(高清版)GBT 20806-2022 飼料中中性洗滌纖維（NDF）的測定

飼料中中性洗滌纖維(NDF)的測定2022-12-30發(fā)布2023-07-01實施國家市場監(jiān)督管理總局國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會I本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件代替GB/T20806—2006《飼料中中性洗滌纖維(NDF)的測定》,與GB/T20806—2006相比，除結(jié)構(gòu)調(diào)整和編輯性改動外，主要技術(shù)變化如下：a)更改了樣品細(xì)度要求(見4.4,2006年版的7.2);b)增加了預(yù)先脫脂步驟(見4.5.3);c)增加了消煮用“0.5g無水亞硫酸鈉”(見4.5.4);d)增加了助濾劑(見4.5.5);e)更改了試驗數(shù)據(jù)處理(見4.6,2006年版的8.1);f)增加了濾袋法(見第5章);g)增加了熱穩(wěn)定α-淀粉酶的校準(zhǔn)和稀釋(見附錄A)。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由全國飼料工業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(SAC/TC76)提出并歸口。本文件起草單位：四川威爾檢測技術(shù)股份有限公司、山東省畜產(chǎn)品質(zhì)量安全中心、青海省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳。本文件及其所代替文件的歷次版本發(fā)布情況為：——2006年首次發(fā)布為GB/T20806—2006;——本次為第一次修訂。1飼料中中性洗滌纖維(NDF)的測定1范圍本文件描述了飼料中中性洗滌纖維(NDF)測定的坩堝法和濾袋法。本文件適用于配合飼料、濃縮飼料、精料補充料和飼料原料中中性洗滌纖維(NDF)的測定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法GB/T20195動物飼料試樣的制備3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4坩堝法(仲裁法)用熱穩(wěn)定α-淀粉酶和中性洗滌溶液消化、洗滌，除去試樣中容易消化的蛋白質(zhì)、脂類、糖、淀粉和果膠后，剩余的為不溶性纖維殘渣，主要為植物性原料成分如纖維素、半纖維素和木質(zhì)素，以及動物產(chǎn)品中難以消化的含氮物質(zhì)。4.2試劑或材料除非另有規(guī)定，僅使用分析純試劑。4.2.2無水亞硫酸鈉(Na?SO?)。4.2.4鹽酸溶液(4mol/L):量取328mL濃鹽酸，用水稀釋至1000mL,混勻。4.2.5熱穩(wěn)定α-淀粉酶溶液：購置熱穩(wěn)定α-淀粉酶。使用前按照附錄A對熱穩(wěn)定α-淀粉酶進行校準(zhǔn)和稀釋，保證稀釋后的2mL熱穩(wěn)定α-淀粉酶溶液可以除去0.5g生玉米粉中的淀粉。稀釋后的熱穩(wěn)定α-淀粉酶溶液2℃~8℃保存，有效期5d。4.2.6中性洗滌溶液：量取500mL水于1000mL燒杯中，加入18.6g乙二胺四乙酸二鈉(C?HN?O?Na?·2H?O)、4.56g無水磷酸氫二鈉(Na?HPO?)