DB32-T 3306-2017藍(lán)莓組培脫毒種苗生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

ICS65.020.20

B61

備案號(hào)：56880-2017DB32

江蘇省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB32/T3306—2017

藍(lán)莓組培脫毒種苗生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

TechniqueregulationfortheVirus-freeplantletproductionofBlueberry

2017-09-25發(fā)布2017-10-25實(shí)施

江蘇省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布

DB32/T3306—2017

藍(lán)莓組培脫毒種苗生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了藍(lán)莓組培脫毒種苗生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程的脫毒、外植體消毒、初代培養(yǎng)、病毒檢測(cè)、繼代培

養(yǎng)、壯苗培養(yǎng)、馴化生根、上缽、苗期管理、生產(chǎn)記錄等。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于全省藍(lán)莓組培脫毒種苗的生產(chǎn)。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

GB/T8321(所有部分)農(nóng)藥合理使用準(zhǔn)則

3脫毒

3.1母株

選擇具有品種典型特征特性、生長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)、目測(cè)無(wú)病癥的優(yōu)良單株。

3.2熱處理鈍化病毒

取母株的側(cè)枝嫩梢，放入病毒鈍化處理器，60℃熱擊10s。

4外植體消毒

將經(jīng)熱處理的嫩梢剪取放入燒杯，紗布封口，自來(lái)水沖洗30min～60min，用75%乙醇浸潤(rùn)130s后，

用無(wú)菌水洗凈，再放入5%～10%的NaClO溶液中浸泡10min～15min后，用無(wú)菌水沖洗5次，再用無(wú)菌

濾紙吸去表面水分，置于無(wú)菌培養(yǎng)皿中備用。

5初代培養(yǎng)

5.1初代培養(yǎng)基

WPM+IBA0.05mg/L+ZT0.5mg/L，pH5.0。

5.2接種

在超凈工作臺(tái)上，用已滅菌的剪刀、鑷子將消過(guò)毒的外植體均勻分成1.5cm～2.0cm的小段，每段

含1芽～2芽，接種于初代培養(yǎng)基中，每瓶5株～10株。注明品種、編號(hào)和接種日期。

5.3培養(yǎng)條件

1

DB32/T3306—2017

溫度25℃±2℃、光照強(qiáng)度2000lx～3000lx、光照時(shí)間16h/d，培養(yǎng)100d～120d。

6病毒檢測(cè)

抽取初代培養(yǎng)的藍(lán)莓無(wú)菌苗進(jìn)行藍(lán)莓枯焦病毒(BLScV)、藍(lán)莓急性壞死病毒(BLShV)、藍(lán)莓鞋帶病

毒(BSSV)、藍(lán)莓紅環(huán)斑病毒(BRRV)、藍(lán)莓壞死環(huán)斑病煙草環(huán)斑病毒(TRSV)、藍(lán)莓葉片斑點(diǎn)病毒(BLMV)

的病毒檢測(cè)。檢測(cè)方法采用PCR/RT-PCR。無(wú)病毒苗作為核心種苗繼代擴(kuò)繁培養(yǎng)。

7繼代培養(yǎng)

7.1繼代培養(yǎng)基

WPM+NAA0.5mg/L+ZT1mg/L，pH5.0。

7.2培養(yǎng)條件

溫度為25℃±2℃，光照強(qiáng)度1000lx～3000lx，光照時(shí)間12h/d～16h/d。60d～90d培養(yǎng)一代，培養(yǎng)不

超過(guò)15代。

8壯苗培養(yǎng)

8.1壯苗培養(yǎng)基

WPM+IBA0.1mg/L，pH5.0～5.5。

8.2培養(yǎng)條件

溫度為25℃±2℃，光照強(qiáng)度2000lx～3000lx，光照時(shí)間14h/d～16h/d。培養(yǎng)90d～120d。

9馴化生根

9.1生根設(shè)施

在苗床上搭建高度50cm的小拱棚，安裝噴灌設(shè)備，苗床上面鋪一層無(wú)紡布，拱棚上面覆蓋塑料薄

膜，上蓋遮陽(yáng)網(wǎng)。

9.2基質(zhì)

選用苔蘚作為專用基質(zhì)，浸泡12h甩干，濕度控制在40%～60%，塞進(jìn)5×10的穴盤(pán)內(nèi)。

9.3煉苗

將培養(yǎng)瓶放入溫室內(nèi)，上蓋一層遮陽(yáng)網(wǎng)，封口煉苗7d,然后打開(kāi)遮陽(yáng)網(wǎng)，把瓶蓋擰松，再煉苗7d。

