巖溶濕地水生態(tài)環(huán)境監(jiān)測技術(shù)規(guī)程

1巖溶濕地水生態(tài)環(huán)境監(jiān)測技術(shù)規(guī)程本文件確立了巖溶濕地水生態(tài)環(huán)境監(jiān)測的程序，界定了所涉及的術(shù)語和定義，規(guī)定了背景調(diào)查、監(jiān)測、監(jiān)測報告編制、質(zhì)量控制等階段的操作指示，提出了檔案管理的方法。本文件適用于巖溶濕地水生態(tài)環(huán)境監(jiān)測。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB3838地表水環(huán)境質(zhì)量標(biāo)準GB/T5750.4生活飲用水標(biāo)準檢驗方法感官性狀和物理指標(biāo)GB/T8170數(shù)值修約規(guī)則與極限數(shù)值的表示和判定GB/T11893水質(zhì)總磷的測定鉬酸銨分光光度法GB/T11894水質(zhì)總氮的測定堿性過硫酸鉀消解紫外分光光度法GB/T11901水質(zhì)懸浮物的測定重量法GB/T11907水質(zhì)銀的測定火焰原子吸收分光光度法GB/T13200水質(zhì)濁度的測定GB/T50138水位觀測標(biāo)準GB50179河流流量測驗規(guī)范DZ/T0064.49地下水質(zhì)分析方法第49部分：碳酸根、重碳酸根和氫氧根離子的測定滴定法HJ8.2生態(tài)環(huán)境檔案管理規(guī)范生態(tài)環(huán)境監(jiān)測HJ/T166土壤環(huán)境監(jiān)測技術(shù)規(guī)范HJ/T399水質(zhì)化學(xué)需氧量的測定快速消解分光光度法HJ493水質(zhì)采樣樣品的保存和管理技術(shù)規(guī)定HJ495水質(zhì)采樣方案設(shè)計技術(shù)規(guī)定HJ505水質(zhì)五日生化需氧量（BOD5）的測定稀釋與接種法HJ536水質(zhì)氨氮的測定水楊酸分光光度法LY/T2898濕地生態(tài)系統(tǒng)定位觀測技術(shù)規(guī)范3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1巖溶濕地karstwetland巖溶地區(qū)的一種特殊的濕地類型，包括巖溶湖泊/河流水系和沼澤地等。3.2巖溶濕地水生態(tài)aquaticecologyofkarstwetland介于水、陸生態(tài)系統(tǒng)之間的一類生態(tài)單元。濕地生物群落與其相互作用的地理環(huán)境所構(gòu)成的自然系統(tǒng)。其生物群落由水生和陸生種類組成，物質(zhì)循環(huán)、能量流動和物種遷移與演變活躍，具有較高的生態(tài)多樣性、物種多樣性和生物生產(chǎn)力。24背景調(diào)查4.1背景調(diào)查指標(biāo)包括：巖溶濕地地理位置、巖溶濕地面積、水域面積、植被面積、水體總量、地表徑流量、年排入量、降雨量、蒸發(fā)量，溝塘、沼濕地與地下水的交換量、供給水量等。4.2巖溶濕地地理位置、巖溶濕地面積、水域面積、植被面積等指標(biāo)，可利用遙感衛(wèi)星圖片進行解析，結(jié)合地形圖、野外調(diào)查以及現(xiàn)有資料查詢，按下列步驟獲取數(shù)據(jù)：a)獲取衛(wèi)星遙感資料：根據(jù)不同實際需求及各種數(shù)據(jù)源的優(yōu)缺點選擇適合的衛(wèi)星遙感數(shù)據(jù)；b)遙感圖像的校正（以SPOT為例）：SPOT圖像在地形圖上選擇地面控制點（DCP），采用一般齊次多項式方法進行幾何校正，再用GPS實地采集DCP作為補充進行二次校正，經(jīng)幾何校正后的SPOT圖像采用最鄰近內(nèi)插法進行重采樣；c)圖像增強與圖像復(fù)合：在圖像中選擇感興區(qū)，分析濕地的圖像特征，然后用直線拉伸法對圖像進行三線性變換分段拉伸，使?jié)竦刂脖?