和6.81g四硼酸鈉(Na?B?O?·10H?O),加熱溶解，混勻，置于通風(fēng)櫥中。加入30g十二烷基硫酸鈉(C?H??NaO?S),溶解后加入10mL二縮三乙二醇(C?H?O?)消除泡沫，加水至約950mL,攪拌均勻，用濃鹽酸或氫氧化鈉將pH調(diào)至6.95～7.05,用水稀釋至1000mL。室溫保存。2注：如果pH偏離超過0.5,則舍棄該溶液，重新配制。如果溶液出現(xiàn)沉淀，使用前加熱至25℃,并重新調(diào)節(jié)pH至4.3.2回流消煮裝置：配有600mL燒杯、獨立加熱單元和適配600mL燒杯的水冷凝器，或采用按照注1:新砂芯坩堝使用前檢查過濾速度，每個砂芯坩堝裝滿50mL水(纖維測定儀砂芯坩堝為25mL),在不抽真空的條件下，排干時間為180s±60s(纖維測定儀用砂芯坩堝排干時間為75s±30s)。如果排干時間<120s(纖維測定儀用砂芯坩堝排干時間<30s),舍棄不用。如果排干時間>240s(纖維測定儀用砂芯坩堝排干時間>105s),采用酸性或者堿性清洗液進行清洗。如果清洗后排干時間仍不能滿足要求，則舍棄不用。注2:新砂芯坩堝使用前洗干凈，500℃±20℃灼燒1h。注3:每次使用后洗干凈，500℃±20℃灼燒3h,去除灰分，超聲清洗10min,用熱水淋洗，室溫下用水浸泡至少如果試樣水分含量大于15%,應(yīng)先將試樣在低于60℃烘箱中風(fēng)干，使其水分達到15%以下。按GB/T20195制備樣品，至少200g,粉碎使其全部通過1mm孔徑的分析篩，充分混勻，裝入密閉容器將潔凈的砂芯坩堝(4.3.3)于105℃±2℃干燥2h,取出，置于干燥器中冷卻30min,稱量(精確至平行做兩份試驗。根據(jù)試樣中中性洗滌纖維的含量，稱取試樣0.4g～1.0g,精確至0.0001g。試樣脂肪含量超過5%時應(yīng)預(yù)先脫脂，試樣置于砂芯坩堝(4.3.3)中，從4.5.3開始處理；不需要預(yù)先脫脂將砂芯坩堝(4.3.3)放在過濾裝置上，用丙酮脫脂4次，每次加入50mL丙酮，浸洗試樣5min,浸洗過程中攪拌3次。抽真空除去丙酮。在通風(fēng)櫥中揮發(fā)30min,去除殘余丙酮，把脫脂后的試樣轉(zhuǎn)移至燒杯(4.3.2)中。使用同一個砂芯坩堝收集洗滌后的中性洗滌纖維殘渣。3向每個燒杯(4.3.2)中加入0.5g無水亞硫酸鈉(4.2.2)、50mL中性洗滌溶液(4.2.6),輕搖分散樣品，防止試樣回流時黏在底部。加熱，5min內(nèi)煮沸，加入2試樣黏在底部或燒杯壁上。保證試樣充分翻滾，消煮60min±lmin。期間防止在回流燒杯上方產(chǎn)生過多泡沫把試樣顆粒附著在燒杯壁，試樣可能有1min～2min產(chǎn)生大量泡沫，不得降低加熱溫度。加入熱穩(wěn)定α-淀粉酶溶液5min～10min后，根據(jù)需要用最少量的中性洗滌溶液(4.2.6)沖洗回流燒杯壁，使樣品懸浮在中性洗滌溶液中，最多沖洗2次。從加熱裝置中取下燒杯(4.3.2),讓試樣顆粒沉降60s。觀察試樣消煮液，若溶液表面有脂質(zhì)小球，或發(fā)生乳化現(xiàn)象，表明試樣脂肪含量高，應(yīng)重新稱樣，從4.5.3開始操作。稱取5g助濾劑(4.2.7),精確至0.0001g,置于砂芯坩堝中。將攪拌棒放在砂芯坩堝上，加入40mL沸水浸洗60s,用真空抽干后，立即從回流燒杯中倒入40mL消煮液，保持回流燒杯在砂芯坩堝上方持續(xù)倒入消煮液，用最小真空度抽去剩余的溶液，并在殘渣變干前關(guān)閉真空。