中藥分析概論

第十一章

中藥分析概論浙江大學(xué)現(xiàn)代中藥研究所吳永江

第一節(jié)概述任務(wù)：運(yùn)用現(xiàn)代分析方法和手段對中藥制劑過程的各環(huán)節(jié)進(jìn)行質(zhì)量分析與評價(jià)，從而保證中藥質(zhì)量。

對象：有效成分、毒性成分、其他與療效質(zhì)量相關(guān)的成分分析方法和手段：包括物理、化學(xué)、物理化學(xué)、生物學(xué)和微生物學(xué)方法。制劑環(huán)節(jié)：原料、半成品、中成藥。一、中藥分析任務(wù)與對象二、中藥分析的特點(diǎn)☆化學(xué)成分復(fù)雜☆原料藥材質(zhì)量差異顯著☆在中醫(yī)藥理論指導(dǎo)下對中藥質(zhì)量進(jìn)行分析評價(jià)☆制劑工藝與輔料特殊☆雜質(zhì)來源途徑多☆有效成分非單一性☆化學(xué)成分復(fù)雜每味中藥均含有眾多化學(xué)成分，而由幾味甚至幾十味中藥組成的復(fù)方制劑所含化學(xué)成分可達(dá)幾百-幾千種。多種化學(xué)成分之間相互作用，可能發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，使含量增加或減少，甚至產(chǎn)生新的化學(xué)成分?！钤纤幉馁|(zhì)量差異顯著品種、產(chǎn)地、藥用部位、采收季節(jié)、加工方法不同。炮制方法不同。（與中醫(yī)理論、流派有關(guān)）☆在中醫(yī)藥理論指導(dǎo)下對中藥質(zhì)量進(jìn)行分析評價(jià)原則上應(yīng)選擇君藥成分進(jìn)行質(zhì)量評價(jià)，如君藥化學(xué)成分不明或測定有困難時(shí)也可選擇臣藥成分，一般不選擇佐使藥。另，有毒成分應(yīng)作為質(zhì)控指標(biāo)，嚴(yán)格控制在限量以下。☆制劑工藝與輔料特殊制劑工藝不統(tǒng)一，不同廠家采用不同工藝工藝過程參數(shù)控制不嚴(yán)格劑型眾多輔料特殊☆雜質(zhì)來源途徑多藥材重金屬、農(nóng)藥殘留水中雜質(zhì)包裝、保管過程質(zhì)變☆有效成分非單一性中藥是多種化學(xué)成分，通過多種途徑，作用于多個(gè)靶點(diǎn)，整合調(diào)節(jié)而起作用。測定單一成分難以反映中藥制劑質(zhì)量。在闡明中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的前提下，盡可能測定多種成分，以期較全面反映中藥質(zhì)量。四、中藥分析發(fā)展趨勢標(biāo)準(zhǔn)化:質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)逐步規(guī)范化分析方法：儀器化，自動(dòng)化，快速，微量。新的分析方法不斷被應(yīng)用于中藥分析。分析對象：多指標(biāo)化新技術(shù)：如指紋圖譜分析技術(shù)、組學(xué)技術(shù)、一測多評法等中藥質(zhì)量控制模式的發(fā)展經(jīng)驗(yàn)質(zhì)控模式指標(biāo)成分質(zhì)控模式指紋圖譜＋多指標(biāo)成分質(zhì)控模式第二節(jié)中藥分析分離純化方法