、水域與和周圍地域的光譜間差異增大。采用銳化HIS變換的方法，分別將各SPOT圖像與相應(yīng)的ETM+圖像進行融合，得到包含了SPOT和ETM+兩種數(shù)據(jù)信息的復(fù)合圖像。然后采用經(jīng)過融合的圖像數(shù)據(jù)進行RGB真彩色合成，并加入公里格網(wǎng)，以TIFF格式保存。d)提取巖溶濕地信息：在巖溶濕地區(qū)及其它土地利用類型選取觀察點，確定各點坐標(biāo)，然后利用GPS儀在野外對各選擇點進行定位考察，確定其類型、地物景觀狀況，并作好記錄，結(jié)合影像上對應(yīng)點進行判讀，分析巖溶濕地類型的圖譜特征，建立相應(yīng)的解譯標(biāo)志。然后采用常用的監(jiān)督分類、非監(jiān)督分類和NDVI植被指數(shù)法進行信息提取；e)結(jié)果計算：采用GIS對修正后的圖像進行空間分析，計算濕地面積、水域面積和不同植被面積。4.3水體總量，地表徑流量，年排入量，降雨量，蒸發(fā)量，溝塘、沼濕地與地下水的交換量，供給水量等指標(biāo)的數(shù)據(jù)信息，可通過資料調(diào)查獲得。4.4背景調(diào)查監(jiān)測應(yīng)在1個年度內(nèi)完成，調(diào)查頻率應(yīng)≥4次，分別在春、夏、秋、冬四季各開展1次調(diào)查監(jiān)測。5監(jiān)測5.1采樣點布設(shè)5.1.1采樣點應(yīng)能覆蓋所需的水生態(tài)環(huán)境監(jiān)測和評價范圍，除特殊需要（因地形、水深和監(jiān)測目標(biāo)所限制）外，所有采樣點應(yīng)在監(jiān)測范圍內(nèi)均勻布設(shè)，可采用網(wǎng)格式、斷面或梅花式等布設(shè)方式。5.1.2水樣采用斷面式的布設(shè)方法，土壤樣布設(shè)點與水樣保持一致。5.1.3水生浮游植物和水生浮游動物監(jiān)測點一般盡量與水化學(xué)監(jiān)測采樣點一致。5.1.4挺水植物、浮葉植物、沉水植物的樣方面積應(yīng)不小于群落最小面積，可根據(jù)種-面積曲線來確定。具體如下：——挺水和浮葉植物樣方面積宜采用1m×1m或0.5m×0.5m，沉水植物樣方面積為0.5m×0.5m或0.2m×0.2m；——采樣點的布設(shè)可采用斷面法，根據(jù)湖泊的形狀、水文情況、植物的分布等設(shè)置斷面，斷面宜平行排列，或為“之”字形?！獢嗝媾c斷面的距離宜為50m～100m，可根據(jù)實際情況調(diào)整?！獢嗝嫔隙c數(shù)目宜為奇數(shù)，即斷面中間應(yīng)設(shè)1個點，沒有大型水生植物的地區(qū)可不設(shè)定。5.1.5采樣一經(jīng)確定，不應(yīng)輕易更改，不同時期的采樣點應(yīng)保持不變。5.2宏觀監(jiān)測宏觀監(jiān)測指標(biāo)包括：濕地地理位置、濕地面積、水域面積、植被面積。宏觀指標(biāo)按4.2的要求進行監(jiān)測。35.3水環(huán)境監(jiān)測5.3.1水文監(jiān)測5.3.1.1地表水水文監(jiān)測指標(biāo)包括水位、水深、流向、流速、流量等，宜采用定位觀測和非定位觀測。