HYT 259-2018 海洋生物體中六溴環(huán)十二烷的測定 高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

海洋生物體中六溴環(huán)十二烷的測定高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法Determinationofhexabromocyclododecanesinmarineorganisms—2018-07-30發(fā)布中華人民共和國自然資源部發(fā)布 I 2規(guī)范性引用文件 3方法原理 4試劑或材料 5儀器設備 26樣品 27試驗步驟 28試驗數(shù)據(jù)處理 49精密度 510靈敏度 附錄A(資料性附錄)六溴環(huán)十二烷標準溶液色譜圖和質(zhì)譜圖 6附錄B(資料性附錄)海洋生物體中六溴環(huán)十二烷分析記錄表 I本標準按照GB/T1.1—2009給出的規(guī)則起草。本標準由中華人民共和國自然資源部提出。本標準由全國海洋標準化技術(shù)委員會海洋環(huán)境保護分技術(shù)委員會(SAC/TC283/SC1)歸口。本標準主要起草單位：浙江省海洋水產(chǎn)研究所、浙江省海洋監(jiān)測預報中心。本標準主要起草人：張小軍、嚴忠雍、陳雪昌、方益、張帥、孫秀梅、郭遠明、陳思、梅光明、李佩佩、李鐵軍、宋俐俐。1海洋生物體中六溴環(huán)十二烷的測定高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法1范圍本標準規(guī)定了采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定海洋生物體中六溴環(huán)十二烷(HBCD)的方法原本標準適用于海洋生物體中α-HBCD、β-HBCD和γ-H2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法GB17378.2海洋監(jiān)測規(guī)范第2部分：數(shù)據(jù)處理與分析質(zhì)量控制GB17378.3—2007海洋監(jiān)測規(guī)范第3部分：樣品采集、貯存與運輸3方法原理海洋生物體中的六溴環(huán)十二烷經(jīng)正己烷提取后，旋蒸濃縮經(jīng)硅膠固相萃取柱凈化，氮氣吹干用甲醇定容，通過高效液相色譜柱分離，以甲醇、乙腈和水為流動相進行洗脫，用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測4試劑或材料4.1除非另有說明，本標準所用試劑均為分析純，水符合GB/T664.2正己烷(C?H??):色譜純。4.5二氯甲烷(CH?Cl?):色譜純。4.6六溴環(huán)十二烷(HBCD)單標儲備液：標準物質(zhì)，α-HBCD、β-HBCD、γ-HBCD質(zhì)量濃度均為4.7六溴環(huán)十二烷同位素(l3C-HBCD)單標儲備液：標準物質(zhì)，3C-a-HBCD、3C-β-HBCD、13C-y-4.8六溴環(huán)十二烷混合標準中間液：分別準確移取0.50mLa-HBCD、β-HBCD、γ-HBCD標準溶液(4.6),用甲醇稀釋至50.00mL,配成α-HBCD、β-HBCD、γ-HBCD質(zhì)量濃度均為1.00μg/4.9六溴環(huán)十二烷混合標準使用液：準確移取1.00mL六溴環(huán)十二烷混合標準中間液(4.8),用甲醇稀2釋至10.00mL,α-HBCD、β-HBCD、γ-HBCD質(zhì)量濃度均為100ng/mL的混合溶液，4℃冷藏保存，有效期1個月。4.10六溴環(huán)十二烷混合內(nèi)標中間液：分別準確移取1.00mL3C-a-HBCD、3C-β-HBCD、13C-γ-HBCD內(nèi)標溶液(4.7),用甲醇稀釋至50.00mL,配成l3C-a-HBCD、I3C-β-HBCD、I3C-γ-HBCD質(zhì)量濃度均為1.00μg/mL的混合內(nèi)標溶液，4℃冷藏保存，有效期6個月。4.11六溴環(huán)十二烷混合內(nèi)標使用液：準確移取1.00mL六溴環(huán)十二烷混合內(nèi)標中間液(4.10),用甲醇稀釋至10.00mL,13C-a-HBCD、13C-β-HBCD、I3C-γ-HBCD質(zhì)量濃度均為100ng/mL的混合內(nèi)標溶液，4℃冷藏保存，有效期1個月。5儀器設備5.1高效液相色譜-串聯(lián)四級桿質(zhì)譜儀：配備電噴霧(ESI)離子源。