★取樣★供試品制備★鑒別★檢查★含量測定★報(bào)告基本程序一、取樣取樣原則：科學(xué)性、真實(shí)性、代表性（一）固體樣品取樣

對于每次檢測的取樣數(shù)量，在《中國藥典》附錄中有規(guī)定，如片劑不少于20片，顆粒劑不少于10袋等。取樣時(shí)應(yīng)至少夠3次檢測用量。抽取法四分法（二）液體樣品取樣混勻后吸取二、供試品制備原則：最大限度保留被測成分，除去干擾成分，濃縮待測成分濃度至高于檢測限（limitofdetection,LOD）或定量限(limitofquantitation,LOQ)。選擇制備方法依據(jù)：待測成分性質(zhì)、劑型特點(diǎn)、干擾成分性質(zhì)。制備方法提取凈化溶劑提取水蒸氣蒸餾超臨界流體萃取升華液液萃取回流提取超聲提取連續(xù)回流冷浸半仿生提取微波提取提取方法凈化方法液液萃取沉淀法鹽析法色譜法液相微萃取固相萃取固相微萃取注：液相微萃取技術(shù)參見：多孔中空纖維液相微萃取技術(shù)的研究進(jìn)展，分析化學(xué)，2007，35（7)：1071第三節(jié)中藥制劑的鑒別定義：定性鑒別是利用藥材的形態(tài)、組織學(xué)特征及所含化學(xué)成分結(jié)構(gòu)特征、化學(xué)反應(yīng)、色譜光譜特性及某些物理化學(xué)常數(shù)等鑒別中成藥中單味藥材的真?zhèn)渭按嬖谂c否的方法。鑒別方法性狀鑒別顯微鑒別理化鑒別藥味應(yīng)選擇君藥、貴重藥、劇毒藥，基礎(chǔ)研究較深入的藥物。性狀鑒別一、性狀鑒別內(nèi)容?顏色?形態(tài)：主要指物理狀態(tài)，如粘稠液體、粉末?形狀：如球形、橢圓形?氣：嗅覺指標(biāo)，如香、臭、腥?味：味覺指標(biāo)，如酸、甜、苦、辣、咸?其他：光澤、手感等物理常數(shù)測定主要用于從中藥材提取的有效部位、有效組分制成的制劑的鑒別，如薄荷油、薄荷腦等。主要物理常數(shù)：折光率、旋光度、熔點(diǎn)、相對密度。

顯微鑒別定義：利用顯微鏡觀察制劑中原藥材的組織碎片、細(xì)胞、內(nèi)含物等特征，判斷制劑真?zhèn)?。適用對象：以藥材細(xì)粉直接制成的制劑、含有藥材細(xì)粉的制劑。特征選擇：主要的可重復(fù)的特征，一般每味藥材選一個(gè)特征。理化鑒別定義：利用物理、化學(xué)、物理化學(xué)方法對制劑中的化學(xué)成分進(jìn)行定性鑒別，判斷制劑真?zhèn)?。適用對象：所有制劑化學(xué)反應(yīng)法升華法光譜法色譜法理化鑒別方法一、化學(xué)鑒別法利用制劑中化學(xué)成分的特征化學(xué)反應(yīng)鑒別真?zhèn)蔚姆椒?。如用碘化鉍鉀反應(yīng)鑒別生物堿，鹽酸－鎂粉法鑒別黃酮類成分。化學(xué)成分的提?。焊鶕?jù)被鑒定成分的性質(zhì)，選擇合適的方法將其從制劑中提取出來，除去干擾成分，提高反應(yīng)的可靠性。提高化學(xué)鑒別專屬性、可靠性的方法：（1)慎用專屬性不好的化學(xué)反應(yīng)，如三氯化鐵顯色反應(yīng)。（2)供試品制備時(shí)盡量除去干擾組分。（3）采用陰性對照和陽性對照。二、升華法觀察升華物的形狀、顏色（日光或紫外燈下），或與特定化學(xué)試劑的反應(yīng)結(jié)果，判斷其真?zhèn)?。如冰片、大黃蒽醌的鑒別。三、光譜法

利用中藥制劑中某些化學(xué)成分或組分的光譜特性進(jìn)行鑒別。光譜法：可見-紫外分光光度法，熒光（光譜）法，紅外光譜法。四、色譜法

利用色譜法，特別是薄層色譜法（TLC）鑒別中藥制劑是最常用的方法。色譜法具有分離能力，因此專屬性較好。色譜法鑒別時(shí)需用化學(xué)對照品或者對照藥材。（一）紙色譜法不常用（二）氣相色譜法適用對象：含揮發(fā)油或揮發(fā)性成分的制劑，如含冰片、薄荷腦、麝香的制劑。方法：用對照品對照，利用保留值定性。如果采用氣－質(zhì)聯(lián)用可不用對照品。（三）高效液相色譜法不常用于單一成分的鑒別，主要用于含量測定。對于已有含量測定的藥材，可不再鑒別。該法現(xiàn)常用于中藥制劑指紋圖譜鑒別中。（四）薄層色譜法

