種子生活力測(cè)定的原理

第六章種子生活力測(cè)定的原理和方法一

、種子生活力的概念和測(cè)定意義二、

種子生活力四唑染色測(cè)定三、

種子生活力的其他測(cè)定方法11.06.2020

1第六章種子生活力測(cè)定的原理和方法一、種子生活力的概念和測(cè)定意義1、種子生活力(seed

viability)

的概念種子生活力是指種子發(fā)芽的潛在能力和種胚所具有的生命力。通常是指一批種子中具有生命力的種子數(shù)占種子總數(shù)的百分率。能發(fā)芽的種子暫時(shí)不能發(fā)芽而具有生命力的休眠種子11.06.2020

2第六章種子生活力測(cè)定的原理和方法2、

測(cè)定種子生活力的意義(1)休眠的種子必須進(jìn)行生活力測(cè)定(2)快速預(yù)測(cè)種子發(fā)芽能力二、

種子生活力四唑染色測(cè)定

(TTC

test

or

TZ

test)1、

發(fā)展簡(jiǎn)史●

1942年由德國(guó)H.Lakon

發(fā)明●

1950年ISTA

成立四唑測(cè)定技術(shù)委員會(huì)●

1953年ISTA

世界大會(huì)第一次將四唑測(cè)定列入國(guó)際種子檢驗(yàn)規(guī)程●《四唑測(cè)定手冊(cè)》

(Handbook

on

Tetrazolium

Test),Moore,

1984年，650多個(gè)屬和種●

1995年我國(guó)將四唑測(cè)定列入農(nóng)作物種子檢驗(yàn)規(guī)程第六章

種子生活力測(cè)定的原理和方法11.06.2020

4第六章

種子生活力測(cè)定的原理和方法2、

原理無(wú)色的的三苯基四氮唑被種子吸收后，在胚部活細(xì)胞中脫氫酶的作用下，還原成為紅色的、穩(wěn)定、不擴(kuò)散的三苯基甲

,這樣，就可根據(jù)染色的部位和深淺來(lái)區(qū)分種子紅色的有臘活力部分和無(wú)色的死亡部分。C!11.06.2020

53、

特

點(diǎn)>原理可靠結(jié)果準(zhǔn)確(與標(biāo)準(zhǔn)發(fā)芽率誤差一般不超過(guò)3-5%)不受休眠限制簡(jiǎn)便快速6

-

24h

Vitascope

20-30min>

成

本

低

廉第六章

種子生活力測(cè)定的原理和方法11.06.2020

64、

適應(yīng)范圍測(cè)定休眠種子的發(fā)芽潛力測(cè)定收獲后馬上要播種的種子的發(fā)芽潛力測(cè)定發(fā)芽緩慢的種子的發(fā)芽潛力測(cè)定發(fā)芽末期未發(fā)芽種子的生活力測(cè)定種子收獲或加工期間損傷種子的生活力解決發(fā)芽期間遇到的問(wèn)題查明種子貯藏期間劣變衰老程度時(shí)間緊迫，調(diào)種時(shí)快速測(cè)定種子生活力第六章種子生活力測(cè)定的原理和方法11.06.2020

7①

四氮唑：2,3,5-

氯(溴)化三苯基四氮唑(2,3,5-Triphenyl

Tetrazolium

Chloride

or

Bromide)稱

：四

唑或

紅

四

唑

縮寫：TTC,TTB,TZ△

理化性質(zhì)白色或淡黃色的粉劑，熔點(diǎn)243℃;

當(dāng)溫度達(dá)到245℃時(shí)就會(huì)分解，

易溶于水，具有微毒；◆

遇到直射光線時(shí)會(huì)被還原成粉紅色，√所以該試劑需用棕色瓶裝盛，并用黑紙外面包裝。

已配好的四唑溶液應(yīng)裝入棕色玻璃瓶里，存放在暗處?！?/p>

在進(jìn)行種子染色時(shí)，也許將其放在暗處和弱光處進(jìn)行。11.06.2020

8第六章

種子生活力測(cè)定的原理和方法5、

所需試劑簡(jiǎn)5、

所需試劑△

測(cè)

定

方

法●

建議使用0

.

1%～1

.

