微生物誘變育種致遺傳物質(zhì)損傷強(qiáng)度測定 umu法征求意見稿編制說明

PAGE1PAGE一、任務(wù)來源本國家標(biāo)準(zhǔn)的制定任務(wù)列入國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會2017年第三批國家標(biāo)準(zhǔn)制修訂計劃，項目編號“20171811-T-424”。該標(biāo)準(zhǔn)由由中國標(biāo)準(zhǔn)化研究院提出并歸口，由清華大學(xué)等單位承擔(dān)該標(biāo)準(zhǔn)的制定任務(wù)。二、目的和意義基于SOS響應(yīng)系統(tǒng)國內(nèi)外開發(fā)了多種環(huán)境毒性物質(zhì)和致癌物質(zhì)的快速定量檢測方法。這些方法的原理是致癌物質(zhì)通常會引起DNA損傷，而細(xì)胞在發(fā)生DNA損傷時會誘導(dǎo)SOS系統(tǒng)響應(yīng)。DNA損傷程度越高，SOS響應(yīng)越強(qiáng)。將SOS系統(tǒng)調(diào)控基因與指示基因相融合，通過檢測指示基因編碼蛋白活性或信號強(qiáng)度，即可得到SOS基因的表達(dá)強(qiáng)度，表征DNA損傷強(qiáng)度和環(huán)境致癌物質(zhì)濃度。具體方法有SOSchromotest,ADP1_recA_lux,umu-test等。其中umu-test因準(zhǔn)確度高被廣泛采用。國際標(biāo)準(zhǔn)ISO13829-2000用umu-test測定水及廢水的遺傳毒性。國內(nèi)還沒有類似標(biāo)準(zhǔn)出現(xiàn)?；谝陨戏N種情況，我們建立了一種快速、可靠的DNA損傷檢測方法同時確立了一種類似標(biāo)準(zhǔn)。三、標(biāo)準(zhǔn)制訂原則1、標(biāo)準(zhǔn)編寫遵循GB1.1-2009《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫規(guī)則》的有關(guān)要求。2、標(biāo)準(zhǔn)編寫內(nèi)容參考的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，包括：GB/T20001.4-2015標(biāo)準(zhǔn)編寫規(guī)則第4部分GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法；YY/T0588-2005流式細(xì)胞儀ISO13829-2000水質(zhì)用UMU試驗法測定水和廢水的遺傳毒性3、法律、法規(guī)及文件《中華人民共和國標(biāo)準(zhǔn)化法》《中華人民共和國標(biāo)準(zhǔn)化法實施條例》《國家標(biāo)準(zhǔn)化體系建設(shè)發(fā)展規(guī)劃（2016—2020年）》《深化標(biāo)準(zhǔn)化工作改革方案》四、標(biāo)準(zhǔn)主要技術(shù)內(nèi)容本標(biāo)準(zhǔn)方法屬于生物技術(shù)范疇，主要用于微生物誘變育種致遺傳物質(zhì)損傷強(qiáng)度測定，采用方法是umu-test和FACS-umu-test法?；趗mu-test原理，選擇β-半乳糖苷酶的熒光底物，并以碘化丙啶（PI）作為檢測死細(xì)胞的熒光染料，結(jié)合流式細(xì)胞儀，構(gòu)建單個活細(xì)胞水平的胞內(nèi)DNA損傷強(qiáng)度定量手段。本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了微生物誘變育種的術(shù)語和定義、原理、測試微生物及傳代、儀器設(shè)備及器具、化學(xué)誘變、紫外或等離子體誘變、umu-test測試、umu-test檢測、umu-test結(jié)果計算和表示、umu-test精確度、umu-test有效準(zhǔn)則、umu-test測試報告及FACS-umu-test測試程序。五、工作過程1、成立工作組《微生物誘變育種致遺傳物質(zhì)損傷強(qiáng)度測定umu法》項目組2016年接到編制任務(wù)，開展資料收集、分析和試驗工作。、2、調(diào)查研究工作首先研究了國際標(biāo)準(zhǔn)《ISO13829-2000水質(zhì)用UMU試驗法測定水和廢水的遺傳毒性》（英文版），了解了國外umu試驗的相關(guān)要求。通過試驗證實了FACS-umu-test方法中熒光底物的選擇、流式細(xì)胞儀測定胞內(nèi)熒光素含量的可行性；通過FACS-umu-test測試了不同誘變方法對活細(xì)胞的DNA損傷強(qiáng)度；比較了FACS-umu-test方法和ADP1_RecA_Lux方法測定結(jié)果（。