GBT 21607-2022 化學(xué)品 一代繁殖毒性試驗(yàn)方法

CCSA80代替GB/T21607—2008化學(xué)品一代繁殖毒性試驗(yàn)方法國家市場監(jiān)督管理總局I本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件代替GB/T21607—2008《化學(xué)品一代繁殖毒性試驗(yàn)方法》,與GB/T21607—2008相比，除結(jié)構(gòu)調(diào)整和編輯性改動外，主要技術(shù)變化如下：——更改了實(shí)驗(yàn)動物種屬和品系的選擇規(guī)定中的部分內(nèi)容(見4.1,2008年版的4.1);——更改了試驗(yàn)步驟中分組和對照規(guī)定中的部分內(nèi)容(見5.1,2008年版的5.1);——更改了染毒時(shí)間和程序(見5.4,2008年版的5.4)。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由全國危險(xiǎn)化學(xué)品管理標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(SAC/TC251)提出并歸口。本文件起草單位：天津海關(guān)工業(yè)產(chǎn)品安全技術(shù)中心、中檢科健(天津)檢驗(yàn)檢測有限責(zé)任公司、天津工業(yè)大學(xué)、廈門凱越特科技有限公司、廣東義勝檢測有限公司。向小云。本文件及其所代替文件的歷次版本發(fā)布情況為：——2008年首次發(fā)布為GB/T21607—2008;——本次為第一次修訂。1化學(xué)品一代繁殖毒性試驗(yàn)方法本文件規(guī)定了化學(xué)品的一代繁殖毒性試驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)動物、試驗(yàn)步驟、結(jié)果評價(jià)、試驗(yàn)報(bào)告、試驗(yàn)結(jié)果的解釋。本文件適用于化學(xué)品的一代繁殖毒性的試驗(yàn)。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T14924.1實(shí)驗(yàn)動物配合飼料通用質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)GB14925實(shí)驗(yàn)動物環(huán)境及設(shè)施3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。繁殖毒性reproductiontoxicity化學(xué)品引起的雌性或雄性實(shí)驗(yàn)動物生殖功能的損傷或生殖能力的降低，或引起子代的非遺傳性不良效應(yīng)。注1:生殖能力降低，如繁殖率的下降。注2:子代的非遺傳性不良效應(yīng)，如生長發(fā)育毒性，包括哺乳期的健康損害效應(yīng)和致畸性。4實(shí)驗(yàn)動物4.1實(shí)驗(yàn)動物的選擇選擇健康初成年且至少經(jīng)過5d適應(yīng)期的實(shí)驗(yàn)動物(首選大鼠或小鼠)來進(jìn)行繁殖毒性試驗(yàn)。雌性動物應(yīng)選擇未產(chǎn)過仔的。試驗(yàn)開始時(shí)動物體重的差異不應(yīng)超過平均體重的士20%。4.2實(shí)驗(yàn)動物的數(shù)量雄性和雌性實(shí)驗(yàn)動物按1:1或1:2的比例合籠交配。交配的實(shí)驗(yàn)動物數(shù)應(yīng)保證每個(gè)劑量組及空白對照組都能獲得20只左右懷孕的實(shí)驗(yàn)動物。4.3飼養(yǎng)環(huán)境實(shí)驗(yàn)動物的飼養(yǎng)和環(huán)境設(shè)施應(yīng)符合GB/T14924.1和GB14925的要求。實(shí)驗(yàn)動物自由飲食。懷孕的實(shí)驗(yàn)動物臨近分娩時(shí)，應(yīng)單籠飼養(yǎng)，需要時(shí)在分娩籠中放置造窩墊料。