定位觀測應(yīng)符合LY/T2898的規(guī)定；非定位觀測宜每年豐水期、平水期和枯水期各監(jiān)測1次，監(jiān)測指標(biāo)及方法見表1。表1地表水水文監(jiān)測指標(biāo)與方法mm——m5.3.1.2地下水水文監(jiān)測指標(biāo)包括溝塘、沼濕地與地下水的交換量，供給水量等。5.3.2水質(zhì)監(jiān)測5.3.2.1樣品的采集應(yīng)符合HJ495的規(guī)定，樣品的保存和管理應(yīng)符合HJ493的規(guī)定。5.3.2.2水溫、電導(dǎo)率、pH、溶解氧（DO）等指標(biāo)，可通過在線連續(xù)自動監(jiān)測系統(tǒng)進行實時連續(xù)監(jiān)測。5.3.2.3其他指標(biāo)監(jiān)測每年應(yīng)不少于3次，宜豐水期、平水期、枯水期各采樣1～2次。監(jiān)測指標(biāo)、單位、測定方法和引用標(biāo)準見表2，按表A.1的要求填寫監(jiān)測記錄。表2水質(zhì)監(jiān)測指標(biāo)與方法氨氮（NH-N）硝酸鹽氮（NO-N） 亞硝酸鹽氮（NO-N） — 5.4底泥土壤監(jiān)測5.4.1樣品采集與保存應(yīng)在布設(shè)的土壤樣點采集樣品，樣品采集與保存方法應(yīng)符合HJ/T166的要求。5.4.2樣品預(yù)處理5.4.2.1底泥土壤樣品制備過程應(yīng)經(jīng)過風(fēng)干、磨細、過篩、混勻、裝瓶，步驟如下：a)風(fēng)干：將采回的底泥樣，放在木盤或塑料布上，攤成薄薄的一層，置于室內(nèi)通風(fēng)陰干。底泥土壤樣品應(yīng)在干燥通風(fēng)的風(fēng)干場所進行風(fēng)干，樣品半干時，應(yīng)將大泥塊捏碎，樣品風(fēng)干后揀去動植物殘體和泥塊；b)過篩：將風(fēng)干后的底泥土壤樣品用木棍研細，使之全部通過2mm孔徑的篩子?；靹蚝螅捎盟姆址ǚ殖?份，1份作為物理分析用，1份作為化學(xué)分析用，化學(xué)分析用的土壤樣應(yīng)進一步研細，使之全部通過1mm孔徑篩子；4c)保存：樣品用塑料瓶保存半年或1年，以備必要時查核之用，樣品瓶上標(biāo)簽應(yīng)注明樣號、采樣地點、底泥土壤類名稱、試驗區(qū)號、深度、采樣日期、篩孔。5.4.2.2將風(fēng)干底泥土壤樣品過2mm篩后，按水(無二氧化碳水)-泥（1-5）置于500mL三角瓶中，加入干凈的玻璃珠加塞震蕩，每隔30min震蕩1次，每次持續(xù)1min，共震蕩5次，經(jīng)抽濾獲得土壤樣的浸出液。5.4.3監(jiān)測方法5.4.3.1電導(dǎo)率的監(jiān)測：稱取4g風(fēng)干底泥置于25mm×200mm的大試管中，加水20mL，蓋緊皮塞，振蕩3min，靜置澄清后，不必過濾，直接測定。5.4.3.2底泥土壤其它指標(biāo)的測定，可使用5.4.2.2制備的底泥浸提液測定。監(jiān)測指標(biāo)、單位、測定方法和引用標(biāo)準見表3，并填寫監(jiān)測記錄（參見表A.2）。表3底泥土壤監(jiān)測指標(biāo)及方法mg/LCO、HCO 5.5生物多樣性監(jiān)測5.5.1樣品采集與保存5.5.1.1采樣設(shè)備包括采水器、拖網(wǎng)、水草夾、采泥器等。采水器宜采用顛倒采水器、卡蓋式采水器；拖網(wǎng)規(guī)格的選用應(yīng)符合表4的要求；水草夾規(guī)格的選用應(yīng)符合表5的要求；采泥器宜采用抓斗式采泥器、彈簧采泥器、“大洋-50”型采泥器。