TLC是目前最常用的中藥制劑鑒別方法。中藥鑒別中常用吸附色譜，吸附劑：硅膠、氧化鋁、硅藻土、纖維素、聚酰胺。硅膠：硅膠H，硅膠G，硅膠HF254,硅膠GF254氧化鋁：中性氧化鋁，酸性氧化鋁，堿性氧化鋁TLC鑒別對照物：（1）對照品：制劑中某藥材的有效成分或特征成分。（2)對照藥材鑒別方法：把供試液、陽性對照試液（對照品或/和對照藥材制成）一起點(diǎn)在同一薄層板上，展開后比較。在建立TLC鑒別方法時(shí)還應(yīng)加上陰性對照試液對照，以判斷其專屬性。參麥注射液中麥冬的TLC鑒別對照品：麥冬皂苷A第四節(jié)中藥制劑的檢查一、雜質(zhì)與限量雜質(zhì)的定義：影響藥品質(zhì)量、危害人體健康的物質(zhì)。敷料等不作為雜質(zhì)。雜質(zhì)來源：原料生產(chǎn)過程貯藏、運(yùn)輸、使用過程雜質(zhì)分類：一般雜質(zhì)特殊雜質(zhì)雜質(zhì)的限量計(jì)算：

雜質(zhì)限量指藥物中所含雜質(zhì)的最大允許量。雜質(zhì)檢查一般為限量檢查（limittest），用百分之幾或百萬分之幾（ppm）表示。C－標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，

V－標(biāo)準(zhǔn)溶液體積，

S－樣品重量例1、某藥物砷鹽檢查

1.0g樣品，依法制成供試品溶液后進(jìn)行砷鹽檢查。另取標(biāo)準(zhǔn)砷溶液2.00ml(濃度1μg/ml)做對照試驗(yàn)，則其限量為：即百萬分之二,2ppm。例2、某藥物重金屬限量要求為百萬分之二十，標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液的體積為2.00ml（濃度10μg/ml），則供試品取樣量應(yīng)為：

二、雜質(zhì)檢查內(nèi)容（一）制劑通則檢查根據(jù)中國藥典附錄制劑通則中規(guī)定的項(xiàng)目進(jìn)行檢查，不同劑型檢查項(xiàng)目不同，如片劑要求檢查重量差異、崩解時(shí)限等，丸劑要求檢查水分、重量差異、溶散時(shí)限、裝量差異等。（二）一般雜質(zhì)檢查水分、灰分、酸不溶灰分、重金屬、砷鹽、殘留農(nóng)藥、殘留溶劑。

（三）特殊雜質(zhì)檢查制劑中特有的有毒、有害物質(zhì)，或者易混淆的物質(zhì)。如：西洋參中的人參大黃中的土大黃苷烏豆中的酯型生物堿（四）微生物限度檢查（五）農(nóng)藥殘留量的檢查（ChP2010附錄ⅨQ）

農(nóng)藥類型：有機(jī)氯（測9種）有機(jī)磷（測12種）氨基甲酸酯類菊酯類（測3種）苯氧酸類供試品溶液制備1、提取2、凈化液液萃?。^柱用石油醚、丙酮、乙腈、乙酸乙酯等溶劑提取檢測方法：GC（檢測有機(jī)氯用ECD，檢測有機(jī)磷用NPD）GC－MS（選擇離子檢測模式）HPLCHPLC－MS16種農(nóng)藥的分組情況、保留時(shí)間、定性定量特征離子及其豐度比

農(nóng)藥起始時(shí)間保留時(shí)間定量離子定性離子1定性離子2α-六六六1017.48219(100)217(80.6)109(60.4)五氯硝基苯1019.13295(58.9)237(100)林丹1019.49217(77.6)219(100)109(84.0)甲基對硫磷2023.67263(64.4)109(100)艾氏劑2526.09265(64.3)263(100)2,4’-DDE3030.43318(32.2)246(100)4,4’-DDD3435.06235(100)237(64.3)胺菊酯4040.85164(100)165(13.1)氯氰菊酯4540.28,40.67,40.80,40.97165(63)163(100)152(15.1)氰戊菊酯4552.07,52.77167(100)152(54.7)例、中藥中16種農(nóng)藥殘留的GC/MS分析樣品預(yù)處理方法5g樣品丙酮20mL超聲15min濃縮至約1mL弗羅里硅土柱，正己烷-乙醚（94:6）洗脫洗脫液濃縮至干殘?jiān)和槿芙獠⒍ㄈ葜?mL供試品溶液