3、編寫過程說明為了使編制的標(biāo)準(zhǔn)能更好的適用微生物誘變育種致遺傳物質(zhì)損傷強(qiáng)度測定，在2016年10月提出了標(biāo)準(zhǔn)討論提綱，確定了編制原則和主要內(nèi)容。該標(biāo)準(zhǔn)于2017年10月在全國標(biāo)準(zhǔn)信息公共服務(wù)平臺上進(jìn)行公示，于2019年2月召開專家會，聽取專家意見。六、方法驗證及結(jié)果方法驗證1：FACS-umu-test試驗方法的建立驗證材料：熒光素-2-β-D-吡喃半乳糖苷溶液，氯化氫，c(HCl)=1mol/l，氫氧化鈉c(NaOH)=1mol/l，二甲基亞砜(DMSO)，TGA培養(yǎng)基，磷酸緩沖液pH(7.0±0.2)，鄰硝基-β-D-半乳糖苷溶液，碘化丙啶溶液驗證過程：熒光底物的選擇：熒光素2-β-D-吡喃半乳糖苷（Fluoresceindi-beta-D-galactopyranoside,FDG）本身不具有熒光，其被β-半乳糖苷酶水解后的產(chǎn)物熒光素具有熒光。碘化丙啶（PropidiumIodide,PI）是一種DNA熒光染料，只能進(jìn)入失去細(xì)胞膜選擇通透性的細(xì)胞，即死細(xì)胞中，因此可以用于區(qū)分活死細(xì)胞。通過在2mM的FDG中，37℃水浴中處理2min，使得FDG快速、均一的進(jìn)入每個細(xì)胞。進(jìn)入細(xì)胞的FDG被β-半乳糖苷酶水解產(chǎn)生熒光素，在一定時間內(nèi)測定，熒光素的濃度和β-半乳糖苷酶活性成正比。但是由于流式細(xì)胞儀只能測定胞內(nèi)的熒光物質(zhì)，因此最主要的問題是如何保證產(chǎn)生的熒光素不泄露到胞外。前期研究表明，在5℃下，熒光素的跨膜速率比37℃降低200倍以上，而β-半乳糖苷酶的反應(yīng)速率只降低了10倍ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>Nolan</Author><Year>1988</Year><RecNum>2783</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[128]</style></DisplayText><record><rec-number>2783</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="50wxdpzd9vd5r7e9t5b595djrfpttrxw9avp">2783</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>Nolan,G.P.</author><author>Fiering,S.</author><author>Nicolas,J.F.</author><author>Herzenberg,L.A.</author></authors></contributors><titles><title><styleface="normal"font="default"size="100%">Fluorescence-activatedcellanalysisandsortingofviablemammaliancellsbasedonbeta-D-galactosidaseactivityaftertransductionof</style><styleface="italic"font="default"size="100%">EscherichiacolilacZ</style></title><secondary-title>ProceedingsoftheNationalAcademyofSciencesoftheUnitedStatesofAmerica</secondary-title></titles><periodical><full-title>ProceedingsoftheNationalAcademyofSciencesoftheUnitedStatesofAmerica</full-title><abbr-1>Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.