表4拖網(wǎng)種類與規(guī)格~表5水草夾型號與規(guī)格5.5.1.2浮游植物只調(diào)查水樣，水樣采集應(yīng)按以下要求進行：——水樣采集應(yīng)與水質(zhì)項目的采水同步進行；——用顛倒采水器或卡蓋式采水器或淺水Ⅲ型浮游生物網(wǎng)采樣；——根據(jù)調(diào)查需要、計劃規(guī)定和濕地水域?qū)嶋H水深確定采樣層次；——所需水樣量宜為500mL；——采樣后，應(yīng)按每1L水樣加6mL～8mL碘液及時固定。5.5.1.3浮游動物使用拖網(wǎng)采樣，樣品采集應(yīng)按以下要求進行：a)分別用淺水I、Ⅱ型浮游生物網(wǎng)，自水底至表垂直拖曳采集浮游動物；5b)每次下網(wǎng)前，檢查網(wǎng)具是否破損，發(fā)現(xiàn)破損及時修補或更換網(wǎng)衣；檢查網(wǎng)底管和流量計是否處于正常狀態(tài)，并把流量計指針撥至指零；放網(wǎng)入水，當(dāng)網(wǎng)口貼近水面時，需調(diào)整計數(shù)器指針于零的位置；網(wǎng)具到達水底后可立即起網(wǎng)；c)把網(wǎng)升至適當(dāng)高度，用沖水設(shè)備自上而下反復(fù)沖洗網(wǎng)衣外表面（切勿使沖洗水進入網(wǎng)口），使粘附于網(wǎng)上的標(biāo)本集中于網(wǎng)底管內(nèi)；將網(wǎng)收于船上，開啟網(wǎng)底管活門，把標(biāo)本裝入標(biāo)本瓶，再關(guān)閉網(wǎng)底管活門，用洗耳球吸水沖洗篩絹套，如此反復(fù)多次，直至殘留標(biāo)本全部收入標(biāo)本瓶中；d)按樣品體積的5加入甲醛溶液進行固定。5.5.1.4挺水植物、浮葉植物以及沉水植物宜用水草夾采樣，樣品采集按以下要求進行：a)將水草夾的鐵夾完全打開，投入水中，到達水底后可關(guān)閉鐵夾，勻速上拉；b)將水草夾收回船板上，打開鐵夾，去除枯死的枝葉及雜質(zhì)，放入編號袋中；c)當(dāng)浮葉植物中有個體較小的植物（如紫萍、滿江紅等）時，用帶柄手抄網(wǎng)進行采集，采集時，慢慢地將帶柄手抄網(wǎng)斜插入漂浮植物群叢的下方，等待水面恢復(fù)平靜之后，慢慢提起，待水濾完，去除枯死的枝、葉及雜質(zhì)，將樣品裝入采集袋，編號。d)每次使用網(wǎng)具后要清理，可將網(wǎng)翻過來，用沒有水生植物的湖水進行清洗。5.5.1.5底棲動物應(yīng)使用采泥器采樣，樣品采集按以下要求進行：a)投放：將采泥器掛在掛鉤上，拉緊鋼絲繩，兩顎瓣自動張開。然后將采泥器慢速放至水面，緩慢下降，入水后再快速下降；b)提升：開始用慢速，離底后改用快中速，接近水面時，再用慢速，將采泥器放在預(yù)先準備好的白鐵盤中。先打開采泥器兩顎瓣上方的活門，然后將活門打開，使土壤樣落入盤中；c)淘洗及分離樣本：將采到的沉積物樣品移入漩渦分離器中，打開分流器的閥門進水，用激光水流通過漩渦發(fā)生器攪動樣品，浮選出比重輕的生物，比重大的生物連同余渣沉底。從出水溢出的水體和生物留到篩子上，將截留在篩網(wǎng)內(nèi)的動物按形態(tài)大小及軟硬程度分別揀入盛水的器皿中，然后按照類別或軟硬分別裝瓶，不應(yīng)遺漏小動物；d)采泥標(biāo)本應(yīng)用5％的甲醛溶液固定保存。5.5.1.6微生物樣品的采集及保存應(yīng)按以下要求進行：a)采樣容器的選擇：宜使用以耐用玻璃制成的，帶螺旋帽（配以氯丁橡膠襯墊）或磨口玻塞的500mL廣口瓶，或適當(dāng)大小、廣口的聚乙烯塑料瓶或聚丙烯耐熱塑料瓶。采樣容器在在滅菌和樣品存放時，不應(yīng)產(chǎn)生和釋放出抑制細菌生存能力或促進繁殖的化學(xué)物質(zhì)；b)采樣瓶的洗滌：宜使用加入洗滌劑的熱水洗刷采樣瓶，再用清水沖洗干凈，最后用蒸餾水沖洗l～2次。