5.2色譜柱：1C柱100mm×2.1mm,1.7μm,或者其他性能相當?shù)纳V柱。5.3硅膠固相萃取柱：6mL,含1000mg硅膠。5.5旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。5.6高速離心機：轉(zhuǎn)速不少于4000r/min。5.8有機相微孔濾膜：孔徑0.22μm。5.9固相萃取裝置。5.10氮氣吹干儀。5.11渦旋混合器：轉(zhuǎn)速不少于1500r/min。6樣品海洋生物體樣品的采集、預處理、制備和保存，按GB17378.3—2007中第6章的有關規(guī)定執(zhí)行。7試驗步驟稱取5.00g(準確到0.01g)均質(zhì)后的待測樣品，置于50mL離心管中，加入100μL內(nèi)標標準使用液(4.11),再加入15mL正己烷(4.2),渦旋振蕩1min,超聲振蕩10min后，6000r/min離心5min,將上清液轉(zhuǎn)移至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶；殘渣用15mL正己烷(4.2)按上述方法再提取一次，所得上清液合并至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶，在40℃水浴條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至近干，加入5mL正己烷(4.2)溶解，超聲振蕩1min備用。移取提取液加至已用5mL正己烷(4.2)活化后的硅膠柱固相萃取柱上，先用2mL正己烷(4.2)淋洗，再用5mL二氯甲烷(4.5)洗脫，洗脫流速為1.0mL/min,用15mL離心管收集洗脫液，洗脫液于40℃氮氣吹干，加1.00mL甲醇(4.3),旋渦振蕩1min,經(jīng)0.22μm有機相微孔濾膜過濾后分析。3除不加樣品外，按7.1和7.2的步驟進行前處理，將處理后的待測液用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀按7.5步驟進行測定。7.4標準曲線的制備及測定100μL13C-HBCD混合內(nèi)標使用液(4.11),用甲醇溶液稀釋至1.00mL,得到濃度0ng/mL、1.00ng/mL、5.00ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/mL、50.0ng/mL系列標準工作液，標準工作液中的內(nèi)標物濃度均為10.0ng/mL。按7.5步驟測定。宜參照下述儀器分析條件測定：——流動相：A:純水，B:甲醇乙腈溶液(甲醇：乙腈=4:6,體積比),流動相梯度洗脫程序見表1;——掃描方式：選擇反應監(jiān)測，選擇反應監(jiān)測母離子、子離子和碰撞能量見表2;表1流動相梯度洗脫程序時間/min0表2選擇反應監(jiān)測母離子、子離子和碰撞電壓V4表2(續(xù))Va為定量碎片離子。8試驗數(shù)據(jù)處理的相對偏差不大于5%;樣品特征離子的相對豐度與濃度相當標準溶液的相對豐度偏差參見表3。六溴環(huán)十二烷標準溶液的特征離子質(zhì)量色譜圖及質(zhì)譜全掃描圖參見附錄A。表3離子相對豐度要求59精密度本方法的回收率在70%～120%,海洋生物體中α-HBCD的重復性標準差不大于0.66pg/kg,重復性相對標準偏差不大于5.0%;再現(xiàn)性標準差不大于1.19μg/kg,再現(xiàn)性相對標準偏差不大于6.0%;相對誤差不大于19.2%。海洋生物體中β-HBCD的重復性標準差不大于1.20μg/kg,重復性相對標準偏差不大于5.6%;再現(xiàn)性標準差不大于1.68μg/kg,再現(xiàn)性相對標準偏差不大于8.4%;相對誤差不大于19.8%。海洋生物體中γ-HBCD的重復性標準差不大于1.47μg/kg,重復性相對標準偏差不大于7.0%;再現(xiàn)性標準差不大于1.47μg/kg,再現(xiàn)性相對標準偏差不大于9.3%;相對誤差不大于19.9%。10靈敏度a-HBCD、β-HBCD和γ-HBCD的定量限均為0.20μg/kg。6(資料性附錄)六溴環(huán)十二烷標準溶液色譜圖和質(zhì)譜圖是是&圖A.1六溴環(huán)十二烷標準溶液(20ng/mL)特征離子質(zhì)量色譜圖圖A.2六溴環(huán)十二烷質(zhì)譜掃描圖(資料性附錄)海洋生物體中六溴環(huán)十二烷分析記錄表表B.1海洋生物體中六溴環(huán)十二烷分析記錄表g測定濃度C;樣品含量X;1)樣品濃度計算公式為X;——樣品中α-HBCD、β-HBCD和γ-HBCD的含量，單位為微克每千克(