大腸桿菌的培養(yǎng)與分離課件

實驗1.

大腸桿菌的培養(yǎng)與分離2024/5/11蒼南中學許允文2微生物病毒細菌放線菌真菌原生生物原核細胞真核細胞非細胞結構特點：結構簡單,形體微小.通常要用光學顯微鏡或電子顯微鏡才能看到，有的甚至沒有細胞結構.一、基礎知識:1.微生物的種類:2024/5/11蒼南中學許允文3關于大腸桿菌:革蘭氏染色：代謝類型：主要分布：危害：應用：革蘭氏陰性菌（不著色）異養(yǎng)兼性厭氧型腸道一般無害，少數(shù)有害是基因工程中的主要受體菌之一2核糖體1閱讀P18-192024/5/11蒼南中學許允文42.微生物的培養(yǎng):1)培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分:2)培養(yǎng)基的種類:碳源氮源水分無機鹽生長因子按物理性質分液體培養(yǎng)基:擴大培養(yǎng)固體培養(yǎng)基:分離、鑒定、純化按功能分普通培養(yǎng)基：選擇培養(yǎng)基：篩選鑒別培養(yǎng)基：鑒定含氨卞青霉素的培養(yǎng)基伊紅——美藍培養(yǎng)基2024/5/11蒼南中學許允文53.細菌的分離:原理:

不同的細胞具有不同的菌落特征;

有些微生物對抗生素、高鹽等具有抗性的特點。方法:

劃線法、涂布法選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)2024/5/11蒼南中學許允文6二、大腸桿菌的培養(yǎng)與分離實驗目的:1、進行大腸桿菌的擴增，利用______培養(yǎng)基進行細菌培養(yǎng)操作。2、進行大腸桿菌的分離，利用______培養(yǎng)基進行細菌的劃線培養(yǎng)。3、說明大腸桿菌培養(yǎng)的條件和操作要求的原理。液體固體2024/5/11蒼南中學許允文7一、配制培養(yǎng)基，調整pH并滅菌，倒平板備用。按一定營養(yǎng)比例配制培養(yǎng)基+瓊脂，融化調整pH

滅菌倒平板、擱斜面細菌:中性偏堿霉菌:中性偏酸1、放走冷空氣；2、滅菌鍋壓力與大氣壓相同時才能打開。2024/5/11蒼南中學許允文8倒平板、擱置斜面待培養(yǎng)基冷卻到50℃左右時，在酒精燈附近倒平板。凝固后，倒置放置思考：如何鑒定滅菌是否徹底？放入培養(yǎng)箱中，2d后觀察平板是否有菌落生成2024/5/11蒼南中學許允文9二、接種、擴大培養(yǎng)1、擴大培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基是？2、接種的場所是？3、為何要等接種環(huán)冷卻后，再取菌體？2024/5/11蒼南中學許允文10三、劃線分離1、第2、3、4級劃線前是否都要對接種環(huán)進行滅菌？2、下級劃線開始于上一級劃線的起始端還是末端？2024/5/11蒼南中學許允文112024/5/11蒼南中學許允文12四、培養(yǎng)將接種后的培養(yǎng)皿放入恒溫箱內，在37℃下倒置培養(yǎng)12-24h。平板稀釋涂布法平板劃線法2024/5/11蒼南中學許允文13平板劃線分離法用途：一般多用于從菌種的純化；

優(yōu)點：可以觀察菌落特征，對混合菌進行分離；

缺點：不能計數(shù)稀釋涂布平板法

用途：一般多用于篩選菌株。一般用于平板培養(yǎng)基的回收率計數(shù)。

優(yōu)點：可以計數(shù)，可以觀察菌落特征。

缺點：吸收量較少，較麻煩，平板不干燥效果不好，容易蔓延。如果菌液密度大的話，長不出單菌落。

2024/5/11蒼南中學許允文14五、純化與保存1、如何進一步純化菌種？

2、如何保存菌種？2024/5/11蒼南中學許允文151.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度？問題討論

答：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進行倒平板了。

答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。2024/5/11蒼南中學許允文163.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？4.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿壁的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？

答：可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成菌落的細菌隨水而擴散，得不到單細胞菌落；防止雜菌污染。

答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿壁的培養(yǎng)基上滋生而造成污染，因此最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物。2024/5/11蒼南中學許允文175.如何操作才可以盡量避免被雜菌污染？6.在培養(yǎng)后如何判斷是否有雜菌污染？7.實驗完成后，接觸過細菌的器皿應如何處理？操作快捷,減少操作時間;滅菌要徹底,降低環(huán)境污染幾率;注意微生物生長條件,如pH、滲透壓、溫度等。是否有不同形態(tài)的菌落；用顯微鏡鏡檢細胞、孢子、芽孢等形態(tài)。高壓蒸氣滅菌2024/5/11蒼南中學許允文188、轉基因用的質粒通常加入了如抗氨芐青霉素基因。轉基因質粒轉化進入大腸桿菌后，能在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基中生長，而未被轉化的就不能生長，其他沒有抗氨芐青霉素基因的雜菌與不能生長。如何分離轉基因工程菌，并保證不被普通的大腸桿菌污染？將菌種接種在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。2024/5/11蒼南中學許允文191、高壓蒸氣滅菌2、灼燒滅菌3、紫外線滅菌4、過濾（去除雜菌）思考：滅菌與消毒有何區(qū)別？滅菌的方法：消毒：利用化學或物理方法，殺死大部份致病微生物的過程。滅菌:以化學劑或物理方法消滅所有微生物，包括