9.4扦插

選擇生長(zhǎng)健壯、長(zhǎng)度5cm以上、木質(zhì)化程度好的組培苗進(jìn)行扦插，先用清水清洗掉培養(yǎng)基，剪去根

部膨大部分，去掉下部三分之一的葉片，在萘乙酸(NAA)1000mg/L的生根液中浸蘸1min，然后用鑷子

捏住插穗基部，插入塞好苔蘚的穴盤(pán)內(nèi)壓緊。每穴1株，插入的深度為2cm～3cm。

2

DB32/T3306—2017

9.5插后管理

插后立即噴水1次。15d內(nèi)每天葉面噴水2次～3次，相對(duì)濕度控制在80%～100%，15d后開(kāi)始生根并

長(zhǎng)出新葉，每天噴水1次，濕度控制在70%左右，30d后去掉拱棚上的遮陽(yáng)網(wǎng)和塑料薄膜，濕度控制在

60%左右。溫度控制在20℃～30℃。

10上缽

10.1栽培容器

選用13×12黑色軟質(zhì)營(yíng)養(yǎng)缽為宜。

10.2栽培基質(zhì)

壤土、草碳土、腐鋸末按3:1:1的體積比例混合，加入硫磺粉均勻混拌。1m3基質(zhì)使用硫磺粉0.75kg～

1kg將基質(zhì)pH值調(diào)至4.5～5.5。

10.3上缽時(shí)間

須根長(zhǎng)至3cm，苗高超過(guò)10cm時(shí)進(jìn)行上缽移植。

10.4上缽移植

先裝填基質(zhì)至營(yíng)養(yǎng)缽的1/3處，然后把苗從穴盤(pán)內(nèi)取出放到營(yíng)養(yǎng)缽的中央扶正，再把四周填滿基質(zhì)，

稍用力壓緊，使基質(zhì)低于營(yíng)養(yǎng)缽上沿2CM～3cm。每缽一株，澆透水。

11苗期管理

11.1溫濕度管理

白天溫度25℃～30℃，夜間不低于13℃，基質(zhì)溫度不低于15℃，基質(zhì)含水量在50%～60%。

11.2水肥管理

緩苗期保持基質(zhì)濕潤(rùn)；速生期應(yīng)量多次少，見(jiàn)干見(jiàn)濕；生長(zhǎng)后期要控制澆水。速生期以氮肥為主，

磷、鉀肥為輔；生長(zhǎng)后期停止使用氮肥，適當(dāng)增加磷、鉀肥。追肥結(jié)合澆水進(jìn)行，濃度控制在0.1%～

0.2%。速生期每月施3次。

11.3病蟲(chóng)害防治

貫徹預(yù)防為主，綜合防治的方針，選用生物農(nóng)藥、高效、低毒、低殘留的化學(xué)農(nóng)藥，交替用藥，改

進(jìn)施藥技術(shù)，降低農(nóng)藥用量，化學(xué)農(nóng)藥按GB/T8321的規(guī)定執(zhí)行。

11.4其他管理

育苗期發(fā)現(xiàn)容器內(nèi)基質(zhì)下沉，及時(shí)填滿，經(jīng)常挪動(dòng)容器進(jìn)行重新排列并截?cái)嗌斐鋈萜魍獾母怠?/p>

12生產(chǎn)記錄

做好全程記錄，并將記錄保持2年。

3

DB32/T3306—2017

__________________________

4

DB32/T3306—2017

前??言

本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1-2009《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)及編寫(xiě)》給出的規(guī)則編寫(xiě)。

本標(biāo)準(zhǔn)由江蘇農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院提出并歸口。

本標(biāo)準(zhǔn)由江蘇農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院起草。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：王永平、宗樹(shù)斌、劉玉華、許建民、王珊、任煥煥。

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藍(lán)莓組培脫毒種苗生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了藍(lán)莓組培脫毒種苗生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程的脫毒、外植體消毒、初代培養(yǎng)、病毒檢測(cè)、繼代培

養(yǎng)、壯苗培養(yǎng)、馴化生根、上缽、苗期管理、生產(chǎn)記錄等。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于全省藍(lán)莓組培脫毒種苗的生產(chǎn)。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

GB/T8321(所有部分)農(nóng)藥合理使用準(zhǔn)則

3脫毒

3.1母株

選擇具有品種典型特征特性、生長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)、目測(cè)無(wú)病癥的優(yōu)良單株。