</abbr-1><abbr-2>ProcNatlAcadSciUSA</abbr-2></periodical><pages>2603-2607</pages><volume>85</volume><number>8</number><dates><year>1988</year><pub-dates><date>Apr</date></pub-dates></dates><isbn>0027-8424</isbn><accession-num>WOS:A1988N023400040</accession-num><urls><related-urls><url><GotoISI>://WOS:A1988N023400040</url></related-urls></urls><electronic-resource-num>10.1073/pnas.85.8.2603</electronic-resource-num></record></Cite></EndNote>。為驗證低溫對防止熒光素泄露的作用，測定原始菌株和ARTP處理1min的菌株在冰上反應(yīng)和37℃條件下反應(yīng)，產(chǎn)生的熒光素的泄露程度。取反應(yīng)不同時間兩種溫度條件下的菌液，利用0.22m的過濾膜過濾菌體，利用熒光分光光度計測定胞外熒光素濃度。圖1.在冰上和37℃條件下胞外熒光素的濃度隨反應(yīng)時間變化（n=3）驗證結(jié)果：如圖1顯示，冰上反應(yīng)，在反應(yīng)時間增加到90min時，胞外的熒光素濃度仍保持在很低水平。而37℃條件下反應(yīng)，胞外熒光素濃度隨反應(yīng)時間增加而不斷增大，說明隨熒光素在胞內(nèi)產(chǎn)生，不斷泄露到胞外。以上結(jié)果說明，冰上反應(yīng)能有效的防止熒光素的泄露。方法驗證2：流式細(xì)胞儀測定胞內(nèi)熒光素含量驗證過程：利用流式細(xì)胞儀測定胞內(nèi)熒光素含量，首先通過前向角散射光FSC和側(cè)向角散射光SSC圈出目標(biāo)菌體。前向角散射光與細(xì)胞相對大小有關(guān)，前向角散射光設(shè)為線性，前向角散射光太大，有可能是由于多個細(xì)胞粘連在一起，前向角散射光過小，有可能是細(xì)胞碎片或者雜質(zhì)，因此都需要在測定中去除。設(shè)置FSC的閾值為100，以去除雜質(zhì)的影響。通過畫門圈出目標(biāo)細(xì)胞，以去除多細(xì)胞粘連對結(jié)果的影響，如圖2所示。對圈出細(xì)胞進(jìn)行分析。首先只用PI染色，測定FL-1通道和FL-3通道的熒光值，在FL-1坐標(biāo)軸上圈出PI染色細(xì)胞，其FL-1通道熒光值較低，作為FL-1通道背景值（圖3a）。圖2流式細(xì)胞儀目標(biāo)細(xì)胞的劃定驗證結(jié)果：通過測定FDG染色的細(xì)胞，作為FL-3通道的背景值，即PI染色陰性細(xì)胞（圖3b）。對FDG和PI染色細(xì)胞進(jìn)行測定，如圖4所示。測定結(jié)果分為4個區(qū)域，其中R1和R2為死細(xì)胞，R3為熒光素?zé)晒獗尘爸?，可能為雜質(zhì)或不具有β-半乳糖苷酶活性的細(xì)胞，予以扣除。R4為目標(biāo)細(xì)胞群，用于后續(xù)分析。如圖4所示，R4中的每一個點的橫坐標(biāo)，即FL-1通道的熒光值，表示單個活細(xì)胞內(nèi)，在反應(yīng)60min后的相對熒光素?zé)晒庵?。相對熒光素?zé)晒庵蹬c體內(nèi)的β-半乳糖苷酶活性成正比，β-半乳糖苷酶活性表征了細(xì)胞的SOS誘導(dǎo)水平。利用流式細(xì)胞儀的CellQuest分析可以得到突變庫所有活細(xì)胞的相對熒光素?zé)晒庵档钠骄担蛔儙斓腟OS誘導(dǎo)系數(shù)定義為FiADDINEN.CITEADDINEN.CITE.DATA。Fi=其中Am為突變庫中所有活細(xì)胞的平均相對熒光素?zé)晒庵?，而Amc為原始細(xì)胞或陰性對照的活細(xì)胞的平均相對熒光素?zé)晒庵怠Ｍㄟ^定義突變庫的SOS誘導(dǎo)系數(shù)Fi，可以對不同突變庫的SOS誘導(dǎo)水平進(jìn)行比較。Fi值越高表示突變庫的DNA損傷強(qiáng)度越大。

圖3.3流式細(xì)胞儀FL1-H和FL3-H陰性細(xì)胞的劃分圖4.流式細(xì)胞儀測定結(jié)果（R1，R2，PI陽性細(xì)胞，為死細(xì)胞；R3，熒光素陰性細(xì)胞，未表達(dá)β-半乳糖苷酶活性；R4，目標(biāo)細(xì)胞群，具有β-半乳糖苷酶活性的活細(xì)胞）方法驗證3：FACS-umu-test定量檢測不同誘變方法對活細(xì)胞的DNA損傷強(qiáng)度驗證材料：熒光素-2-β-D-吡喃半乳糖苷溶液，氯化氫，c(HCl)=1mol/l，氫氧化鈉c(NaOH)=1mol/l，二甲基亞砜(DMSO)，TGA培養(yǎng)基，磷酸緩沖液pH(7.0±0.2)，鄰硝基-β-D-半乳糖苷溶液，碘化丙啶溶液方法驗證2.1：定量表征ARTP對活細(xì)胞的DNA損傷強(qiáng)度驗證過程：常壓室溫等離子體（Atmosphericandroomtemperatureplasma，ARTP）作為一種新興的誘變手段，具有操作快速、簡單，安全，突變率高等優(yōu)勢，目前已經(jīng)被成功應(yīng)用于包括細(xì)菌，真菌，藻類在內(nèi)超過40種微生物的誘變育種。