抗核抗體基本概念及對應臨床疾病概述教學講義

抗核抗體基本概念及臨床檢測1抗核抗體基本概念及對應臨床疾病概述教學講義5/8/2024傳統(tǒng)定義針對細胞核成分的自身抗體的總稱。廣義定義針對細胞內所有抗原成分的自身抗體的總稱。對ANA的理解不再局限于核成分，而是指核酸和核蛋白抗體的總稱靶抗原存在于包括細胞核、細胞漿、細胞骨架、細胞分裂結構等部位抗核抗體的定義2抗核抗體基本概念及對應臨床疾病概述教學講義5/8/2024ANA可見于多種疾病，特別是結締組織疾病，常作為結締組織病的診斷、病情判斷和療效觀察的指標在非結締組織病中也可出現陽性。正常人中（特別是老年人）也可出現陽性，但滴度低，并且常表現為IgM型高滴度ANA則高度提示自身免疫性疾病目前，ANA檢測已成為臨床上的一個極重要的自身免疫病的篩查實驗。ANA檢測的臨床意義3抗核抗體基本概念及對應臨床疾病概述教學講義5/8/2024系統(tǒng)性紅斑狼瘡活動期非活動期藥物誘導的紅斑狼瘡混合性結締組織?。∕CTD、Sharp綜合征）類風濕性關節(jié)炎進行性系統(tǒng)性硬化癥多發(fā)性肌炎及皮肌炎干燥綜合征慢性活動性肝炎潰瘍性結腸炎其它風濕病正常人95－10080－10010010020－4020－5085－9530－5070－8030－40265-10ANA檢測的臨床意義4抗核抗體基本概念及對應臨床疾病概述教學講義5/8/20245抗核抗體基本概念及對應臨床疾病概述教學講義5/8/2024ANA間接免疫熒光法篩查實驗6抗核抗體基本概念及對應臨床疾病概述教學講義5/8/2024間接免疫熒光法檢測ANA—基本原理間接免疫熒光法包被HEp-2細胞的基質玻片樣本中ANA-IgGFITC標記的抗人IgG抗體7抗核抗體基本概念及對應臨床疾病概述教學講義5/8/2024抗原譜完整(細胞核、細胞漿中近百種自身抗原)人源細胞，無種屬非特異熒光干擾腫瘤細胞，易于培養(yǎng)及商品化生產核質比大，可觀察到多種不同熒光核型ANA篩查的經典和標準基質:HEp-28抗核抗體基本概念及對應臨床疾病概述教學講義5/8/2024均質型核點型著絲點型核仁型Scl-70粗顆粒型細顆粒型核膜型.核糖體P蛋白線粒體型高爾基體溶酶體肌動蛋白波形蛋白基于Hep-2細胞為基質的ANA初篩實驗9抗核抗體基本概念及對應臨床疾病概述教學講義5/8/2024ANA間接免疫熒光法篩查試驗的實際價值初步甄別自身免疫性疾病患者（陰陽性結果）盡可能判斷熒光核型（縮小靶抗原確認實驗范圍）獲取抗體滴度信息（判斷病情進展、預后等）考慮到熒光法篩查試驗存在主觀性強的特點，因此應以一種客觀和現實的態(tài)度去面對篩查試驗結果10抗核抗體基本概念及對應臨床疾病概述教學講義5/8/2024幾個相對常見且重要的熒光核型均質型核點型著絲點型核仁型粗顆粒型核膜型.核糖體P蛋白線粒體型肌動蛋白常見且重要核型的標準核型表現相對典型陽性率相對較高靶抗原相對明確11抗核抗體基本概念及對應臨床疾病概述教學講義5/8/2024應重視ANA滴度的檢測抗體滴度的臨床意義1、明確界定自身免疫性疾病患者；2、作為疾病進程、臨床療效和病情預后及轉歸等的判斷指標當前國際主流ANA間接免疫熒光法檢測系統(tǒng)廣泛采用的起始稀釋度為1:40。即該檢測系統(tǒng)的正常參考范圍為1:40。梯度稀釋時的稀釋因子為1:2。HOB公司產品推薦按照1:80開展稀釋。12抗核抗體基本概念及對應臨床疾病概述教學講義5/8/2024熒光強弱及血清稀釋度熒光強弱判讀觀察標本的特異性熒光強度一般用“+”號表示?！啊睘闊o或僅見極微弱熒光；“+”為熒光較弱但清楚可見；“++”為熒光明亮；“+++”為耀眼的強熒光。臨床上根據特異性熒光強度達“+”以上判定為陽性抗體梯度稀釋起始稀釋：1:80梯度稀釋（稀釋因子2）1:1601:3201:6401:12801:2560…直至抗體轉陰13抗核抗體基本概念及對應臨床疾病概述教學講義5/8/2024各稀釋度的反應性抗體滴度臨床意義1:801:640陽性+—1:80陽性，需結合臨床表現綜合判斷陽性++—1:160陽性，提示可能存在相關疾病陽性++弱+1:320明確陽性，提示可能存在相關疾病陽性+++陽性+1:640中等陽性，提示可能存在相關疾病陽性+++陽性++1:1280強陽性，高度提示存在相關疾病陽性++++陽性+++1:2560極強的陽性，高度提示存在相關疾病。ANA熒光滴度判讀舉例14抗核抗體基本概念及對應臨床疾病概述教學講義5/8/2024HOB公司間接免疫熒光法產品系列產品系列基質檢測項目ANA篩查HEp-2細胞ANA各種不同核型dsDNA綠蠅短膜蟲抗dsDNA抗體AKA大鼠食管抗角蛋白抗體ANCA中性粒細胞乙醇和甲醛固定抗中性粒細胞胞漿抗體組織器官大鼠肝/腎/胃ASMA\PCA\AMA\LKM-1\LC-1HEp-2細胞產品系列（舉例）16×6孔10×10孔8×12孔15抗核抗體基本概念及對應臨床疾病概述教學講義5/8/2024ANA靶抗原確認實驗16抗核抗體基本概念及對應臨床疾病概述教學講義5/8/2024條帶酶免分析法檢測ANA—基本原理LIA檢測方法原理底物顏色反應硝酸纖維膜IgG抗體堿性磷酸酶標記的抗人IgG抗體17抗核抗體基本概念及對應臨床疾病概述教學講義5/8/2024ANA譜系列18抗核抗體基本概念及對應臨床疾病概述教學講義5/8/2024U1-nRNP和Sm抗原SLE:5-30%SLE:15-40%MCTD:95-100%功能:參與mRNA前體的剪切19抗核抗體基本概念及對應臨床疾病概述教學講義5/8/2024SS-A(Ro-60),Ro-52和SS-BAnti-SS-A(60kDa)干燥綜合征.: 40-95%SLE: 20-60%新生兒狼瘡: 96%Anti-SS-B干燥綜合征.: 40-95%SLE: 10-20%新生兒狼瘡: 78%Anti-Ro-52(52kDa)非特異功能:調控RNA翻譯功能:RNA聚合酶III輔助蛋白X20抗核抗體基本概念及對應臨床疾病概述教學講義5/8/2024Scl-70(DNA-拓撲異構酶I)功能:在DNA復制和轉錄過程中完成雙鏈解螺旋疾病: 硬化癥:50%-75%21抗核抗體基本概念及對應臨床疾病概述教學講義5/8/2024Anti-Scl-70特點局限型和彌散型硬化癥病中的陽性率分別為10%和48%?？筍cl-70抗體陽性的患者通常病情發(fā)展快、預后差、多器官累及。22抗核抗體基本概念及對應臨床疾病概述教學講義5/8/2024PM-Scl抗原:幾種多肽復合物(分子量間于20-100kDa)，主要的靶抗原為100kDa