注：過度抽真空和過度干燥會導(dǎo)致試樣殘渣堵塞砂芯坩堝，以至于無法清洗。用攪拌棒刮取回流燒杯底部和燒杯壁的顆粒，用少量沸水將所有未轉(zhuǎn)移的試樣顆粒并入砂芯坩堝中，在砂芯坩堝中加入少量沸水至坩堝容量的一半，再加入2mL熱穩(wěn)定α-淀粉酶溶液(4.2.5),攪拌。讓熱穩(wěn)定α-淀粉酶反應(yīng)60s。抽除熱穩(wěn)定α-淀粉酶溶液，用30mL沸水將回流燒杯中的殘渣沖洗到砂芯坩堝中，加入沸水至砂芯坩堝容積3/4,浸洗3min。將水抽干，再加入50mL沸水，浸洗5min后抽干，重復(fù)1次。如果第一次浸洗后殘渣難以過濾，加入少量沸水至坩堝容量的一半，再加入2mL熱穩(wěn)定α-淀粉酶溶液(4.2.5),攪拌，讓熱穩(wěn)定α-淀粉酶反應(yīng)60s后，抽除熱穩(wěn)定α-淀粉酶溶液，再重復(fù)上述沸水浸洗操作。如果砂芯坩堝堵塞，可以從過濾裝置上取下反向沖洗底部后重新插入。將水抽至近干，加入50mL丙酮，攪拌使顆粒分散，浸洗5min,抽干，重復(fù)1次。用水沖洗攪拌棒上所有黏附顆粒至砂芯坩堝中。注：加入丙酮之前不能將水完全抽干，如殘留物過度干燥結(jié)塊，其顆粒難以分散于丙酮，不利于丙酮萃取。用真空抽干，從過濾裝置取下砂芯坩堝，在通風(fēng)櫥中揮發(fā)30min,去除殘余丙酮。將砂芯坩堝置于干燥箱中，105℃±2℃干燥4h,取出，放入干燥器中冷卻30min,稱重，精確至0.0001g,直至恒重(2次稱量結(jié)果之差不超過0.002g)。取已干燥、稱重的潔凈砂芯坩堝，用相同質(zhì)量的助濾劑(4.2.7),不加試樣，按4.5.4～4.5.6進行空白試驗。若采用纖維測定儀，按儀器操作說明書進行測定。4.6試驗數(shù)據(jù)處理試樣中中性洗滌纖維(NDF)的含量w?以質(zhì)量分?jǐn)?shù)計，數(shù)值以質(zhì)量分?jǐn)?shù)(%)表示，按式(1)計算。 (1)4式中：m?——試樣、助濾劑和砂芯坩堝經(jīng)消煮干燥后的總質(zhì)量，單位為克(g);m?——試樣測定用砂芯坩堝質(zhì)量，單位為克(g);m?——試樣測定用助濾劑質(zhì)量，單位為克(g);ma——空白試驗砂芯坩堝和助濾劑經(jīng)消煮干燥后的總質(zhì)量，單位為克(g);mn——空白試驗用砂芯坩堝質(zhì)量，單位為克(g);mh?——空白試驗用助濾劑質(zhì)量，單位為克(g);m?——試樣質(zhì)量，單位為克(g)。測定結(jié)果以平行測定的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留至小數(shù)點后1位。4.7精密度在重復(fù)性條件下，當(dāng)中性洗滌纖維(NDF)含量≤10%時，2次獨立測定結(jié)果與其算術(shù)平均值的絕對差值不大于該算術(shù)平均值的5%;當(dāng)中性洗滌纖維(NDF)含量>10%時，2次獨立測定結(jié)果與其算術(shù)平均值的絕對差值不大于該算術(shù)平均值的3%。5濾袋法5.1原理5.2試劑或材料除非另有規(guī)定，僅使用分析純試劑。5.2.2無水亞硫酸鈉(Na?SO?)。5.2.4熱穩(wěn)定α-淀粉酶溶液：購置熱穩(wěn)定α-淀粉酶。