3.2熱處理鈍化病毒

取母株的側(cè)枝嫩梢，放入病毒鈍化處理器，60℃熱擊10s。

4外植體消毒

將經(jīng)熱處理的嫩梢剪取放入燒杯，紗布封口，自來(lái)水沖洗30min～60min，用75%乙醇浸潤(rùn)130s后，

用無(wú)菌水洗凈，再放入5%～10%的NaClO溶液中浸泡10min～15min后，用無(wú)菌水沖洗5次，再用無(wú)菌

濾紙吸去表面水分，置于無(wú)菌培養(yǎng)皿中備用。

5初代培養(yǎng)

5.1初代培養(yǎng)基

WPM+IBA0.05mg/L+ZT0.5mg/L，pH5.0。

5.2接種

在超凈工作臺(tái)上，用已滅菌的剪刀、鑷子將消過(guò)毒的外植體均勻分成1.5cm～2.0cm的小段，每段

含1芽～2芽，接種于初代培養(yǎng)基中，每瓶5株～10株。注明品種、編號(hào)和接種日期。

5.3培養(yǎng)條件

1

DB32/T3306—2017

溫度25℃±2℃、光照強(qiáng)度2000lx～3000lx、光照時(shí)間16h/d，培養(yǎng)100d～120d。

6病毒檢測(cè)

抽取初代培養(yǎng)的藍(lán)莓無(wú)菌苗進(jìn)行藍(lán)莓枯焦病毒(BLScV)、藍(lán)莓急性壞死病毒(BLShV)、藍(lán)莓鞋帶病

毒(BSSV)、藍(lán)莓紅環(huán)斑病毒(BRRV)、藍(lán)莓壞死環(huán)斑病煙草環(huán)斑病毒(TRSV)、藍(lán)莓葉片斑點(diǎn)病毒(BLMV)

的病毒檢測(cè)。檢測(cè)方法采用PCR/RT-PCR。無(wú)病毒苗作為核心種苗繼代擴(kuò)繁培養(yǎng)。

7繼代培養(yǎng)

7.1繼代培養(yǎng)基

WPM+NAA0.5mg/L+ZT1mg/L，pH5.0。

7.2培養(yǎng)條件

溫度為25℃±2℃，光照強(qiáng)度1000lx～3000lx，光照時(shí)間12h/d～16h/d。60d～90d培養(yǎng)一代，培養(yǎng)不

超過(guò)15代。

8壯苗培養(yǎng)

8.1壯苗培養(yǎng)基

WPM+IBA0.1mg/L，pH5.0～5.5。

8.2培養(yǎng)條件

溫度為25℃±2℃，光照強(qiáng)度2000lx～3000lx，光照時(shí)間14h/d～16h/d。培養(yǎng)90d～120d。

9馴化生根

9.1生根設(shè)施

在苗床上搭建高度50cm的小拱棚，安裝噴灌設(shè)備，苗床上面鋪一層無(wú)紡布，拱棚上面覆蓋塑料薄

膜，上蓋遮陽(yáng)網(wǎng)。

9.2基質(zhì)

選用苔蘚作為專用基質(zhì)，浸泡12h甩干，濕度控制在40%～60%，塞進(jìn)5×10的穴盤(pán)內(nèi)。

9.3煉苗

將培養(yǎng)瓶放入溫室內(nèi)，上蓋一層遮陽(yáng)網(wǎng)，封口煉苗7d,然后打開(kāi)遮陽(yáng)網(wǎng)，把瓶蓋擰松，再煉苗7d。

9.4扦插

選擇生長(zhǎng)健壯、長(zhǎng)度5cm以上、木質(zhì)化程度好的組培苗進(jìn)行扦插，先用清水清洗掉培養(yǎng)基，剪去根

部膨大部分，去掉下部三分之一的葉片，在萘乙酸(NAA)1000mg/L的生根液中浸蘸1min，然后用鑷子

捏住插穗基部，插入塞好苔蘚的穴盤(pán)內(nèi)壓緊。每穴1株，插入的深度為2cm～3cm。

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DB32/T3306—2017

9.5插后管理

插后立即噴水1次。15d內(nèi)每天葉面噴水2次～3次，相對(duì)濕度控制在80%～100%，15d后開(kāi)始生根并

長(zhǎng)出新葉，每天噴水1次，濕度控制在70%左右，30d后去掉拱棚上的遮陽(yáng)網(wǎng)和塑料薄膜，濕度控制在

60%左右。溫度控制在20℃～30℃。

10上缽

10.1栽培容器

選用13×12黑色軟質(zhì)營(yíng)養(yǎng)缽為宜。

10.2栽培基質(zhì)