新的采樣瓶應(yīng)徹底清洗，先用水和洗滌劑清潔塵埃和包裝物質(zhì)，再用鉻酸和硫酸洗滌液洗滌，然后用稀硝酸溶液沖洗，再用自來水沖洗干凈，最后用蒸餾水淋洗。對于聚乙烯容器，可用約1mol/L鹽酸溶液清洗，再依次用稀硝酸溶液浸泡，蒸餾水沖洗干凈；c)采樣瓶的滅菌：將洗滌干凈的采樣瓶蓋好瓶塞（蓋），用牛皮紙等防潮紙將瓶塞、瓶頂和瓶頸處包裹好，置干燥箱160℃~170℃干熱滅菌2h，或用高壓蒸汽滅菌器，121℃經(jīng)15min滅菌。不能加熱滅菌的塑料瓶，應(yīng)浸泡在0.5％的過氧乙酸溶液中l(wèi)0min或用環(huán)氧乙烷氣體進行低溫滅菌。聚丙烯耐熱塑料瓶，可用121℃高壓蒸汽滅菌15min。d)去氯：采集加氯處理的水樣時，應(yīng)進行去氯處理。滅菌前，在洗滌干凈的500mL樣品瓶內(nèi)，加入10％Na2S2O3溶液0.3mL，然后蓋好瓶蓋（塞），按5.5.1.6c）的方法滅菌。當(dāng)被測水樣含有高濃度重金屬時，于滅菌前在采樣瓶內(nèi)加入螯合劑。如采樣點位置較遠，須長距離運輸?shù)乃畼?，?00mL采樣瓶中加入15％乙二胺四乙酸二鈉鹽（EDTA-Na2）溶液1mL進行去氯。e)采好的水樣，應(yīng)迅速運往實驗室，進行細菌學(xué)檢驗。從取樣到檢驗時間間隔宜≤2h，或使用10℃以下的冷藏設(shè)備保存樣品，保存時間應(yīng)≤6h。f)實驗室接到送檢樣后，應(yīng)將樣品立即放入冰箱，并在2h內(nèi)著手檢驗。因路途遙遠，送檢時間>6h時，應(yīng)現(xiàn)場檢驗或采用延遲培養(yǎng)法。5.5.2監(jiān)測方法5.5.2.1浮游生物浮游生物的監(jiān)測應(yīng)按以下步驟進行：6a)浮游生物（包括浮游動物和浮游植物）計數(shù)：1)計數(shù)前，樣品充分搖勻，將蓋玻片斜蓋在計數(shù)框上。計數(shù)框容量宜采用0.1mL或1mL；2)再用滴管在水樣中部吸液，按準確定量注入計數(shù)框內(nèi)，一邊進樣，另一邊出氣，避免氣泡產(chǎn)生。注滿后把蓋玻片移正。3)計數(shù)片子制成后，稍候幾分鐘，讓浮游生物沉至框底，然后在顯微鏡下進行計數(shù)。4)不易下沉到框底的生物，應(yīng)另行計數(shù)，并加到總數(shù)之內(nèi)。b)藻類和原生動物計數(shù)：1)吸取0.1mL樣品注入0.1mL計數(shù)框，在10×40或8×40倍顯微鏡下計數(shù)。藻類計數(shù)100個視野；原生動物全片計數(shù)；取1mL輪蟲注入1mL計數(shù)框內(nèi)，在10×8倍顯微鏡下全片計數(shù)；2)以上各類均計數(shù)兩片取其平均值。如兩片計數(shù)結(jié)果個數(shù)相差15％以上，則進行第3片計數(shù)，取其中個數(shù)相近的兩片平均值。c)浮游植物的數(shù)量按式（1）的要求把計數(shù)所得結(jié)果換算：式中：N——每升水中浮游植物的數(shù)量，單位為個每升（個/L）；A——計數(shù)框面積，單位為平方毫米（mm2Ac——計數(shù)面積，即視野面積與視野數(shù)或長條計數(shù)時長條長度、參與計數(shù)的長條寬度、鏡檢長條數(shù)的乘積，單位為平方毫米（mm2VW——1L水樣經(jīng)沉淀濃縮后的樣品體積，單位為毫升（mL）；V——計數(shù)框體積，單位為毫升（mL）；n——計數(shù)所得的浮游植物的個體數(shù)或細胞數(shù)，單位為個。注：按上述方法進行采樣、濃縮、計數(shù)。