相關疾病: 硬化癥: 2%-5%

肌炎: 8%

重疊綜合征: 24%

23抗核抗體基本概念及對應臨床疾病概述教學講義5/8/2024Jo-1抗原: 組氨酰tRNA合成酶(50kDa),

細胞漿中的磷蛋白

相關疾病: 多肌炎/皮肌炎的血清學標志，陽性率為25-35%，當 伴有肺間質纖維化的多肌炎，陽性率可高達70%。

24抗核抗體基本概念及對應臨床疾病概述教學講義5/8/2024著絲點抗原：動粒中的4種蛋白：A(17kDa),B(80kDa),C(140kDa),D蛋白(50kDa)。

著絲點蛋白B為主要的靶抗原

(與IIF：100%)

功能: 分裂期紡垂體的附著點

相關疾病: 硬化癥: 18%

局限型: 80%-95%

(CREST綜合征)

25抗核抗體基本概念及對應臨床疾病概述教學講義5/8/2024PCNA:細胞增殖相關核抗原I型抗原: DNA聚合酶δ的輔助蛋白發(fā)揮控制細胞周期的作用

相關疾病: 系統(tǒng)性紅斑狼瘡的特異性抗體，但其發(fā)生率僅為3%。

26抗核抗體基本概念及對應臨床疾病概述教學講義5/8/2024染色體結構示意圖DNA核小體染色體染色質組蛋白27抗核抗體基本概念及對應臨床疾病概述教學講義5/8/2024dsDNA抗原： 雙鏈DNA，天然DNA(脫氧核糖核酸骨架)

相關疾病：

dsDNA:

為SLE的診斷標準之一，陽性率為60-90%，不同的檢測方法診斷特異性差別較大。抗體滴度與疾病的活動性、狼瘡腎炎的發(fā)病風險具有相關性。28抗核抗體基本概念及對應臨床疾病概述教學講義5/8/2024組蛋白抗原: H1,H2A,H2B,H3,H4，H2A-H2B，H3-H4

(主要的靶抗原為H1和H2B)

相關疾病: 藥物誘導性LE:100%(抗組蛋白抗體是該病唯一的標志性抗體)

各種結締組織?。?SLE: 30-80%

SSc: 30%

SS:10%

29抗核抗體基本概念及對應臨床疾病概述教學講義5/8/2024核小體抗原: 組蛋白和DNA形成的復合物

相關疾病:

SLE：高特異性指標，陽性率為50-95%，特異性幾乎100%，抗核小體抗體可獨立于抗dsDNA抗體單獨出現，因而抗核小體抗體與抗dsDNA抗體聯合檢測，可提高SLE的血清學檢出率。30抗核抗體基本概念及對應臨床疾病概述教學講義5/8/202440S亞基60S亞基P0P1P1P2P2

抗原: 核糖體60S亞基中的3種蛋白質:

P0,P1,P2.具備相同的碳端抗原位點核糖體P蛋白相關疾病: SLE: 為SLE的高特異性指標，陽性率為5-15%，常見于神經狼瘡。31抗核抗體基本概念及對應臨床疾病概述教學講義5/8/2024AMA與AMA-M2靶抗原: