【蒲公英總黃酮的提取探究5600字（論文）】

蒲公英總黃酮的提取研究摘要本文所采用的從蒲公英中提取總黃酮的方法主要是超聲波輔助乙醇提取法和乙醇冷浸漬法，比較不同的工藝條件并進(jìn)行優(yōu)化處理。在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，采用正交實(shí)驗(yàn)對(duì)兩種方法的各自影響參數(shù)進(jìn)行優(yōu)選，并以總黃酮得率作為指標(biāo)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，超聲波輔助乙醇提取法是蒲公英總黃酮的最佳提取工藝條件。此方法是在乙醇濃度為60%，料液比為1:50，超聲時(shí)間為40min的條件下進(jìn)行的，由此得出蒲公英中總黃酮的得率為61.19%。故超聲波輔助乙醇提取法是提取蒲公英總黃酮的有效方法。其提取工藝，簡(jiǎn)便準(zhǔn)確、穩(wěn)定合理。關(guān)鍵詞:蒲公英；總黃酮；提取工藝目錄TOC\o"1-3"\h\u18092引言 1321501材料和方法 2291721.1材料與儀器 2127261.1.1實(shí)驗(yàn)材料 290401.1.2主要儀器 2260051.1.3主要試劑 272901.2實(shí)驗(yàn)方法 2301741.2.1實(shí)驗(yàn)材料預(yù)處理 2189191.2.2蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液制備 3240311.2.3乙醇冷浸漬法 381121.2.4超聲波輔助乙醇提取法 459571.2.5硝酸鋁絡(luò)合顯色法和測(cè)定波長(zhǎng)的選擇 558511.2.6標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 6196551.2.7蒲公英總黃酮得率計(jì)算公式 656112結(jié)果與分析 679272.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 699452.2乙醇冷浸漬法實(shí)驗(yàn)結(jié)果 7299102.2.1單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果 7117452.2.2正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果 8240382.3超聲波輔助乙醇提取法 9122452.3.1單因素結(jié)果 9311692.3.2正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果 11275913結(jié)論 1114725參考文獻(xiàn) 12摘要：本文所采用的從蒲公英中提取總黃酮的方法主要是超聲波輔助乙醇提取法和乙醇冷浸漬法，比較不同的工藝條件并進(jìn)行優(yōu)化處理。在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，采用正交實(shí)驗(yàn)對(duì)兩種方法的各自影響參數(shù)進(jìn)行優(yōu)選，并以總黃酮得率作為指標(biāo)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，超聲波輔助乙醇提取法是蒲公英總黃酮的最佳提取工藝條件。此方法是在乙醇濃度為60%，料液比為1:50，超聲時(shí)間為40min的條件下進(jìn)行的，由此得出蒲公英中總黃酮的得率為61.19%。故超聲波輔助乙醇提取法是提取蒲公英總黃酮的有效方法。其提取工藝，簡(jiǎn)便準(zhǔn)確、穩(wěn)定合理。關(guān)鍵詞:蒲公英；總黃酮；提取工藝引言蒲公英(拉丁學(xué)名:

Taraxacum

mongolicumhand.Maz)，別名華花郎，是遍布全國(guó)各地的中草藥，全草皆可用藥，遠(yuǎn)在《唐本草》中即有收載[1]。蒲公英中含有多種活性成分，如蒲公英甾醇[15]、黃酮類等。黃酮有良好的抑菌作用[2]，其中所含的一些有效成分具有很強(qiáng)的抗組織胺作用，促進(jìn)患處傷口的恢復(fù)。因此對(duì)蒲公英總黃酮的提取工藝進(jìn)行研究具有一定的現(xiàn)實(shí)意義[15]。目前，總黃酮的主要提取生物途徑和應(yīng)用方法主要有有機(jī)溶液萃取法[3]、超聲溶液提取法[3,4]、微波輔助有機(jī)溶液提取法[4]、酶解提取法[5,10]等。有機(jī)溶液萃取法中最常用的就是乙醇浸取法；超聲溶液提取法[14]通過(guò)利用超聲波技術(shù)來(lái)縮短分離萃取過(guò)程的時(shí)間且能夠節(jié)約成本，超聲波技術(shù)能夠減少破壁的時(shí)間，故能提高萃取率進(jìn)而提高產(chǎn)品質(zhì)量和產(chǎn)量；微波輔助提取是將微波處理與傳統(tǒng)有機(jī)溶劑提取相結(jié)合，消解能力強(qiáng)；酶解提取法通過(guò)降解細(xì)胞結(jié)構(gòu)，最大限度將有效成分溶解出來(lái)。因此，如何更快、更優(yōu)地提取蒲公英中總黃酮成為重要的研究方向。冷浸漬法和超聲波輔助乙醇提取法都是操作方便并且簡(jiǎn)單可行的實(shí)驗(yàn)方法，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)運(yùn)用以上兩種方法分別對(duì)蒲公英中的總黃酮進(jìn)行提取，采用顯色法將其作為一種測(cè)定蒲公英總黃酮物質(zhì)含量的檢測(cè)方法，通過(guò)紫外分光光度計(jì)進(jìn)行顯色測(cè)定，從而對(duì)其提取效果進(jìn)行更深一步的研究，使其更好地投入到生產(chǎn)之中，帶來(lái)更大的經(jīng)濟(jì)效益。1材料和方法：1.1材料與儀器：1.1.1實(shí)驗(yàn)材料蒲公英：購(gòu)買于存譽(yù)堂旗艦店，時(shí)間為2021年4月1.1.2主要儀器1.1.3主要試劑：1.2實(shí)驗(yàn)方法1.2.1實(shí)驗(yàn)材料預(yù)處理清洗一定量的蒲公英后，于100℃干燥箱中干燥12h后[16]，用研缽磨碎，通過(guò)80過(guò)目篩，得到了蒲公英粉，備用。1.2.2蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液制備[6]采用蘆丁作為總黃酮的標(biāo)準(zhǔn)品。將14mg蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶解于適量60%乙醇溶液中，待完全溶解后，移入規(guī)格為50mL的容量瓶中定容至刻度線，搖勻混合后，制得標(biāo)準(zhǔn)溶液[17]，放入冰箱低溫儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?.2.3乙醇冷浸漬法1.2.3.1單因素實(shí)驗(yàn)（1）料液比對(duì)總黃酮得率的影響：將蒲公英在100℃放置烘干箱中烘干12h，用研缽將其磨碎，通過(guò)80過(guò)目篩，得到蒲公英粉。稱取0.5g蒲公英粉，用濾紙將其包成茶包狀，放入100mL燒杯中，按1:30、1:40、1:50、1:60、1:70(g/mL)的料液比分別加入60%的乙醇溶液，在室溫下冷浸漬24h，然后在離心機(jī)上進(jìn)行離心，得到的上層澄清溶液就是蒲公英的樣品溶液。依次進(jìn)行下列兩步操作，操作一：取5個(gè)25mL容量瓶，標(biāo)號(hào)為R1、R2、R3、R4、R5，各加入5mL濾液、1mL（5%）的NaNO2溶液以及1mL（10%）AL3(NO3)3溶液，再加入10mL（1moL/L）NaOH溶液，用60%乙醇溶液定容至刻度線，充分混合搖勻。操作二：用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)測(cè)量其吸光度。以總黃酮的得率為指標(biāo)，考察料液比對(duì)總黃酮得率的影響[17]。（2）乙醇濃度對(duì)總黃酮得率的影響：將蒲公英在100℃放置烘干箱中烘干12h，用研缽將其磨碎，通過(guò)80目篩，得到蒲公英粉。稱取0.5g蒲公英粉，用濾紙將其包成茶包狀，放入100mL小燒杯中，按1:50（g/mL)的料液比分別加入40%、50%、60%、70%、80%的乙醇溶液，在室溫下冷浸漬24h，然后在離心機(jī)上進(jìn)行離心，得到的上層澄清溶液就是蒲公英的樣品溶液，之后重復(fù)上述操作一和操作二，以總黃酮的得率為指標(biāo)，考察乙醇濃度對(duì)總黃酮得率的影響。（3）乙醇冷浸漬時(shí)間對(duì)黃酮得率的影響：將蒲公英在100℃放置烘干箱中烘干12h，用研缽將其磨碎，通過(guò)80過(guò)目篩，得到蒲公英粉。稱取0.5g蒲公英粉，用濾紙將其包成茶包狀，放入100mL燒杯中，按照料液比為1:50（g/mL)加入濃度為60%的乙醇溶液，分別在室溫下冷浸漬24h、36h、48h、60h、72h，然后在離心機(jī)上進(jìn)行離心，得到的上層澄清溶液就是蒲公英的樣品溶液。之后重復(fù)上述操作一和操作二，以總黃酮的得率為指標(biāo)，考察冷浸漬時(shí)間對(duì)總黃酮得率的影響。1.2.3.2正交實(shí)驗(yàn)[7]上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果以得率為評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)，選取三個(gè)對(duì)總黃酮得率影響較大的因素，同時(shí)確定所選因素對(duì)應(yīng)的水平，設(shè)計(jì)因素水平表，見(jiàn)下表3。表3乙醇冷浸漬法因素水平表因素水平123提取時(shí)間（h）364860乙醇濃度（%）506070料液比（g·mL-1）1:401:501:601.2.4超聲波輔助乙醇提取法1.2.4.1單因素實(shí)驗(yàn)（1）料液比對(duì)總黃酮得率的影響：將蒲公英在100℃放置烘干箱中烘干12h，用研缽將其磨碎，通過(guò)80過(guò)目篩，得到蒲公英粉。稱取0.5g蒲公英粉，用濾紙將其包成茶包狀，放入100mL燒杯中，按1:30、1:40、1:50、1:60、1:70(g/mL)的料液比分別加入濃度為60%的乙醇溶液，超聲清洗30min，超聲完成后在離心機(jī)上進(jìn)行離心，得到的上層澄清溶液就是蒲公英的樣品溶液。之后重復(fù)上述操作一和操作二，以總黃酮的得率為指標(biāo)，考察料液比對(duì)總黃酮得率的影響。（2）乙醇濃度對(duì)總黃酮得率的影響：將蒲公英在100℃放置烘干箱中烘干12h，用研缽將其磨碎，通過(guò)80過(guò)目篩，得到蒲公英粉。稱取0.5g蒲公英粉，用濾紙將其包成茶包狀，放入100mL燒杯中，將60%的乙醇溶液按1:50的料液比（g/mL）分別加入40%、50%、60%、70%、80%的乙醇溶液，超聲清洗30min，超聲完成后在離心機(jī)上進(jìn)行離心，得到的上層澄清溶液就是蒲公英的樣品溶液。之后重復(fù)上述操作一和操作二，以總黃酮的得率為指標(biāo)，考察乙醇濃度對(duì)總黃酮得率的影響。（3）超聲時(shí)間對(duì)總黃酮得率的影響：蒲公英在100℃放置烘干箱中烘干12h，用研缽將其磨碎，通過(guò)80過(guò)目篩，得到蒲公英粉。稱取0.5g蒲公英粉，用濾紙將其包成茶包狀，放入100mL燒杯中，按1:50（g/mL)的料液比加入濃度為60%的乙醇溶液，分別超聲清洗10min、20min、30min、40min、50min，超聲完成后用離心機(jī)進(jìn)行離心，得到的上層澄清溶液就是蒲公英的樣品溶液。之后重復(fù)上述操作一和操作二，以總黃酮的得率為指標(biāo)，考察超聲時(shí)間對(duì)總黃酮得率的影響。1.2.4.2正交實(shí)驗(yàn)在上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果中，以得率為評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)，選取三個(gè)對(duì)總黃酮得率影響比較大的因素，同時(shí)確定所選因素對(duì)應(yīng)的水平，設(shè)計(jì)因素水平表，見(jiàn)下表3。表4超聲波輔助乙醇提取法因素水平表因素水平123超聲時(shí)間（min）304050乙醇濃度（%）506070料液比（g·mL-1）1:401:501:601.2.5硝酸鋁絡(luò)合顯色法和測(cè)定波長(zhǎng)的選擇1.2.5.1顯色劑所需溶液的制備在電子天平上稱取5gNaNO2固體顆粒、10gAL3(NO3)3固體顆粒以及4gNaOH固體顆粒，分別用蒸餾水溶解于三個(gè)燒杯中，待溶解后移入100mL的容量瓶中進(jìn)行定容至刻度線，即可得到濃度為5%的NaNO2溶液、濃度為10%的AL3(NO3)3溶液以及濃度1moL/L的NaOH溶液。1.2.5.2測(cè)定波長(zhǎng)的選擇[8]在100ml容量瓶中分別加入4ml蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液、4ml濃度為0.5%NaNO2溶液、4ml濃度為10%AL3(NO3)3溶液、40mL濃度為1mol/LNaOH溶液，并用60%乙醇溶液定容至刻度線，混合搖勻后放置25分鐘。