A為400mm，V為30mL，V為0.1mL，d)每升原水樣中浮游動物總數(shù)為按式（2）計算出各類群個體數(shù)之和：N= V2V3式中：N——每升原水樣內(nèi)某計數(shù)類群浮游動物個體數(shù)，單位為個每升（個/L）；n——計數(shù)所得的浮游動物的個體數(shù)，單位為個；V1——1L水樣經(jīng)沉淀濃縮后的樣品體積，單位為毫升（mL）；V2——計數(shù)框體積，單位為毫升（mL）；V3——采樣量，單位為升（L）。e)根據(jù)計算結(jié)果，填寫浮游生物監(jiān)測數(shù)據(jù)報表（參見表A.3）。5.5.2.2底棲動物宜鑒定到科，技術(shù)系在鑒定的基礎(chǔ)上進行數(shù)量統(tǒng)計，填寫底棲動物監(jiān)測數(shù)據(jù)報表（參見表A.3監(jiān)測方法如下：a)用采泥器取樣采回的底棲動物，算出1m2的底棲動物數(shù)量；b)生物重量宜采用濕重法，用天平稱出屬、種的重量，每個個體的重量和平均重量。5.5.2.3鳥類5.5.2.3.1宜采用直接計數(shù)法，監(jiān)測以步行為主，在較開闊、生境均勻的大范圍區(qū)域，宜借助汽車、船只進行調(diào)查，可開展航調(diào)。鳥類計數(shù)應(yīng)符合以下要求：——借助單筒或雙筒望遠鏡進行，如果群體數(shù)量極大，或群體處于飛行、取食、行走等運動狀態(tài)時，可以5、10、20、50、100等為計數(shù)單元來估計群體的數(shù)量；春秋候鳥遷徙情況的監(jiān)測以種類調(diào)查為主，記錄鳥類遷來的時間、高峰期、居留期、停歇時間、遷離時間以及主要停歇地。7——在群體密度很高或難以進行直接技術(shù)的地區(qū)，可通過隨機取樣來估計水鳥種群的數(shù)量。樣方大小宜≥20m×20m，同一監(jiān)測區(qū)域的樣方數(shù)量應(yīng)≥8個，記錄方法同直接計數(shù)法。5.5.2.3.2應(yīng)填寫鳥類監(jiān)測數(shù)據(jù)報表（參見表A.4）。5.5.2.4兩棲動物等其它動物5.5.2.4.1可采用野外調(diào)查、走訪和利用近期的野生動物調(diào)查資料相結(jié)合的方法，記錄到種和亞種；數(shù)量狀況宜用常見、可見、罕見三個等級進行估測。5.5.2.4.2野外調(diào)查也可采用樣方法，通過計數(shù)在設(shè)定的樣方中所見到的動物實體，然后通過頻度分析來推算動物種群數(shù)量的調(diào)查方法。樣方宜設(shè)置為方形、圓形等規(guī)則幾何圖形，樣方面積應(yīng)≥100m×100m。5.5.2.4.3填寫兩棲動物監(jiān)測數(shù)據(jù)報表（參見表A.5）。5.5.2.5挺水、浮葉及沉水植物挺水、浮葉及沉水植物按以下步驟監(jiān)測，填寫挺水、浮葉及沉水植物監(jiān)測數(shù)據(jù)報表（參見表A.6a)將每個樣方內(nèi)的全部植物鑒定到種，測量植物株高和株重，并記錄；b)某植物單位面積數(shù)量為所有樣方內(nèi)的植株數(shù)量除以樣方數(shù)目，再乘以植被面積即為該植物的植株總數(shù)量；c)某植物單位面積數(shù)量乘以株重即為該植物單位面積生物量。5.5.2.6微生物5.5.2.6.1微生物培養(yǎng)方法宜采用平板法、MPN法，具體如下：a)平板法：以無菌操作方法，用1mL滅菌吸管吸取充分混勻的水樣或適宜濃度的稀釋水樣1mL，注入滅菌平皿中，傾注15mL已融化并冷卻到45℃左右的培養(yǎng)基，并立即旋搖平皿，使水樣與培養(yǎng)基充分混勻。