2024年-唾液淀粉酶活性的觀(guān)察

1實(shí)驗(yàn)三唾液淀粉酶活性的觀(guān)察動(dòng)物醫(yī)學(xué)院動(dòng)物生化教研室2掌握酶的催化活性，酶的高效性和特異性了解各種因素（如溫度、pH及一些化學(xué)物質(zhì)）對(duì)酶活性的影響唾液淀粉酶的制備和活性觀(guān)察一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?二、實(shí)驗(yàn)原理酶是生物體內(nèi)具有催化功能的生物大分子，也叫生物催化劑。酶活性:酶的催化能力,用催化化學(xué)反應(yīng)的速度表示酶活性的測(cè)定方法：1）定底物2）定時(shí)間影響酶活性的因素是多方面的，如溫度、pH,激活劑和抑制劑等都會(huì)影響酶的催化活性。二、實(shí)驗(yàn)原理pH值的影響:能使酶活性達(dá)到最高時(shí)的pH值，稱(chēng)為該酶的最適pH。溫度的影響:在一定溫度范圍內(nèi)，隨著溫度的升高，酶促反應(yīng)速度增加，直至達(dá)到最大值。在一定條件下，能使酶活性達(dá)到最高的溫度即酶的最適溫度。激活劑和抑制劑的影響:

能增高酶活性的物質(zhì)即稱(chēng)為酶的激活劑，能降低酶活性卻又不使酶變性的物質(zhì)叫酶的抑制劑。4

本實(shí)驗(yàn)以淀粉為底物,淀粉酶作用下得到各種糊精乃至麥芽糖、少量葡萄糖等水解產(chǎn)物。用碘液檢查酶促淀粉的水解程度，來(lái)說(shuō)明溫度、pH及化學(xué)物質(zhì)對(duì)酶活力的影響。

淀粉酶

淀粉酶淀粉——————→糊精—————→麥芽糖+少量葡萄糖加碘后；（蘭色）（紫紅色、暗褐色或紅色等）（棕黃色，碘本身顏色）5二、實(shí)驗(yàn)原理影響酶活性的因素

1）溫度2）pH3）激活劑和抑制劑酶的特性（專(zhuān)一性）

還原糖和斑氏（Benedict）試劑的反應(yīng)原理

C6H12O6+2Cu(OH)2C5H11O5.COOH+Cu2O+2H2OOH-加熱實(shí)驗(yàn)原理6三、試劑及器材1.試劑?（1）0.5%(w/v)淀粉溶液?（2）稀碘溶液?（3）不同pH緩沖液(pH5.0、6.8、8.0)?（4）1%(w/v)NaCl溶液?（5）1%(w/v)CuSO4溶液2.器材?比色板、水浴鍋、刻度吸管及滴管7四、操作步驟1.溫度對(duì)酶活力的影響

取3支試管，編號(hào)后按下表操作:8試管編號(hào)1230.5%淀粉555pH6.8緩沖液0.50.50.5反應(yīng)條件置冰水浴中置37℃水浴中置沸水浴中稀釋唾液111單位：mL在干凈的比色板上，于各孔穴中分別滴加2滴碘液。每隔1min從第2支試管中取反應(yīng)液1滴，與比色板孔穴中的碘液混合，觀(guān)察顏色的變化。待第2支試管中的反應(yīng)液與比色板孔穴中的碘液混合后顏色呈棕色時(shí)，取出試管，并將在沸水浴中處理的試管用冷水冷卻，然后向各試管中滴加碘液1-3滴。搖勻后觀(guān)察并記錄各管顏色，比較各管中淀粉水解的程度，說(shuō)明溫度對(duì)酶活性的影響。92.pH值對(duì)酶活力的影響取3支試管，按下表編號(hào)后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。10四、操作步驟單位：mL試劑1230.5%淀粉222pH5.0緩沖液2——pH6.8緩沖液—2—pH8.0緩沖液——2稀釋唾液111搖勻后，將各管置于37℃水浴中處理。（1）每隔1min從pH6.8的試管中取出1滴反應(yīng)液滴于預(yù)先滴加稀碘液的白瓷板上，觀(guān)察其顏色變化。（2）待顏色呈棕色時(shí)，向各管中加稀碘液1-3滴。觀(guān)察各管顏色，比較各管中淀粉水解的程度，解釋pH對(duì)酶活性的影響。113.酶反應(yīng)的特異性取2支試管，按下表編號(hào)后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。12四、操作步驟單位：mL試劑120.5%淀粉2—0.5%蔗糖—2稀釋唾液11將各管搖勻后，一起放入37℃水浴中保溫10min。取出試管，分別加入斑氏試劑1mL，混勻。將各管置于沸水浴中煮沸2-5min。觀(guān)察并解釋結(jié)果。134.激活劑與抑制劑對(duì)酶活力的影響取3支試管，按下表編號(hào)后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。14四、操作步驟單位：mL試劑1230.5%淀粉333pH6.8緩沖液0.50.50.5