混合農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液（A）和加標(biāo)樣品（B）典型色譜圖（六）、黃曲霉毒素的檢查黃曲霉毒素（aflatoxin）由曲霉菌（主要是黃曲霉和寄生曲霉）產(chǎn)生，具有極強(qiáng)毒性和致癌性，四種主要曲霉是aflatoxinB1、B2、G1、G2，其中B1的毒性最強(qiáng)。AflatoxinM1和M2分別是B1和B2的羥基化產(chǎn)物。黃曲霉毒素在水中溶解度低，易溶于氯仿、丙酮、甲醇、乙腈等有機(jī)溶劑，但不溶于乙醚、石油醚、己烷。曲霉菌屬

黃曲霉毒素 肝毒素，致癌物質(zhì)赭曲霉素腎毒素，致癌物質(zhì) 柄曲霉素 致癌物質(zhì)鐮刀菌屬

T-2毒素皮膚壞疽，出血嘔吐類毒素引起嘔吐反應(yīng)雪腐鐮刀菌烯醇皮膚壞疽，出血玉米赤霉烯酮雌激素綜合征伏馬毒素 致癌物質(zhì) 青霉菌屬

橘青霉素腎毒素展青霉素有毒物質(zhì),致癌物質(zhì)

Rubratoxins 肝毒素

Penitrems 顫栗

Penicillicacid致癌物質(zhì) 真菌產(chǎn)生毒素及其毒性中藥生產(chǎn)過程及環(huán)境中藥材生產(chǎn)過程中真菌污染途徑Aspergillus

ochraceus田間生產(chǎn)采收加工運(yùn)輸貯藏市場產(chǎn)品病原菌附生菌污染菌Fusariumsolani

真菌廣泛存在于空氣、水源、土壤中美國、歐盟和中國主要食品真菌毒素的限量毒素名稱美國(ppb)歐盟(ppb)所有食品嬰幼兒食品牛奶農(nóng)產(chǎn)品嬰幼兒食品牛奶乳制品乳制品總黃曲霉毒素2042黃曲霉毒素B120.1黃曲霉毒素M10.50.0250.05赭曲霉毒素

A50.5DON10001000200ZON10050毒素名稱中國(ppb)玉米、花生及其制品大米、植物油、（除玉米油、花生油）其他糧食、豆類、發(fā)酵食品嬰幼兒食品鮮乳乳制品總黃曲霉毒素黃曲霉毒素B1201055黃曲霉毒素M10.5赭曲霉毒素

A5DON1000ZON60中藥中真菌毒素的相關(guān)規(guī)定我國《藥用植物及制劑進(jìn)出口綠色行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定黃曲霉素B1的限量為5.0μg.kg-1，對B1、B2、G1、G2總和未規(guī)定限量?！吨袊幍洹?010版增加了黃曲霉毒素的檢測方法（HPLC-FL），規(guī)定陳皮、胖大海、桃仁、酸棗仁、僵蠶中的黃曲霉毒素B1限量為5μg.kg-1，B1、B2、G1、G2總量不超過10μg.kg-1。六種黃曲霉毒素化學(xué)結(jié)構(gòu)黃曲霉毒素的檢測一般分為提取、凈化、測定三步。提取：提取溶劑的選擇根據(jù)黃曲霉毒素的性質(zhì)、分析對象、分析方法、安全性等決定，通常用甲醇/水或乙腈/水混合溶劑提??；ELISA法的樣品提取不能用二氯甲烷等不溶于水的溶劑。凈化：（1）液-液萃?。?）固相萃?。ü柙逋令愇絼?）免疫親和柱層析一、微柱法二、TLC法三、熒光分析法四、免疫分析法五、HPLC（HPLC-MS）法真菌毒素快速篩選法