用FACS-umu-test方法定量測定單位活細(xì)胞誘導(dǎo)系數(shù)隨ARTP誘變時間的變化。圖2.1ARTP處理不同時間構(gòu)建的突變庫的SOS誘導(dǎo)系數(shù)（n=3）驗證結(jié)果：不同ARTP處理所產(chǎn)生的SOS誘導(dǎo)系數(shù)測定結(jié)果顯示（圖2.1），當(dāng)ARTP處理時間在30s到75s范圍內(nèi)，隨著ARTP處理時間的增長，突變庫的SOS誘導(dǎo)水平增加，即突變庫中活細(xì)胞的胞內(nèi)DNA損傷強(qiáng)度增大。當(dāng)ARTP處理時間超過75s時，繼續(xù)增大ARTP處理時間，突變庫的SOS誘導(dǎo)水平增加并不明顯，SOS誘導(dǎo)系數(shù)的最大值為2.79±0.15。方法驗證：2.2定量檢測UV對活細(xì)胞的DNA損傷強(qiáng)度驗證過程：UV照射可以造成多種DNA損傷，包括DNA與蛋白質(zhì)的交聯(lián)，氧化性DNA損傷以及單鏈的DNA斷裂損傷。FACSumutest方法測定了UV照射不同時間對活細(xì)胞的DNA損傷強(qiáng)度變化，結(jié)果如圖2.2所示。圖2.2UV照射不同時間的SOS誘導(dǎo)系數(shù)（n=3）驗證結(jié)果：隨UV照射時間的增加，活細(xì)胞的SOS誘導(dǎo)系數(shù)增大，UV造成的DNA損傷強(qiáng)度增加。但UV構(gòu)成的突變庫的SOS誘導(dǎo)系數(shù)同樣存在最大值。在UV照射13min時SOS誘導(dǎo)系數(shù)最大，為1.66±0.11，明顯低于ARTP的最大SOS誘導(dǎo)系數(shù)。超過該照射時間，SOS誘導(dǎo)系數(shù)不再增大，說明活細(xì)胞對UV造成的DNA損傷同樣存在容忍極限。方法驗證2.3：定量檢測4-NQO對活細(xì)胞的DNA損傷強(qiáng)度驗證過程：4-硝基喹啉-1-氧化物（4-Nitroquinoline-N-Oxide，4-NQO）的代謝物為4-乙酰氨基喹啉-1-氧化物，該物質(zhì)可以共價加合到脫氧鳥苷酸的C8位和N2位，以及脫氧腺苷酸的N6位從而形成DNA共價加合物。另外4-NQO同樣能造成DNA的氧化損傷，或者造成DNA單鏈斷裂。利用基于FACSunu-test法定量測定了不同4-NQO處理劑量對DNA的損傷強(qiáng)度，如圖2.3所示。圖2.3不同4-NQO劑量的SOS誘導(dǎo)系數(shù)（n=3）驗證結(jié)果：不同4-NQO處理劑量造成的SOS誘導(dǎo)系數(shù)變化趨勢與ARTP，UV相似。在低劑量下，隨劑量增加，SOS誘導(dǎo)系數(shù)增大，當(dāng)4-NQO處理劑量超過0.8μg/ml后，隨4-NQO濃度增加，SOS誘導(dǎo)系數(shù)不再增大。4-NQO的最大誘導(dǎo)系數(shù)為1.50±0.13。方法驗證2.4：定量檢測MNNG對活細(xì)胞的DNA損傷強(qiáng)度驗證過程：N-甲基-N′-硝基-N-亞硝基胍（N-methyl-N’-nitro-N-nitrosoguanidine,MNNG）主要造成DNA的甲基化損傷，可以使DNA上的所有氧原子和大部分的氮原子發(fā)生甲基化。最主要的甲基化產(chǎn)物為N7甲基鳥嘌呤，甲基磷酸三酯，O6甲基鳥嘌呤和N3甲基腺嘌呤。MNNG不直接造成DNA的斷裂損傷，但通過堿基切除修復(fù)和核苷酸切除修復(fù)會造成DNA的鏈斷裂ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>Slamenova</Author><Year>1997</Year><RecNum>2493</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[14]</style></DisplayText><record><rec-number>2493</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="50wxdpzd9vd5r7e9t5b595djrfpttrxw9avp">2493</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>Slamenova,D.</author><author>Gabelova,A.</author><author>Ruzekova,L.</author><author>Chalupa,I.