GB 29695-2013 食品安全國家標準 水產(chǎn)品中阿維菌素和伊維菌素多殘留的測定 高效液相色譜法

G中華人民共和國國家標準GB

—2013食品安全國家標準水產(chǎn)品中阿維菌素和伊維菌素多殘留的測定高效液相色譜法

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2013-09-16

發(fā)布 2014-01-01

實施中華人民共和國農(nóng)業(yè)部

發(fā)布中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會目 次目 次

.........................................................................

I前 言

........................................................................

II水產(chǎn)品中阿維菌素和伊維菌素多殘留的測定

高效液相色譜法

.........................

１1 范圍.......................................................................

１2 規(guī)范性引用文件.............................................................

１3

.......................................................................

１4 試劑與材料

.................................................................

１5

.......................................................................

２6 試料的制備與保存

...........................................................

２6.1

試料的制備.................................................................

２6.2

試料的保存.................................................................

３7 測定步驟...................................................................

３7.1

標準曲線的制備

.............................................................

３7.2

.......................................................................

３7.2

.......................................................................

３7.3 衍生化

...................................................................

３7.4 測定

.....................................................................

３7.5 空白實驗

.................................................................

４8 結果計算...................................................................

４9 方法的靈敏度、準確度和精密度

...............................................

５9.1

靈敏度.....................................................................

５9.2

準確度.....................................................................

５9.3 精密度

...................................................................

５附錄

A

........................................................................

６前 言本標準的附錄

A

為資料性附錄。本標準系國內(nèi)首次發(fā)布的國家標準。II水產(chǎn)品中阿維菌素和伊維菌素多殘留的測定高效液相色譜法1 范圍本標準規(guī)定了水產(chǎn)品中阿維菌素和伊維菌素殘留量的制樣和高效液相色譜測定方法。本標準適用于魚的可食性組織中阿維菌素和伊維菌素殘留量的檢測。2 規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標準，然而，鼓勵根據(jù)本標準達成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標準。GB/T

1.1-2000

標準化工作導則

第1部分：標準的結構和編寫規(guī)則GB/T

6682 分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法3 原理N-甲基咪唑和三氟乙酸酐衍生化，高效液相色譜-熒光法測定，外標法定量。4 試劑與材料以下所用的試劑，除特別注明外均為分析純試劑；水為符合GB/T

6682規(guī)定的一級水。4.1 阿維菌素標準品：B含量≥94伊維菌素標準品：B含量≥92％。4.2 乙腈：色譜純。4.3 甲醇：色譜純。4.4 正己烷4.5 三氟乙酸酐4.6 N-甲基咪唑4.7 冰乙酸：優(yōu)級純。4.8 無水硫酸鈉：4

h，干燥器中冷卻備用。4.9 堿性氧化鋁固相萃取柱：1

g/3

mL，或相當者。4.10

衍生化試劑A：取N-甲基咪唑1

、乙腈1

mL，混勻，現(xiàn)配現(xiàn)用。4.11

衍生化試劑B：取三氟乙酸酐1

、乙腈2

mL，混勻，現(xiàn)配現(xiàn)用。4.12 0.4%乙酸溶液：取冰乙酸0.4

，用水溶解并稀釋至

mL。4.13

100

μg/mL阿維菌素和伊維菌素混合標準貯備液：精密稱取阿維菌素和伊維菌素標準品各10

，于100

mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，配制成濃度為

μg/mL的阿維菌素和伊維菌素混合標準貯備液?！嬉韵卤４妫行?個月。4.14

10

μg/mL阿維菌素和伊維菌素混合標準工作液：精密量取

μg/mL阿維菌素和伊維菌素混合標準貯備液10

，于100

mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，配制成濃度為10

μ阿維菌素和伊維菌素混合標準工作液。2～8℃保存，有效期3個月。5 儀器5.1 高效液相色譜儀：配熒光檢測器。5.2分析天平：

01

g。5.3 天平：0.01

g。5.4 旋渦混合器5.5 超聲波清洗器5.6 離心機5.7氮吹儀5.8 旋轉蒸發(fā)儀5.9 固相萃取裝置5.10

具塞玻璃離心管：5

mL。5.11

無水硫酸鈉柱：玻璃層析柱（

mm，2號砂芯）中裝填5

g無水硫酸鈉。5.12

茄形瓶：

mL。5.13

具塞聚丙烯離心管：50

mL。5.14

濾膜：0.45

μm。6 試料的制備與保存6.1

試料的制備取適量新鮮或解凍的空白或供試組織，絞碎，并使均質(zhì)?！【|(zhì)后的供試樣品，作為供試試料。——取均質(zhì)后的空白樣品，作為空白試料?！【|(zhì)后的空白樣品，添加適宜濃度的標準工作液，作為空白添加試料。6.2

試料的保存

℃以下保存。7 測定步驟7.1

標準曲線的制備精密量取

1

μg/mL

0.1、0.2、0.5、1

和

2

μg/mL

的系列標準溶液，各取

0.1

于

5

離心管中，于

45～55

℃水浴氮氣吹干，按衍生化步驟處理。供高效液相色譜測定。以測得峰面積為縱坐標，對應的標準溶液濃度為橫坐標，繪制標準曲線。求回歸方程和相關系數(shù)。7.2

5±0.05）g

50

mL

15

1

30

，4

000

離心

5

mL

mL次，合并兩次提取液。在提取液中加正己烷

，充分渦旋混合

1

，4

000

離心

5

，棄上層正己烷層。提取液中再加正己烷

10

，重復提取一次，棄正己烷層，備用。7.2

10

mL

10

液于茄形瓶中，于

～℃旋轉蒸發(fā)至干。用乙腈

3

mL

分

2

次溶解殘余物，并轉至

5

具塞玻璃離心管中，45～55℃水浴氮氣吹干。7.3

衍生化于上述

5

離心管中加衍生化試劑

A100

μL

30

s

B

μL

30

s

15

μL

30

s供高效液相色譜測定。7.4

測定7.4.1

色譜條件色譜柱：C（

mm×4.6

mm，粒徑

5

μm），或相當者；時間甲醇%乙腈%0.4%%039556133955615455502539556流速：1.5

；進樣量：20

μL；柱溫：35

℃；檢測器：激發(fā)波長

nm，發(fā)射波長475

nm。洗脫梯度見表1：表1

洗脫梯度表表1

洗脫梯度表取試樣溶液和相應的標準溶液，作單點或多點校準，按外標法，以峰面積計算。標準溶液及試樣溶液中阿維菌素和伊維菌素響應值應在儀器檢測的線性范圍之內(nèi)。在上述色譜條件下，標準溶液和空白添加試樣溶液的高效液相色譜圖見附錄A。7.5

空白實驗除不加試料外，采用完全相同的步驟進行平行操作。8 結果計算試料中阿維菌素或伊維菌素的殘留量（μg/kgX

CVm式中：X

――

供試試料中相應的阿維菌素或伊維菌素殘留量，μg/kg；C

――

試樣溶液中相應的阿維菌素或伊維菌素的濃度，；V

——試樣溶液總體積，mL；m—