目前，國際上使用較為普遍的真菌毒素快速篩選法有熒光光度計(jì)法和酶聯(lián)免疫法。前者常常結(jié)合免疫親和柱凈化使用，是美國AOAC的標(biāo)準(zhǔn)檢測方法，以黃曲霉毒素檢測為例,它可以檢測黃曲霉毒素總量達(dá)到2ppb以下，符合歐盟的指令要求。缺點(diǎn)：假陽性率高。微柱篩選法原理

GB/T5009.23-2006第二法

試樣提取液通過由氧化鋁與硅鎂吸附劑組成的微柱層析管，雜質(zhì)被氧化鋁吸附，黃曲霉毒素被硅鎂吸附劑吸附，在265nm紫外線下呈藍(lán)紫色熒光，其熒光強(qiáng)度在一定范圍內(nèi)與黃曲霉毒素的含量成正比。本方法只能檢測黃曲霉毒素的總量。薄層色譜法

GB/T5009.23-2006第二法原理:

樣品經(jīng)過提取、濃縮、薄層分離后，在365nm紫外光下，黃曲霉毒素B1、B2產(chǎn)生藍(lán)紫色熒光，黃曲霉毒素G1、G2產(chǎn)生黃綠色熒光。真菌毒素定量法

真菌毒素定量法一般有高效液相色譜法(HPLC)、氣相色譜法（GC）以及經(jīng)典的薄層色譜掃描法（TLC）等。其中，高效液相色譜結(jié)合熒光或紫外檢測器法（HPLC）因其靈敏度高、檢測限低、自動(dòng)化程度高等優(yōu)點(diǎn)在國際上得到了最為廣泛的使用。HPLC法

GB/T5009.23-2006第三法

試樣經(jīng)乙腈-水提取，提取液過濾后，經(jīng)裝有反相離子交換吸附劑的多功能凈化柱，去除脂肪、蛋白質(zhì)、色素及碳水化合物等干擾物。凈化液中的黃曲霉毒素與三氟乙酸衍生，用帶有熒光檢測器的液相色譜系統(tǒng)分析，外標(biāo)法定量。LC-MS/MS法

液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法由于分離能力和抗干擾能力強(qiáng)，已成分黃曲霉毒素含量測定的重要方法之一。可不經(jīng)衍生化直接測定各個(gè)黃曲霉毒素及內(nèi)標(biāo)的質(zhì)譜參數(shù)毒素名稱母離子(m/z)定量離子

(m/z)碰撞能量(eV)定性離子(m/z)碰撞能量(eV)AFB1313.2(+H)285.218241.228AFB2315.2(+H)287.320259.320AFG1329.3(+H)243.220311.220AFG2331.2(+H)313.220245.222AFM1329.2(+H)273.215259.215AFM2331.2(+H)273.215259.215[13C17]-AFB1330.3(+H)285.322301.220

標(biāo)準(zhǔn)溶液葛根92種常用中藥經(jīng)檢測后，陽性樣品中真菌毒素污染狀況基質(zhì)種類藥材名稱AFB1AFB2AFG1AFG2AFM1AFM2總量根莖種子花全草丹參-1—0.9—4.8——5.7葛根-13.36.72.5—0.6—13.1地骨皮—1.31.31.5——4.1川射干-17.2——2.90.7—10.8川貝母1.6——1.8——3.4土貝母1.6—0.6———2.2湖北貝母—

0.80.9———1.7羊蹄——————石斛—7.11.2———8.3酸棗仁-11.6—0.81.5——3.9酸棗仁-31.0—————1.0苦杏仁0.9—————0.9桃仁-10.80.9————1.7桃仁-20.7——0.9——1.6桃仁-4—0.8————0.8金銀花-11.3—0.7———2.0金錢草2.41.8—1.6——5.8黃曲霉毒素在不同中藥中的污染規(guī)律

1、黃曲霉毒素在根莖類及種子類的藥材中的污染水平明顯高于花及全草類中藥材，說明該霉菌在含淀粉和油脂多的基質(zhì)中容易生長；2、具有抗菌抗病毒等作用的中藥材對于黃曲霉毒素的生長具有抑制作用，因此，在浙貝母、金銀花等藥材中不容易發(fā)現(xiàn)黃曲霉毒素；3、一些含油脂及淀粉量比較大，且不具有抗菌抗毒作用的中藥材，如桃仁、杏仁等，容易被黃曲霉毒素污染，需著重監(jiān)測。AnalyticaChimicaActa,2010,664(2)：165-171