使用前按照附錄A對熱穩(wěn)定α-淀粉酶進行校準(zhǔn)和稀釋，保證稀釋后的2mL熱穩(wěn)定α-淀粉酶溶液可以除去0.5g生玉米粉中的淀粉。稀釋后的熱穩(wěn)定α-淀粉酶溶液2℃~8℃保存，有效期5d。5.2.5中性洗滌溶液：量取500mL水于1000mL燒杯中，加入18.6g乙二胺四乙酸二鈉(C?H??N?O?Na?·2H?O)、4.56g無水磷酸氫二鈉(Na?HPO?)和6.81g四硼酸鈉(Na?B?O?·10H?O),加熱溶解，混勻，置于通風(fēng)櫥中。加入30g十二烷基硫酸鈉(C?H??NaO?S),溶解后加入10mL二縮三乙二醇(C?H??O?)消除泡沫，加水至約950mL,攪拌均勻，用濃鹽酸或氫氧化鈉將pH調(diào)至6.95～7.05,用水稀釋至1000mL。室溫保存。注：如果pH偏離超過0.5,則舍棄該溶液，重新配制。如果溶液出現(xiàn)沉淀，使用前加熱至25℃,并重新調(diào)節(jié)pH至5.3儀器設(shè)備55.3.2回流消煮裝置：配有600mL燒杯、獨立加熱單元、適配600mL燒杯的水冷凝器，或采用按照5.1原理制造的纖維測定儀。5.3.3干燥箱：控溫精度士2℃。5.3.5濾袋：孔徑20μm～25μm,可耐受熱穩(wěn)定α-淀粉酶、中性洗滌溶液消煮。同4.4。5.5試驗步驟5.5.1稱量試樣平行做兩份試驗。取經(jīng)105℃±2℃干燥2h、在干燥器中冷卻至室溫的濾袋(5.3.5)稱重(精確至0.0001g)。稱取試樣0.5g(精確至0.0001g)于濾袋中，濾袋封口。樣品體積一般不超過濾袋容量的1/2,如太滿，可適當(dāng)減少稱樣量，但不得低于0.2g。試樣脂肪含量超過5%應(yīng)預(yù)先脫脂，從5.5.2開始操作；若試樣不需要預(yù)先脫脂，從5.5.3開始操作。脂肪含量未知試樣建議預(yù)先脫脂。5.5.2預(yù)先脫脂將裝有試樣的濾袋放入燒杯中，置于通風(fēng)櫥中，加入丙酮(5.2.3),使樣品完全浸沒，浸泡5min,期間用玻璃棒輕輕攪拌翻動2次，或取出濾袋反復(fù)浸沒2次，倒去燒杯中的丙酮。重復(fù)操作3次。取出濾袋，放在濾紙(5.2.7)上，輕輕擠壓去除濾袋上的丙酮，在通風(fēng)櫥中揮發(fā)30min,去除殘余丙酮。將裝有試樣的濾袋分散放入回流消煮裝置(5.3.2)中，安裝好回流消煮裝置，每個濾袋加入0.5g無水亞硫酸鈉(5.2.2)、2mL熱穩(wěn)定α-淀粉酶溶液(5.2.4)、50mL中性洗滌溶液(5.2.5)。打開冷卻水，5min內(nèi)加熱試樣溶液至沸騰。調(diào)節(jié)加熱裝置，保持溶液沸騰，持續(xù)消煮60min±1min。必要時加3mL～5mL硅油(5.2.6)消除泡沫。消煮過程應(yīng)保證濾袋完全浸沒于溶液中，每10min至少翻動1次，保證試樣被充分消煮。取出濾袋，在濾紙(5.2.7)上輕輕擠壓去除消煮液。轉(zhuǎn)移濾袋至燒杯中，用80℃熱水浸泡、洗滌濾袋，使試樣完全浸沒，浸泡5min,期間用玻棒輕輕攪拌翻動2次，或取出濾袋反復(fù)浸沒2次，倒去燒杯中的水，重復(fù)洗滌3次；將濾袋放在濾紙(5.2.7)上輕輕擠壓去除濾袋上的水，用水沖洗濾袋外表面，再次輕輕擠壓濾袋除水，重復(fù)至浸出液無持續(xù)泡沫產(chǎn)生。將洗滌好的濾袋放入燒杯中，加入丙酮(5.2.3),使試樣完全浸沒，浸泡5min,期間用玻璃棒輕輕攪拌翻動2次，或取出濾袋反復(fù)浸沒2次；倒去燒杯中的丙酮，將濾袋放在濾紙(5.2.7)上輕輕擠壓去除濾袋上的丙酮，重復(fù)洗滌2次。