0%四唑鹽的水溶液切開(kāi)的種子用0.1%～0.5%濃度的四唑溶液；整個(gè)胚、整粒種子或斜切、橫切或穿刺的種子需用1.0%濃度的四唑溶液；>種子染色時(shí)間與四唑溶液濃度有關(guān)?！?/p>

濃度增加，染色反應(yīng)所需時(shí)間也隨之縮短，從染色效果看，以較低濃度為宜；●

測(cè)定時(shí)，要求四唑溶液的

ph

值在6～7范圍之內(nèi)。第六章種子生活力測(cè)定的原理和方法11.06.2020

95、

所需試劑△

配

制

方

法●

稱取1

g

四唑粉劑溶解于

100

ml

磷酸緩沖溶液中，即配成1.0%

四唑溶液；●

稱取0.1g

四唑粉劑溶解于100

ml

磷酸緩沖溶液中，即配成

0.1%四唑溶液；●

可

用

NaOH

或

NaHCO?

溶

液

調(diào)

節(jié)

ph

值

。第六章種子生活力測(cè)定的原理和方法11.06.2020

105、

所需試劑②

磷酸緩沖液ISTA

TZ手

冊(cè)

法母液

I:稱取9.078g

磷酸二氫鉀

(KH?PO?)溶解于1000ml

蒸餾水中；>

母液Ⅱ:

稱取9.472g

磷酸氫二鈉

(Na?HPO?)或11.876g

Na?HPO?·2H?O溶解于1000

ml

蒸餾水；>

然后取2

份母液I

和

3

份母液Ⅱ混合即成。AOSA

規(guī)

程

法>

在1000ml

蒸餾水中加入5.45g

NaH?PO?

和3.79g

Na?HPO?,

充分溶解即成。第六章種子生活力測(cè)定的原理和方法11.06.2020

115、

所需試劑③

乳酸苯酚透明液

用于小粒豆類種子或牧草種子，染色后種皮、釋殼或胚乳變?yōu)橥该?/p>

。④

過(guò)氧化氫溶液1.用于某些牧草種子(黑麥草)的預(yù)濕浸種，加快酶的活化和吸

脹

。⑤

殺菌劑和抗生素1.

延緩衰弱種子的劣變進(jìn)程。6

膠液硬化劑

11.06

有

0

紫

種

子

浸

種

后

，

種

皮

表

面

出

現(xiàn)

膠

液

而

變

得

非

常

光

滑p2

難以拿

牢

進(jìn)

行

樣

品

準(zhǔn)

備第六章種子生活力測(cè)定的原理和方法6、

測(cè)定程序(

1

)

預(yù)

處

理●

預(yù)措：

是指在種子預(yù)濕前除去種子外部的附屬物和在種子

非要害部位弄破種皮?！?/p>

預(yù)濕：為加快種子充分吸濕，軟化種皮，便于樣品準(zhǔn)備，以

提高染色的均勻度，通常種子在染色前要進(jìn)行預(yù)濕。第六章種子生活力測(cè)定的原理和方法11.06.2020

13●

預(yù)濕◆水浸快速預(yù)濕：適合于水稻、大豆和花生等作物種子◆紙床緩慢預(yù)濕：適合于蔥、

玉米和小麥等作物種子◎紙床預(yù)濕(小粒豆類種子)◎紙卷預(yù)濕(大豆、菜豆、豌豆)◆

H?O?

溶液浸種：

(為了加快種子吸脹和促進(jìn)酶的活化以及

縮短預(yù)濕時(shí)間)

0.3%,20～30℃,1

h

第六章種子生活力測(cè)定的原理和方法6、

測(cè)定程序(

1

)

預(yù)

處

理11.06.2020

14農(nóng)作物種子四唑染色技術(shù)規(guī)定(2)染色前的樣品準(zhǔn)備目

的：使四唑溶液快速和充分滲入種子全部活組織，加快染色反

應(yīng)，采用適當(dāng)方法使胚的主要構(gòu)造和活的營(yíng)養(yǎng)組織暴露出來(lái)。a)

不需預(yù)濕和附加準(zhǔn)備：

如苜蓿種子b)

采用緩慢預(yù)濕后不需樣品準(zhǔn)備：

如大豆種子等c)

穿刺或切開(kāi)胚乳：

小粒牧草等種子d)沿胚縱切：

水稻、玉米、和麥類等e)

近胚縱切：

松柏和傘形科等植物種子f)