含量測定是中藥質(zhì)量控制的重要內(nèi)容。測定藥味的選擇：君藥，臣藥，貴重藥，毒性藥成分選擇：有效成分，活性成分，指標(biāo)成分方法選擇：首選色譜法，其次光譜法、化學(xué)方法方法學(xué)考察：回收率、線性與范圍、檢測限、定量限、精密度、重現(xiàn)性、穩(wěn)定性、專屬性等。第五節(jié)含量測定中藥分析中常用分析方法化學(xué)分析法重量分析法（萃取法、揮發(fā)法、沉淀法）容量分析法（滴定分析法：酸堿、絡(luò)合、沉淀、氧化還原）儀器分析法光譜法（UV/Vis，F(xiàn)L，AAS，ICP-MS）色譜法（GC，HPLC，UPLC，TLCS，GC-MS，HPLC-MS）其他（如電化學(xué)分析）中藥分析時(shí)各種分析方法的選擇選擇原則：根據(jù)被分析成分的性質(zhì)、分析目的要求、分析方法的適用性等幾方面考慮選擇何種分析方法?！舸箢惤M分總量的測定，如總黃酮、總生物堿、總有機(jī)酸、總皂苷等，選擇分光光度法、滴定分析法、重量法等；◆揮發(fā)油等揮發(fā)性成分的分析，選擇GC或GC-MS;◆不易揮發(fā)或熱穩(wěn)定性差的成分分析，選擇HPLC或HPLC-MS，無HPLC時(shí)考慮TLCS；◆金屬、半金屬測定，選擇AAS、ICP-MS生物堿含量測定（一）總生物堿1、酸堿滴定法一般采用返滴定法，樣品需經(jīng)凈化處理如過中性氧化鋁柱。（例：苦黃注射液，止喘靈注射液，川烏）2、重量法以乙醚等溶劑提取生物堿，或與雷氏鹽等沉淀劑生成沉淀。3、比色法（1）直接比色法

樣品經(jīng)提取、凈化（常用氧化鋁柱層析）后，測定吸光度。如：黃連、左金丸中中生物堿。（2）離子對萃取比色法酸性染料比色法：BH++In-BH+.In-（pH3-6）生成的離子對用氯仿萃取，測定吸光度。酸性染料常用溴麝香草酚藍(lán)（BTB）。苦味酸鹽比色法：在弱酸性、中性溶液中，生物堿與苦味酸定量生成苦味酸鹽沉淀，（a）氯仿提取，測定氯仿溶液的吸光度（360nm）。（b）氯仿提取，pH11緩沖液解離，測定水溶液吸光度。（c）濾取沉淀，加堿解離，氯仿提取游離生物堿，測定水溶液吸光度。雷氏鹽比色法:在酸性介質(zhì)中生成單鹽或雙鹽、三鹽沉淀，過濾，溶于丙酮，520～526nm測定吸光度。異羥肟酸鐵比色法：堿性條件下，酯型生物堿水解，與羥胺生成異羥肟酸，再與Fe3+生成紫紅色絡(luò)合物。如：川烏、草烏中的烏頭堿。（酯類成分有干擾）注意事項(xiàng)：離子對比色法的重現(xiàn)性稍低，實(shí)驗(yàn)中應(yīng)注意pH、測定時(shí)間等。（二）單體生物堿1、HPLC法常用RP-HPLC,固定相用C18，采用離子抑制或離子對色譜法分離。離子對色譜法流動(dòng)相常用含SDS的磷酸鹽－甲醇（或乙腈），使生物堿生成離子對。離子抑制色譜法常用三乙胺、氨水抑制生物堿解離。也可用離子交換色譜或硅膠吸附色譜分離。2、GC法分子量小，揮發(fā)性大的生物堿可用GC法分析，如苦參生物堿、麻黃生物堿、莨菪堿等。色譜條件：ZorbaxExtend-C18分析柱（4.6mm×250mm，5μm）；以H2O:NH3:CH3OH(52:0.05:48，v/v/v)為流動(dòng)相；流速0.8mL/min；檢測波長220nm；柱溫40℃

