝病或無結(jié)

合珠蛋白血癥、巨幼細胞貧血等。

（3）血漿高鐵血紅素白蛋白測定

1）原理：血漿中游離的血紅蛋白可被氧化為高鐵血紅蛋白，再分解為珠蛋白和高鐵血紅素，后者先與血中

的血紅蛋白結(jié)合，血紅蛋白消耗完后，高鐵血紅素與白蛋白結(jié)合形成高鐵血紅素白蛋白，后者與硫化錢形成一個

容易識別的鍍血色原，用光譜儀觀察結(jié)果，在綠光區(qū)558nm處有一最佳吸收區(qū)帶。

結(jié)果：陰性。

2）臨床意義：血管內(nèi)溶血時陽性。本試驗陽性說明機體存在嚴重血管內(nèi)溶血，是嚴重血管內(nèi)溶血的指標。

（4）血紅蛋白尿測定

1）原理：血管內(nèi)有大量紅細胞破壞，血漿中的游離血紅蛋白超過1000mg/L時,血紅蛋白可隨尿排出，尿中

血紅蛋白檢查陽性。其特點為外觀呈濃茶色或透明的醬油色，鏡檢無紅細胞，但隱血試驗呈陽性反應。

結(jié)果：健康人呈尿隱血試驗陰性。

2）臨床意義：血型不合的輸血、大面積燒傷、惡性瘧疾、某些傳染病、溶血性中毒癥等，明顯增多。遺傳

性或繼發(fā)性溶血性貧血,如蠶豆病、陣發(fā)性寒冷性血紅蛋白尿癥、行軍性血紅蛋白尿及陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿

癥等。

（5）尿含鐵血黃素試驗

1）原理：又稱Rous試驗。當血紅蛋白通過腎濾過時，部分鐵離子以含鐵血黃素的形式沉積于上皮細胞，并

隨尿液排出。尿中含