甲肝抗體IGM的檢測(cè)課件

黃艷甲型肝炎病毒IgM抗體的測(cè)定

(捕獲法)1甲肝抗體IGM的檢測(cè)課件5/9/2024酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA法）

將抗體(抗原)包被在固相表面后，按不同的步驟加入待測(cè)抗原(抗體)和酶標(biāo)抗體(抗原)，充分反應(yīng)后用洗滌的方法，使固相上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分離，洗去游離的酶標(biāo)抗體(抗原)，最后加入底物，根據(jù)酶對(duì)底物催化的顯色反應(yīng)程度，而對(duì)標(biāo)本中的抗原(抗體)進(jìn)行定性或定量。2甲肝抗體IGM的檢測(cè)課件5/9/2024

ELISA類型夾心法間接法測(cè)抗體競(jìng)爭(zhēng)法捕獲法3甲肝抗體IGM的檢測(cè)課件5/9/2024捕獲法測(cè)IgM抗體

血清中針對(duì)某些抗原的特異性IgM常和特異性IgG同時(shí)存在，后者會(huì)干擾IgM抗體的測(cè)定。因此測(cè)定IgM抗體多用捕獲法4甲肝抗體IGM的檢測(cè)課件5/9/2024包被抗體：用抗人μ鏈抗體包被固相載體上,形成固相抗人μ鏈;加入病人的血清標(biāo)本;加入特異性抗原試劑;，加入針對(duì)特異性抗原的酶標(biāo)抗體，加底物顯色．5甲肝抗體IGM的檢測(cè)課件5/9/2024免疫球蛋白的結(jié)構(gòu)基本結(jié)構(gòu)：四肽鏈結(jié)構(gòu)由兩條相同的輕鏈（LightChain）和兩條相同的重鏈（Heavychain）通過(guò)鏈間二硫鍵連結(jié)形成。分子式為：H2L2四條肽鏈兩端游離的NH2和COOH方向一致分別命名為N端和C端6甲肝抗體IGM的檢測(cè)課件5/9/2024（一）輕鏈和重鏈輕鏈（L鏈）κ鏈λ鏈輕鏈決定型別κ型λ型正常人κ：λ≈2：1重鏈（H鏈）:根據(jù)其抗原性的差異，人類Ig的H鏈分為

鏈

鏈

鏈

鏈

鏈重鏈決定Ig類別

IgG

IgA

IgM

IgD

IgE7甲肝抗體IGM的檢測(cè)課件5/9/2024捕獲法主要用于血清中某種抗體亞型成分（如IgM）的測(cè)定。8甲肝抗體IGM的檢測(cè)課件5/9/2024實(shí)驗(yàn)原理用抗人μ鏈抗體包被酶標(biāo)板，用以捕獲血清中IgM類抗體，然后用特異性HAVAg與IgM抗體結(jié)合，再加酶標(biāo)抗HAV抗體，最后加底物顯色，顯色深淺與HAVIgM的含量成正相關(guān)。9甲肝抗體IGM的檢測(cè)課件5/9/2024操作步驟

1．將微孔條固定在支架上，按順序編號(hào)。2．分別將待測(cè)標(biāo)本，陰、陽(yáng)性對(duì)照100μl（2滴）加入相應(yīng)的孔中，設(shè)空白對(duì)照孔。置37℃20分鐘。3．洗滌：甩去孔內(nèi)液體，用洗滌液注滿各孔，靜置5秒，共三次，每次洗后均需扣干。4．每孔加HA·Ag50μl，酶結(jié)合物50μl（空白對(duì)照除外），振蕩混勻，置37℃20分鐘。5．洗滌：重復(fù)上述36．顯色：每孔加顯色劑A液50μl，再加顯色劑B液50μl，振蕩混勻，置37℃15分鐘。7.每孔加終止液50μl10甲肝抗體IGM的檢測(cè)課件5/9/2024Cutoffvalue(臨界值)Cutoffvalue(臨界值)：陰陽(yáng)性判斷值，簡(jiǎn)稱CO值。夾心法：若S/CO值>1，為陽(yáng)性；

S/CO值<1，為陰性；競(jìng)爭(zhēng)抑制法：若S/CO值<1，為陽(yáng)性；

S/CO值>1，為陰性。11甲肝抗體IGM的檢測(cè)課件5/9/2024

要點(diǎn)：1.HAV的傳播途徑(糞—口)2.HAV的潛伏期(30天±2周)3.血清標(biāo)志物出現(xiàn)的規(guī)律4.免疫學(xué)檢測(cè)指標(biāo)—HAVAg

抗HAV總抗體抗HAV-IgM12甲肝抗體IGM的檢測(cè)課件5/9/2024臨床意義血清中抗HAVIgM出現(xiàn)于感染的早期(發(fā)病后數(shù)日)抗體的效價(jià)很快升到峰值并持續(xù)較長(zhǎng)時(shí)間(2-4周),經(jīng)1-2個(gè)月后抗體的效價(jià)和陽(yáng)性率明顯不降,于3個(gè)月后消失.因此抗HAVIgM陽(yáng)性,尤其是效價(jià)較高時(shí),表明處于感染的早期,被公認(rèn)為早期診斷甲肝的依據(jù),是區(qū)別是急性感染還是慢性感染的有力佐證。13甲肝抗體IGM的檢測(cè)課件5/9/202414甲肝抗體IGM的檢測(cè)課件5/9/202415甲肝抗體IGM的檢測(cè)