上半?？v切：

萵苣和其他菊科等植物種子第六章

種子生活力測(cè)定的原理和方法11.06.2020

15(2)染色前的樣品準(zhǔn)備g)

切去種子基端：

茜草科等植物種子h)

斜切種子：

菊科、十字花科和薔薇科等i)橫切胚乳：

黑麥草、羊茅等植物種子j)

剝?nèi)シN皮：

矮牽牛、茶籽和棉花等植物種子k)剝開(kāi)胚乳取出胚：

杜仲等林木種子l)

橫切胚軸和盾片：

大麥和小麥等m)

從果實(shí)內(nèi)取出胚：

桃等n)橫切種子兩端：

山茱萸和胡頹子等o)

平切果種皮和胚乳，露出胚的構(gòu)造：

洋蔥和菠菜等植物種子第

六

章

種子生活力測(cè)定的原理和方法11.06.2020

161.禾谷類：通過(guò)胚和約在胚乳四

分

之

三

個(gè)

縱

切

2.燕麥屬：靠近胚部橫切3.牧草：通過(guò)胚乳末端部分橫切

和縱切4.牧草：種子剌穿胚乳5.萵苣屬：通過(guò)子葉末端一半縱切6.第5種方式進(jìn)行縱切時(shí)的解剖

刀部位7.傘形科：沿胚的旁邊縱切8.針葉樹：種子沿胚旁邊縱切9.兩端橫切，打開(kāi)胚腔，并切去小

部分胚乳.第六章

種子生活力測(cè)定的原理和方法11.06.2020

17●

將準(zhǔn)備好的種子樣品放入染色盤中，加入適宜濃度的四唑溶液完全淹沒(méi)種

子，移置于一定溫度的黑暗控溫設(shè)備內(nèi)或弱光下進(jìn)行染色反應(yīng)?！?/p>

所用染色時(shí)間因四唑溶液濃度、溫度、種子種類、樣品準(zhǔn)備方法等因素的

不同而異?！?/p>

在

20～45℃

范圍內(nèi)，溫度每增加5℃,

其染色時(shí)間可減少一半?！?/p>

達(dá)到規(guī)定時(shí)間或染色已很明顯時(shí)，倒去四唑溶液，用清水沖洗?！?/p>

已

達(dá)到規(guī)定時(shí)間，樣品的染色仍不夠充分，可適當(dāng)延長(zhǎng)染色時(shí)間，

以便證

實(shí)是由于四唑溶液滲入緩慢引起，還是由于種子本身的缺陷所引起的。第六章

種子生活力測(cè)定的原理和方法(3)染色溫度和時(shí)間11.06.2020

18農(nóng)作物種子四唑染色技術(shù)規(guī)定(4)鑒定前處理①

直接觀察，不需處理②

輕壓出胚，觀察鑒定③

扯開(kāi)營(yíng)養(yǎng)組織，暴露出胚④

切去一層營(yíng)養(yǎng)組織，暴露出胚和活的營(yíng)養(yǎng)組織

⑤

沿胚中軸縱切⑥

沿種子中線縱切⑦剝?nèi)グ胪该鞯姆N皮或種子組織⑧

剝?nèi)シN皮和殘余營(yíng)養(yǎng)組織⑨

切去切面碎片或掰開(kāi)子葉⑩

乳酸苯酚透明液的應(yīng)用(便于小粒種子觀察)第六章種子生活力測(cè)定的原理和方法11.06.2020

19(5)觀察鑒定①

目

標(biāo)

：●計(jì)算種子生活力百分率●按染色程度和組織特性，判斷種子活力強(qiáng)弱，并分級(jí)●查明種子劣變和生活力喪失的原因第六章種子生活力測(cè)定的原理和方法11.06.2020