例、HPLC法測定苦黃注射液中生物堿1.槐果堿2.苦參堿例、GC-MS測定苦黃注射液中的生物堿HP-5ms（30m×0.25mm×0.25μm），程序升溫，載氣流速0.6ml/min，分流比30:1，質(zhì)譜檢測器。1.槐果堿2.苦參堿3.槐定堿皂苷含量測定1、總皂苷重量法（不常用）

比色法：顯色劑常用香草醛－硫酸、香草醛－高氯酸、醋酐－高氯酸。

注意事項(xiàng)：

1）顯色反應(yīng)專屬性差，干擾大

2）反應(yīng)條件需嚴(yán)格控制，特別是溫度、反應(yīng)時(shí)間，否則結(jié)果難以重復(fù)。

3）單體皂苷與總皂苷的換算系數(shù)2、皂苷元總皂苷以酸水解后，再以比色法、HPLC、TLC測定。3、單體皂苷

TLCS法

HPLC法：用反相HPLC，以甲醇－酸水或乙腈－酸水系統(tǒng)分離，以UV、ELSD檢測。如人參皂苷Re、Rg1、黃芪甲苷等的測定。例、參麥注射液中人參皂苷含量測定C18柱，乙腈－磷酸鹽，UV202nmUV與ELSD的比較第六節(jié)中藥指紋圖譜

質(zhì)量控制技術(shù)

指紋圖譜分析技術(shù)（fingerprintanalysis,FA)最初源自人手指紋鑒別，經(jīng)過不斷開拓和技術(shù)進(jìn)步，現(xiàn)已發(fā)展成為一種根據(jù)領(lǐng)域知識進(jìn)行特征發(fā)現(xiàn)與分類的模式信息處理方法，在許多行業(yè)得到日益廣泛的應(yīng)用。

指紋圖譜分析技術(shù)指紋圖譜分析技術(shù)指紋圖譜是反映被分析對象化學(xué)組成特征的分析圖譜。這種圖譜包括色譜、光譜或其它圖譜。

指紋圖譜具有整體、宏觀、模糊分析等特點(diǎn)，特別適應(yīng)于組成復(fù)雜的中藥。它雖不能代替含量測定，但比測定任何單一成分所提供的信息均要豐富和有用得多，有可能較好地表征出中藥的整體性和復(fù)雜性。指紋圖譜分析技術(shù)中藥指紋圖譜技術(shù)從藥物的全成分分析出發(fā)，要求盡可能覆蓋全貌，符合中醫(yī)藥強(qiáng)調(diào)的整體用藥的原則，它不要求圖譜中每一組分的化學(xué)結(jié)構(gòu)都清楚，也不要求每一組分都精確的定量，這適應(yīng)了目前中藥中絕大部分化學(xué)成分無法明晰的現(xiàn)狀。

基本屬性是“整體性”和“模糊性”

構(gòu)建中藥指紋圖譜的分析方法

光譜法

色譜法聯(lián)用技術(shù)分子生物學(xué)紫外光譜（UV）紅外光譜（IR）核磁共振（NMR）X射線衍射薄層色譜（TLC）高效液相色譜（HPLC）氣相色譜（GC）高效毛細(xì)管電泳（HPCE）LC-MSGC-MSDNA指紋圖譜

123456789101112131415161718

19202122232441235678不同批次田基黃藥材的TLC指紋圖譜田基黃注射液HPLC指紋圖譜野生天麻1H-NMR指紋圖譜X-射線衍射指紋圖譜V,VI,VII不合格中藥質(zhì)量指紋圖譜分析是一門計(jì)算機(jī)輔助藥物分析檢測技術(shù)，它包括：★指紋圖譜獲取★指紋圖譜鑒別分析中藥質(zhì)量指紋圖譜分析技術(shù)與儀器分析方法藥物信息學(xué)化學(xué)指紋圖譜分析技術(shù)

化學(xué)指紋圖譜分析技術(shù)指紋譜圖的鑒別分析Internet

相似性計(jì)算法

模式分類法

統(tǒng)計(jì)質(zhì)量控制法

模糊計(jì)算法儀器分析信息處理