</author><author>Horvathova,E.</author><author>Farkasova,T.</author><author>Bozsakyova,E.</author><author>Stetina,R.</author></authors></contributors><titles><title>DetectionofMNNG-inducedDNAlesionsinmammaliancells;validationofcometassayagainstDNAunwindingtechnique,alkalineelutionofDNAandchromosomalaberrations</title><secondary-title>MutationResearch/DNARepair</secondary-title></titles><periodical><full-title>MutationResearch/DNARepair</full-title></periodical><pages>243-252</pages><volume>383</volume><number>3</number><dates><year>1997</year><pub-dates><date>May1</date></pub-dates></dates><isbn>0921-8777</isbn><accession-num>WOS:A1997WY26600007</accession-num><urls><related-urls><url><GotoISI>://WOS:A1997WY26600007</url></related-urls></urls><electronic-resource-num>10.1016/s0921-8777(97)00007-4</electronic-resource-num></record></Cite></EndNote>。利用基于FACS-unu-test法定量測定了不同MNNG誘變劑濃度對單個活細(xì)胞的DNA損傷強(qiáng)度（圖2.4）。圖B.4不同MNNG劑量的SOS誘導(dǎo)系數(shù)（n=3）驗證結(jié)果：如圖2.4所示，隨MNNG濃度的增加，SOS誘導(dǎo)系數(shù)呈現(xiàn)了與前三種誘變方法相同的趨勢。MNNG造成DNA損傷引起的最大SOS誘導(dǎo)系數(shù)值為1.58±0.07。驗證結(jié)果2.5：不同誘變方法的活細(xì)胞內(nèi)DNA損傷的比較驗證過程：通過測定ARTP，紫外照射，兩種常用化學(xué)誘變劑4-NQO和MNNG的SOS誘導(dǎo)系數(shù)，可以看出不同誘變劑量下引起的SOS誘導(dǎo)系數(shù)均存在最大值，達(dá)到該最大值后繼續(xù)增加誘變劑量，SOS誘導(dǎo)系數(shù)不再增加。對于不同的誘變方法，SOS誘導(dǎo)系數(shù)的最大值也不同，ARTP的最大SOS誘導(dǎo)系數(shù)高于其他三種誘變方法(圖2.5)。圖2.5不同誘變方法的最大SOS誘導(dǎo)系數(shù)（n=3）驗證結(jié)果：將對照樣品的平均胞內(nèi)熒光素相對熒光強(qiáng)度設(shè)為標(biāo)準(zhǔn)值，統(tǒng)計了各種突變方法在最大SOS誘導(dǎo)系數(shù)的誘變劑量下，構(gòu)成的突變庫中相對熒光強(qiáng)度高于該標(biāo)準(zhǔn)值的細(xì)胞的比例。ARTP，UV，4-NQO和MNNG四種誘變方法分別為35%，26%，17%，和16.5%。方法驗證3.：FACS-umu-test方法與ADP1_RecA_Lux方法測定結(jié)果的比較驗證材料：熒光素-2-β-D-吡喃半乳糖苷溶液，氯化氫，c(HCl)=1mol/l，氫氧化鈉c(NaOH)=1mol/l，二甲基亞砜(DMSO)，TGA培養(yǎng)基，磷酸緩沖液pH(7.0±0.2)，鄰硝基-β-D-半乳糖苷溶液，碘化丙啶溶液驗證過程：ADP1_RecA_Lux是一種常用的DNA毒性檢測方法，該檢測方法使用AcinetobacterbaylyiADP1作為模式菌株，來自Photorhabdusluminescens的生物發(fā)光基因luxCDABE作為報告基因，將其與SOS系統(tǒng)的重要調(diào)節(jié)基因recA進(jìn)行融合，導(dǎo)入到AcinetobacterbaylyiADP1的基因組。當(dāng)細(xì)胞發(fā)生DNA損傷時，誘導(dǎo)SOS系統(tǒng)的響應(yīng)，recA表達(dá)，其表達(dá)強(qiáng)度可以通過生物發(fā)光信號進(jìn)行檢測。