待瓊脂冷卻凝固后，翻轉(zhuǎn)平皿，使底面向上，置于恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)；b)MPN法：以無菌操作方法，用1mL滅菌吸管吸取充分混勻的水樣或適宜濃度的稀釋水樣1mL注入標(biāo)有不同濃度梯度的試管中，使水樣與培養(yǎng)基充分混勻，放入恒溫箱培養(yǎng)。5.5.2.6.2微生物培養(yǎng)應(yīng)按以下要求進行：——細菌總數(shù)：培養(yǎng)異養(yǎng)細菌采用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，稀釋度為104～108，37℃培養(yǎng)24h，重復(fù)數(shù)為3，平板法計數(shù)；——真菌：酵母菌采用馬鈴薯培養(yǎng)基，霉菌采用查氏培養(yǎng)基，稀釋度分別為103～106、102～105，25℃培養(yǎng)5d～7d，重復(fù)數(shù)均為3，平板法計數(shù)；——放線菌：采用高氏淀粉培養(yǎng)基，稀釋度為101～104，25℃培養(yǎng)7d，重復(fù)數(shù)為3，平板法計數(shù)；——聚磷菌：培養(yǎng)基采用無水乙酸鈉5.0g、KH2PO40.25g、MgSO4·7H2O培0.5g、CaCl20.2g、4)2SO42.0g、微量元素1mL、水1000mL，在28℃培養(yǎng)2d～3d，重復(fù)數(shù)3，平板法計數(shù)；——亞硝化菌：采用改良斯蒂芬遜（Stephenson）培養(yǎng)基，多管發(fā)酵法培養(yǎng)基，稀釋度為102～107，每個稀釋度接種3管，培養(yǎng)溫度為28℃,培養(yǎng)10d～14d觀察，MPN法計數(shù)；——反硝化菌：采用檸檬酸鈉硝酸鉀培養(yǎng)基，多管發(fā)酵法培養(yǎng)基，稀釋度為103～109，重復(fù)數(shù)3，28℃培養(yǎng)14d后觀察，MPN法計數(shù)；——硝化菌：培養(yǎng)基采用NaNO21.0g、Na2CO31.0g、NaH2PO40.25g、CaCO31.0g、K2HPO40.75g、MnSO4·4H2O0.01g、MgSO4·7H2O0.03g、蒸餾水1000mL，pH7.2，于121℃下滅菌30min。稀釋度為102～109，每個稀釋度接種3管，培養(yǎng)溫度為28℃,培養(yǎng)10d～14d觀察，MPN法計數(shù)；——氨化菌：培養(yǎng)基采用蛋白胨10g，MgSO40.5g，K2HPO41g，NaCl0.5g，F(xiàn)eSO40.001g，微量元素液1.0mL（微量元素液：硼酸0.5g、鉬酸鈉0.5g溶于100mL蒸餾水中蒸餾水1000mL，用10％碳酸鈉調(diào)pH7.2～7.4，121℃滅菌20min。稀釋度為102～109，每個稀釋度接種3管，培養(yǎng)溫度為28℃,培養(yǎng)7d～15d觀察，MPN法計數(shù)。5.5.2.6.3采用平板法進行微生物計數(shù)時，應(yīng)符合以下要求：a)培養(yǎng)之后，立即進行平皿菌落計數(shù)。如計數(shù)暫緩進行，平皿應(yīng)存放于5℃~10℃冰箱內(nèi)；b)作平皿菌落計數(shù)時，可用菌落計數(shù)器或放大鏡檢查，以防遺漏；c)在記下各平皿的菌落數(shù)后，應(yīng)求出同稀釋度的平均菌落數(shù)。8d)微生物總數(shù)以每個平皿菌落的總數(shù)或平均數(shù)乘以稀釋倍數(shù)而得出。