25試驗(yàn)步驟5.1分組和對照染毒前將實(shí)驗(yàn)動物隨機(jī)分為受試劑量組和空白對照組。如果受試樣品使用賦形劑，空白對照組應(yīng)采用賦形劑的試驗(yàn)組最大使用量進(jìn)行平行染毒。如果受試樣品引起動物食物攝入量和利用率下降時(shí)，那么空白對照組的實(shí)驗(yàn)動物應(yīng)與受試劑量組實(shí)驗(yàn)動物配對喂飼。5.2劑量水平試驗(yàn)至少設(shè)最高劑量、中間劑量、低劑量三個(gè)劑量組和一個(gè)空白對照組。最高劑量應(yīng)使親代實(shí)驗(yàn)動物(F0代)出現(xiàn)明顯的毒性反應(yīng)，但不引起實(shí)驗(yàn)動物死亡；中間劑量可引起輕微的毒性反應(yīng)；低劑量應(yīng)不引起實(shí)驗(yàn)動物及其子代的任何毒性反應(yīng)。如果受試樣品的毒性較低，劑量達(dá)到1000mg/kg時(shí)，仍未對繁殖過程產(chǎn)生任何毒作用，則可以采用限量試驗(yàn)，即試驗(yàn)不設(shè)其他劑量組。若高劑量的預(yù)試驗(yàn)觀察到明顯的母體(F0代)毒性作用，但對生育無影響，也可以采用預(yù)試驗(yàn)的高劑量進(jìn)行限量試驗(yàn)。5.3染毒劑量如果受試樣品是通過灌胃或膠囊染毒時(shí)，給樣量應(yīng)按每只實(shí)驗(yàn)動物的體重來確定，且每周進(jìn)行調(diào)整。對于妊娠期的母體(FO代),給樣量應(yīng)按每日體重計(jì)算，或按妊娠的第0天或第5天的體重計(jì)算。5.4染毒時(shí)間和程序?qū)嶒?yàn)動物染毒時(shí)間，如采用大鼠，雄性FO代至少適應(yīng)5d后開始給與受試樣品，染毒時(shí)間不少于10周，如采用小鼠，染毒時(shí)間約8周(至少覆蓋一個(gè)完整的精子生長周期)。交配后處死雄性實(shí)驗(yàn)動物并進(jìn)行檢查，或保留雄性實(shí)驗(yàn)動物至第二窩生產(chǎn)后試驗(yàn)結(jié)束前處死并進(jìn)行大體解剖和指標(biāo)檢測。對于雌性大鼠F0代，至少適應(yīng)5d后開始給與受試物，給與時(shí)間從交配期兩周前開始并覆蓋交配期(3周時(shí)間)、妊娠期直到F1代斷乳的整個(gè)周期。5.5交配程序5.5.1雄性和雌性實(shí)驗(yàn)動物按1:1或1:2的比例進(jìn)行交配。5.5.2雌性實(shí)驗(yàn)動物應(yīng)始終與同劑量組的同一只雄性實(shí)驗(yàn)動物合籠直至受孕，合籠最長時(shí)間可為3周。將檢查到精子或陰栓的當(dāng)天計(jì)為雌性實(shí)驗(yàn)動物妊娠的第0天(判為交配成功實(shí)驗(yàn)動物)。5.6窩的規(guī)格出生后的第4天，應(yīng)將幼仔數(shù)盡量隨機(jī)調(diào)整到每窩4雌和4雄。若得不到4雌和4雄，可作不均等的調(diào)整(如5雄3雌),但每窩的幼仔數(shù)至少為8只。5.7觀察及檢查每日應(yīng)至少觀察實(shí)驗(yàn)動物一次，記錄有無行為改變，難產(chǎn)或滯產(chǎn)以及所有的毒性反應(yīng)(包括死亡)。3GB/T21607—20225.7.2體重和食物攝入量5.7.2.1在交配前和交配期，應(yīng)測定每只實(shí)驗(yàn)動物每天的食物攝入量(交配期間雌、雄實(shí)驗(yàn)動物攝食量分別按交配前一周平均值計(jì)算)。5.7.2.2產(chǎn)仔后，每窩幼仔稱量體重時(shí)，母體(F0代)的食物攝入量也應(yīng)同時(shí)計(jì)算。5.7.2.3如受試樣品是添加到水中進(jìn)行染毒的，還應(yīng)記錄水的攝入量。5.7.2.4親代實(shí)驗(yàn)動物(FO代)應(yīng)在染毒的第1天進(jìn)行稱重，之后每周稱量體重一次。5.7.2.5妊娠周期應(yīng)從懷孕的第0天開始計(jì)算。生產(chǎn)下的幼仔應(yīng)盡早分辨性別，記錄每窩的出生數(shù)、活仔數(shù)以及幼仔外觀有無異常和畸形，同時(shí)記錄母體(F0代)或幼仔在生理上和行為上的異常表現(xiàn)。