相對發(fā)光強(qiáng)度定義為光強(qiáng)度除以細(xì)胞的光密度（OD600），誘導(dǎo)系數(shù)Fi定義為樣品的相對發(fā)光強(qiáng)度除以沒有毒性處理的對照樣品的相對生物發(fā)光強(qiáng)度。將ADP1_RecA_Lux方法應(yīng)用于檢測ARTP對DNA的損傷強(qiáng)度。驗證結(jié)果：ADP1_RecA_Lux方法對ARTP不同時間的DNA損傷結(jié)果顯示（圖3.1），在ARTP處理時間不高于90s時，隨著處理時間的增長，樣品中總細(xì)胞的SOS誘導(dǎo)系數(shù)增加，ARTP對DNA損傷強(qiáng)度增大。當(dāng)ARTP處理時間增加到105s時，樣品中總細(xì)胞的SOS誘導(dǎo)系數(shù)反而降低，而用流式細(xì)胞儀的測定結(jié)果顯示，ARTP處理時間為105s時，其對胞內(nèi)DNA的損傷程度持續(xù)增高達(dá)到最大值。兩種測定方法結(jié)果的差異主要是由于采用流式細(xì)胞儀的方法，我們檢測的是突變庫中活細(xì)胞的DNA損傷，而ADP1_RecA_Lux方法我們檢測的是樣品中總細(xì)胞的DNA損傷，包括活細(xì)胞和由于ARTP處理而造成死亡的細(xì)胞。這些死細(xì)胞在細(xì)胞密度測量時同樣有貢獻(xiàn)。當(dāng)ARTP處理時間低于90s時，ARTP作用劑量較低，對菌體的致死率低，因此少量的死細(xì)胞對細(xì)胞密度測定結(jié)果影響不大。而當(dāng)ARTP處理時間達(dá)到105s時，ARTP對細(xì)胞的致死率升高，大量的死細(xì)胞對細(xì)胞的光密度測定影響較大，而死細(xì)胞通常具有較低的發(fā)光強(qiáng)度，因此造成相對發(fā)光強(qiáng)度的下降，影響SOS誘導(dǎo)系數(shù)的測定結(jié)果。而基于unu-test的流式細(xì)胞儀測定方法，通過PI染色可以排除死細(xì)胞的影響。圖3.1ARTP處理后3h和6h用ADP1_RecA_Lux方法檢測ARTP處理不同時間的SOS誘導(dǎo)系數(shù)（n=3）采用ADP1_RecA_Lux方法檢測得到的最大SOS誘導(dǎo)系數(shù)值為1.49±0.25，低于基于unu-test的流式細(xì)胞儀測定結(jié)果。這主要是由于ADP1_RecA_Lux方法中選用recA作為SOS響應(yīng)檢測基因，recA編碼的蛋白作為DNA同源重組的重要相關(guān)蛋白，其在SOS未誘導(dǎo)的菌體中具有較高的含量ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>Karu</Author><Year>1982</Year><RecNum>3186</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[133]</style></DisplayText><record><rec-number>3186</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="50wxdpzd9vd5r7e9t5b595djrfpttrxw9avp">3186</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>Karu,A.E.</author><author>Belk,E.D.</author></authors></contributors><titles><title>InductionofE.colirecAproteinviarecBCandalternatepathways:quantitationbyenzyme-linkedimmunosorbentassay(ELISA)</title><secondary-title>MolecularGeneticsandGenomics</secondary-title><alt-title>Molecular&generalgenetics:MGG</alt-title></titles><alt-periodical><full-title>MolGenGenet</full-title><abbr-1>Molecular&generalgenetics:MGG</abbr-1></alt-periodical><pages>275-82</pages><volume>185</volume><number>2</number><edition>1982/01/01</edition><keywords><keyword>BacterialProteins/*biosynthesis</keyword><keyword>Deoxyr