注1：在求同稀釋度的平均數(shù)時，其中一個平皿有較大片狀菌落生長時，則不宜采用，而以無片狀菌落生長的平皿注2：若片狀菌落＜平皿的1/2，而其余一半中菌落分布又很均勻，則可將此半皿計數(shù)后乘以2代表全皿菌落數(shù)，然注4：對于緊密接觸而外觀（如形態(tài)或顏色）相異的5.5.2.6.4采用MPN法進行微生物計數(shù)時，應(yīng)根據(jù)各種菌種的檢查方法依次鑒定是否為陽性，以出現(xiàn)陽性結(jié)果的數(shù)目從MPN表中查得相應(yīng)的MPN指數(shù)，從而計算各菌種的MPN值。6監(jiān)測報告編制6.1文本格式6.1.1文本規(guī)格應(yīng)為A4(210mm×297mm)。6.1.2封面格式封面內(nèi)容和格式應(yīng)符合以下要求，具體參見附錄B：——第一行書寫：項目名稱（如××××××濕地）。字體格式為一號宋體，加粗，居中；——第二行書寫：巖溶濕地水生態(tài)環(huán)境監(jiān)測報告。字體格式為一號宋體，加粗，居中；——落款書寫：編制單位全稱（如有多個單位可逐一列入）。字體格式為三號宋體，加粗，居中；——第四行書寫：××××年××月，字體格式為小三號宋體，加粗，居中；——第五行書寫：國家名稱+地名，國家與地名之間間隔一個漢字，字體格式為小三號宋體，加粗，居中。注：各行間距應(yīng)適宜，保持封面美觀。6.1.3封里內(nèi)容封里中應(yīng)分行寫明以下內(nèi)容：——監(jiān)測項目實施單位全稱（加蓋公章）；——項目負責(zé)人、技術(shù)總負責(zé)人、分項目負責(zé)人姓名；——報告書編制單位全稱（加蓋公章）；——編制人、審核人姓名；——編制單位地址；——通信地址及郵政編碼；——郵政編碼；——聯(lián)系人姓名、聯(lián)系電話、E-mail地址等內(nèi)容。6.2報告大綱每個巖溶濕地水生態(tài)環(huán)境監(jiān)測項目工作完成后(包括年度工作)，應(yīng)按示例1給出的框架編寫巖溶濕地水生態(tài)系統(tǒng)環(huán)境監(jiān)測報告，并附主要參考文獻。巖溶濕地水生態(tài)環(huán)境監(jiān)測報告內(nèi)容宜包括示例所列的全部內(nèi)容。9一、概述（一）水生態(tài)環(huán)境監(jiān)測概述包括監(jiān)測地點、范圍，監(jiān)測目的、意義，監(jiān)測區(qū)域與周邊區(qū)域的環(huán)境與資源狀況，水生態(tài)特點等。（二）監(jiān)測方案（三）監(jiān)測指標(biāo)體系（四）監(jiān)測方法包括采樣方法、監(jiān)測方法及分析方法等。（五）其它內(nèi)容二、監(jiān)測與評價結(jié)果（一）水質(zhì)質(zhì)量評價（二）底泥質(zhì)量評價（三）生物多樣性評價三、水生態(tài)環(huán)境現(xiàn)狀與趨勢評價（一）水生態(tài)環(huán)境現(xiàn)狀（二）水生態(tài)環(huán)境變化及趨勢（三）水生態(tài)環(huán)境變化的原因（四）其它內(nèi)容四、巖溶濕地水生態(tài)系統(tǒng)綜合評價7質(zhì)量控制7.1儀器設(shè)備檢定與校準所有在監(jiān)測過程中使用的計量檢測器、設(shè)備和計量器具應(yīng)在有效檢定期內(nèi)使用，并在規(guī)定的檢定周期內(nèi)進行檢定?？勺詸z的計量檢測器、設(shè)備和計量器具，應(yīng)按期進行自檢。7.2監(jiān)測條件7.2.1開展巖溶濕地水生態(tài)環(huán)境監(jiān)測，應(yīng)具備必要的采樣、實驗條件和儀器設(shè)備，具有樣品采集、分析、鑒定和數(shù)據(jù)分析處理