在300nm-600nm的范圍內(nèi)進(jìn)行紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)掃描。在510nm處硝酸鋁溶液的峰值較明顯（如下圖1所示）。圖SEQ圖\*ARABIC1硝酸鋁顯色法顯色下的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品紫外光譜圖1.2.6標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制[9]精密依次吸取濃度為280ug/mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5和3.0mL，分別移入規(guī)格為25mL的A1、A2、A3、A4、A5五個(gè)容量瓶中，向每個(gè)容量瓶中加入1mL5%的NaNO2溶液，1mL10%的AL3(NO3)3溶液（pH=5.2）以及10mL的NaOH溶液，用60%乙醇定容A1、A2、A3、A4、A5，搖勻混合，最后在510nm處測(cè)定吸光度，以蘆丁濃度為橫坐標(biāo)(X)，吸光度(Y)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線[5]。1.2.7蒲公英總黃酮得率計(jì)算公式X=[3]式中：X——總黃酮的得率V——加入乙醇的體積（mL）N——待測(cè)溶液的稀釋倍數(shù)M——蒲公英粉的質(zhì)量（g）2結(jié)果與分析2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制根據(jù)濃度和吸光度做出線性回歸方程為Y=0.005x+0.0109（R2=0.9598），此結(jié)論推出，在5.6~33.6（μg/mL）中有較好的線性關(guān)系。圖2標(biāo)準(zhǔn)曲線圖2.2乙醇冷浸漬法實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.2.1單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.2.1.1乙醇冷浸漬法中料液比對(duì)得率的影響對(duì)圖3分析可知，在乙醇冷浸漬法實(shí)驗(yàn)中，選取料液比系數(shù)為1:40、1:50、1:60時(shí)，對(duì)總黃酮得率影響最大。圖SEQ圖\*ARABIC3乙醇冷浸漬法中料液比對(duì)得率的影響圖2圖2乙醇冷浸漬法中料液比對(duì)得率的影響對(duì)圖4分析可知，可得出在乙醇冷浸漬法實(shí)驗(yàn)中，選取冷浸時(shí)間為36h、48h、60h時(shí)，對(duì)總黃酮得率影響最大。圖4乙醇冷浸漬法中時(shí)間對(duì)得率的影響2.1.2.3乙醇冷浸漬法中乙醇濃度對(duì)得率的影響對(duì)圖5分析可知，可得出在乙醇冷浸漬法實(shí)驗(yàn)中，選取乙醇濃度為50%、60%、70%時(shí)，對(duì)總黃酮得率影響最大。圖5乙醇冷浸漬法中乙醇濃度對(duì)得率的影響2.2.2正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果[10,14]由下表5可知，極差R最大為4.86，對(duì)應(yīng)因素為乙醇冷浸漬法時(shí)間，所以在乙醇冷浸漬法中，蒲公英總黃酮得率受乙醇冷浸漬時(shí)間影響最大；對(duì)得率影響的順序從高到低為：A＞B＞C，即浸漬時(shí)間＞乙醇濃度＞料液比。在料液設(shè)定比為1:50，乙醇濃度設(shè)定為60%，提取時(shí)間設(shè)定為48h時(shí)，總黃酮得率最高。乙醇冷浸漬法優(yōu)點(diǎn)在于操作方便，簡(jiǎn)單易行，便于傳授；缺點(diǎn)是相對(duì)于其他大多數(shù)方法消耗時(shí)間較長(zhǎng)，不利于大規(guī)模投入使用，耗費(fèi)人力造成成本損失，故不可取。表5乙醇冷浸漬法正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)號(hào)浸漬時(shí)間（h）乙醇濃度（%）料液比（mg/mL）得率%111120.15212221.95313311.15421223.54522319.33623124.96731322.23832114.05933217.01K153.2565.9259.16K267.8355.3362.50K353.2953.1252.71k117.7521.9719.72k222.6118.4420.83k317.7617.7117.57R4.864.273.262.3超聲波輔助乙醇提取法2.3.1單因素結(jié)果2.3.1.1超聲波輔助乙醇提取法中料液比對(duì)得率的影響對(duì)圖6分析可知，可得出在超聲波輔助乙醇提取法中，選取料液比系數(shù)為1:50、1:60、1:70時(shí)，對(duì)總黃酮得率影響最大。