20(5)觀察鑒定②

鑒定：●裸眼或在解剖鏡下逐個(gè)鑒定，分清健壯組織，衰弱活組織，衰弱死組織和死亡組織并綜合判斷種子活力第六章

種子生活力測(cè)定的原理和方法11.06.2020

21一般的鑒定原則：●

凡是胚的主要構(gòu)造及有關(guān)活營(yíng)養(yǎng)組織染成有光澤的鮮紅色，

且組織狀態(tài)正常的，為有活力種子●

凡是胚的主要構(gòu)造局部不染色或染色成異常的顏色和光澤，

并且活營(yíng)養(yǎng)組織不染成部分已超過(guò)二分之一，或超過(guò)允許范

圍且組織軟化的，為不正常種子●

凡完全不染色或染色成無(wú)光澤的淡紅色或灰白色，且組織已腐化、

蟲蛀、損傷、腐爛的，為死種子。●

各種植物的種子活力判別標(biāo)準(zhǔn)參照種子檢驗(yàn)規(guī)程。第六章種子生活力測(cè)定的原理和方法11.06.2020

22●水

稻

：凡是胚的主要構(gòu)造染成正常鮮紅色，或胚根尖

端2/3不染色而其他部分正常染色的種子為有生活力種

子?！?/p>

大

豆：凡是整個(gè)種子染成明亮紅色，或僅胚根尖端1/3

不染色，

或子葉表面有小范圍壞死，

或子葉頂端

1/3

不染色，為有生活力種子。第六章

種子生活力測(cè)定的原理和方法11.06.2020

23●計(jì)算各重復(fù)有生活力種子百分率，重復(fù)間誤差不得超過(guò)最大允許誤差●結(jié)果計(jì)算到近似整數(shù)第六章

種子生活力測(cè)定的原理和方法(6)計(jì)算和結(jié)果表示生活力測(cè)定重復(fù)間的最大容許差距11.06.2020

24號(hào)字第送驗(yàn)單位產(chǎn)地作物名稱代表數(shù)量品種名稱凈度分析凈種子，其他植物種

子

，雜質(zhì)，%其他植物種子的種類及數(shù)目：完全/有限/簡(jiǎn)化檢驗(yàn)雜質(zhì)的種類：發(fā)芽試驗(yàn)正常幼苗%硬實(shí)%新鮮不發(fā)芽種子%不正常幼苗%死種子%發(fā)芽

床

;

溫

度

;

試

驗(yàn)

持

續(xù)時(shí)間

;發(fā)芽前處理和方法純

度實(shí)

驗(yàn)

室

方

法

;品

種

純

度

_

%田間小區(qū)鑒定

;本品種

%;異品種

第

g水分水分_

%其他測(cè)定頁(yè)目生活力.

第

；重

量

(

千

粒

)

_

□健康狀況：種子檢驗(yàn)結(jié)果報(bào)告單復(fù)核員：填報(bào)日期：

年

月

曰種子檢驗(yàn)結(jié)果報(bào)告單檢驗(yàn)員(技術(shù)負(fù)責(zé)人):檢驗(yàn)單位(蓋章):4

5

6圖

6

-

2

1

大豆種子四唑測(cè)定結(jié)果的鑒定結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)1.

有發(fā)芽力，胚全部染成鮮紅色

2.有發(fā)芽力，僅子葉遠(yuǎn)離胚芽部分少量未染色3.發(fā)芽力，僅子葉下部和邊緣少許不染色4.無(wú)發(fā)芽力，子葉上重要部位未染色5.無(wú)發(fā)芽力，胚根主要部位不染色6.無(wú)發(fā)芽力，子葉一半以上未染色，或破裂，或胚根和胚芽已死亡等(Samuel,H.G.1974)2

3No.1GERMINABLE.Seed

completely

stained..2-4

GERMINABLE

Mi

sstaaiinneed

a

c

l

.tion

of

radiclehypocotylaxis.No.9

y

c-

t

lR

x

.ABLE.Unstained

area

near

point

of

attachment

of

cotyledonsrsonpoeredptuoareaonreas

onnornor..5osandradicle-hypocotylaxisoverlocationwhereplumuledevelops.No.10NON-GERMINABLE.Radicle-hypocotylaxisbisectedbyunstainedarea.No.11NON-GERMINABLE.Unstained

areas

on

radicle-hypocotyl

axis

and

at

pointof

attachment

of

cotyledons

to

axis.No.12NON-GERMINABLE.Morethanone-half

of

cotyledonarytissueunstained.No.13NON-GERMINABLE.Radicle-hypocotylaxisunstained.No.14Ot

tI

eAd

o.

eed

stained

off

color,grayish-red,orange-red

or

glassyrSoLcBnsparen-GERMraNorNFigure

6.4

N

raz

i

tion

for

clover

seeds.

Black