5.7.2.6以每窩為單位，對幼仔于出生的當(dāng)天、第4天、第7天、第14天和第21天進(jìn)行稱重，并記錄母體(F0代)或幼仔在生理上和行為上的異常表現(xiàn)。5.7.3大體解剖檢查死亡和到期處死的親代實(shí)驗(yàn)動物(FO代)都應(yīng)解剖進(jìn)行大體檢查，肉眼觀察有無組織器官形態(tài)上的改變，特別是生殖器官。死亡或?yàn)l臨死亡的幼仔也應(yīng)接受檢查，查看是否有外觀或器官形態(tài)上的缺陷。5.7.4病理組織學(xué)檢查保留解剖檢查的所有親代實(shí)驗(yàn)動物(FO凝固腺、腦下垂體和靶器官標(biāo)本。先對最高劑量組和空白對照組的動物標(biāo)本以及剖檢中發(fā)現(xiàn)異常的標(biāo)本進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。如最高劑量組沒有發(fā)現(xiàn)有意義的病變，其他劑量組的標(biāo)本可不再進(jìn)行病理檢查。若最高劑量組發(fā)現(xiàn)有意義的病理改變，則其他劑量組相關(guān)的標(biāo)本也應(yīng)做進(jìn)一步的檢查。6結(jié)果評價(jià)6.1繁殖指數(shù)通過參數(shù)計(jì)算公式(1)～公式(5)評價(jià)繁殖指數(shù)。 (1) (2) (3) (4) (5)6.2數(shù)據(jù)處理6.2.1用列表表示試驗(yàn)數(shù)據(jù)，表中應(yīng)顯示每組的實(shí)驗(yàn)動物數(shù)、交配的雄性動物數(shù)、受孕的雌性動物數(shù)、各種毒性反應(yīng)，包括但不限于生殖率的改變、臨床異常、體重減輕、死亡率的影響及其他的毒性反應(yīng)。6.2.2應(yīng)采用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)方法對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。6.3結(jié)果評價(jià)應(yīng)逐一比較空白對照組與受試劑量組動物繁殖指數(shù)是否有顯著性差異，還可根據(jù)出現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異4的指標(biāo)(如體重等觀察指標(biāo)、大體解剖和病理組織學(xué)檢查結(jié)果等),進(jìn)一步估計(jì)繁殖毒性的損害作用7試驗(yàn)報(bào)告試驗(yàn)報(bào)告應(yīng)包括以下內(nèi)容：——實(shí)驗(yàn)動物的種屬、品系、性別、體重、數(shù)量和來源(注明實(shí)驗(yàn)動物合格證號和實(shí)驗(yàn)動物級別);——實(shí)驗(yàn)動物飼養(yǎng)環(huán)境，包括飼料來源、室溫、相對濕度、合籠或單籠飼養(yǎng)、實(shí)驗(yàn)動物使用許可證號；——親代實(shí)驗(yàn)動物(F0代)的食物攝入量和體重資料；——按性別和劑量組分別記錄的毒性反應(yīng)，包括繁殖、妊娠和發(fā)育能力的異常；——試驗(yàn)過程中，動物死亡的時(shí)間以及試驗(yàn)到期時(shí)是否還有存活的動物；——每窩幼仔的體重和幼仔的平均體重，以及試驗(yàn)后期單個(gè)幼仔的重量；——任何有關(guān)繁殖、幼仔及其生長發(fā)育的毒性和其他健康損害效應(yīng)；——觀察到的各種異常癥狀的時(shí)間和持續(xù)過程； 大體解剖檢查的結(jié)果——詳述病理組織學(xué)檢查結(jié)果；——統(tǒng)計(jì)分析的結(jié)果；——結(jié)論。8試驗(yàn)結(jié)果的解釋本試驗(yàn)可反映實(shí)驗(yàn)動物在多次接觸某一受試樣品后所產(chǎn)生的一代繁殖毒性。在分析結(jié)果時(shí)，應(yīng)將其與亞慢性試驗(yàn)、致畸試驗(yàn)以