圖6超聲波輔助乙醇提取法中料液比對(duì)得率的影響2.3.1.2超聲波輔助乙醇提取法中時(shí)間對(duì)得率的影響對(duì)圖7分析可知，可得出在超聲波輔助乙醇提取法中，選取超聲時(shí)間為30min、40min、50min時(shí)，對(duì)總黃酮得率影響最大。圖7超聲波輔助乙醇提取法中時(shí)間對(duì)得率的影響2.3.1.3超聲波輔助乙醇提取法中乙醇濃度對(duì)得率的影響對(duì)圖8分析可知，可得出在超聲波輔助乙醇提取法中，選取乙醇濃度為50%、60%、70%時(shí)，對(duì)總黃酮得率影響最大。圖SEQ圖\*ARABIC5超聲波輔助乙醇法中濃度對(duì)得率的影響2.3.2正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果由下表6可知，極差R最大為17.27，對(duì)應(yīng)因素為超聲時(shí)間，所以在超聲提取法中，蒲公英總黃酮得率受超聲時(shí)間的影響最大，并且在各因素中，對(duì)得率影響的順序從高到低為：A＞C＞B，即超聲時(shí)間＞料液比＞乙醇濃度[5]。由表易得，在料液比設(shè)定為1:50，乙醇濃度設(shè)定為60%，提取時(shí)間設(shè)定為40min時(shí)，獲得的總黃酮得率最高。超聲提取法優(yōu)點(diǎn)在于耗時(shí)短，操作較為簡(jiǎn)單。該方法提取蒲公英總黃酮相比乙醇冷浸漬法整體得率較高。表6超聲波輔助乙醇提取法正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)號(hào)超聲時(shí)間（h）乙醇濃度（%）料液比（mg/mL）得率%111121.23212226.62313361.19421219.84522326.19623111.20731326.42832111.74933219.73K1109.0467.4944.17K257.2364.5566.19K357.8992.12113.8k136.3522.5014.72k219.0821.5222.06k36.3630.7137.93R17.279.1915.873結(jié)論本實(shí)驗(yàn)對(duì)蒲公英總黃酮的提取技術(shù)和工藝進(jìn)行研究，主要采用超聲波輔助乙醇提取法和乙醇冷浸漬法來(lái)提取蒲公英總黃酮。通過(guò)比較兩種方法的提取總黃酮的效果，并且以總黃酮的得率作為指標(biāo)。分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)在超聲波輔助乙醇提取法下，黃酮的最大得率為61.19%。故超聲波輔助乙醇提取法被廣泛認(rèn)為是蒲公英總黃酮提取的最佳方法，在料液比為1:50、乙醇濃度為60%、提取時(shí)間為40min的條件下其提取工藝條件最佳。參考文獻(xiàn)[1]王煥華,中國(guó)藥話,中國(guó)中醫(yī)學(xué)出版社,(1996).[2]國(guó)家藥典委員會(huì),中華人民共和國(guó)藥典(一部).北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015:352.[3]郭希娟,張桂芳,劉遠(yuǎn)洋,蒲公英黃酮提取方法的研究現(xiàn)狀及進(jìn)展[J],安徽農(nóng)學(xué)通報(bào),2016,22（20）：15-16[4]徐樹(shù)來(lái),王麗,任紅波,欒雪艷,陳井權(quán),蒲公英黃酮的提取工藝優(yōu)化及主要成分淺析[J].食品工業(yè)科技,2018,39(8):160-166[5]侯麗,蒲公英中總黃酮提取工藝研究[J],農(nóng)業(yè)科技與裝備,2017(3):52-53[6]蘇鵬濤,楊勸生,蒲公英中總黃酮正交提取工藝的建立[J].中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2018,37(3)：49-51[7]馮倩,鄭偉,李蔚群,張微,鄭永霞,張貴民,多指標(biāo)正交實(shí)驗(yàn)法考察蒲公英提取與純化工藝[J],現(xiàn)代中藥研究與