如果濾出物仍有顏色，需再次用丙酮重復(fù)清洗、擠壓，直至浸出液無色。將洗滌后的濾袋在通風(fēng)櫥中揮發(fā)30min,去除殘余丙酮，于105℃±2℃干燥4h,取出，置于干燥6GB/T20806—2022器中冷卻30min,稱量，精確至0.0001g,直至恒重(2次稱量結(jié)果之差小于0.002g)。若采用纖維測定儀，按儀器操作說明書進行測定。5.6試驗數(shù)據(jù)處理試樣中中性洗滌纖維(NDF)的含量w?以質(zhì)量分?jǐn)?shù)計，數(shù)值以質(zhì)量分?jǐn)?shù)(%)表示，按式(2)計算。式中：m?——試樣、濾袋經(jīng)消煮干燥后的總質(zhì)量，單位為克(g);ms——試樣測定用濾袋質(zhì)量，單位為克(g);mhs——空白試驗濾袋經(jīng)消煮干燥后的質(zhì)量，單位為克(g);m?——空白試驗用濾袋質(zhì)量，單位為克(g);ms——試樣質(zhì)量，單位為克(g)。測定結(jié)果以平行測定的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留至小數(shù)點后1位。5.7精密度…………在重復(fù)性條件下，當(dāng)中性洗滌纖維(NDF)含量≤10%時，2次獨立測定結(jié)果與其算術(shù)平均值的絕對差值不大于該算術(shù)平均值的5%;當(dāng)中性洗滌纖維(NDF)含量>10%時，2次獨立測定結(jié)果與其算術(shù)平均值的絕對差值不大于該算術(shù)平均值的3%。7(規(guī)范性)熱穩(wěn)定α-淀粉酶的校準(zhǔn)和稀釋A.1試劑或材料除非另有規(guī)定，僅使用分析純試劑。A.1.2中性洗滌溶液：量取500mL水于1000mL燒杯中，加入18.6g乙二胺四乙酸二鈉(C。H??N?O?Na?·2H?O)、4.56g無水磷酸氫二鈉(Na?HPO?)和6.81g四硼酸鈉(Na?B?O?·10H?O),加熱溶解，混勻，置于通風(fēng)櫥中。加入30g十二烷基硫酸鈉(C?H??NaO?S),溶解后加入10mL二縮三乙二醇(C?H??O?)消除泡沫，加水至約950mL,攪拌均勻，用濃鹽酸或氫氧化鈉將pH調(diào)至6.95～7.05,用水稀釋至1000mL。室溫保存。注：如果pH偏離超過0.5,則舍棄該溶液，重新配制。如果溶液出現(xiàn)沉淀，使用前加熱至25℃,并重新調(diào)節(jié)pH至A.1.4生玉米粉：取約100g水分含量低于14%的生玉米，粉碎使其全部通過1.00mm孔徑分析篩，混A.1.5玻璃纖維。A.2儀器設(shè)備A.2.1分析天平：精度0.0001g。A.2.2回流消煮裝置：配有600mL燒杯、獨立加熱單元和適配600mL燒杯的水冷凝器。A.2.4恒溫水?。嚎杀３譁囟葹?0℃±0.5℃。A.3試驗步驟溶液(A.1.2),搖勻。量取50mL中性洗滌溶液(A.1.2),置于100mL燒杯中，加入0.10mL熱穩(wěn)定α-A.3.2將6個燒杯(A.2.2)連接到回流消煮裝置上，加熱，5min內(nèi)煮沸，向6個燒杯(A.2.2)中分別加入0mL、0.025mL、0.05mL、0.10mL、0.20mL、0.40mL熱穩(wěn)定α-淀粉酶，回流消煮10min,1min內(nèi)全部取下，分別再次加入0mL、0.025mL