化妝品中抗感染類藥物的檢測(cè)方法

————附件2化妝品中抗感染類藥物的檢測(cè)方法DeterminationofAnti-infectiveDruginCosmetics1范圍本方法規(guī)定了采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定化妝品中36種抗感染類藥物含量的方法。本方法適用于膏霜類、乳液類、水劑類等化妝品中36種抗感染類藥物的檢測(cè)。本方法所包含的36種抗感染類藥物名稱、CAS號(hào)及化學(xué)結(jié)構(gòu)式見(jiàn)附表1。2方法提要本方法以乙腈為溶劑提取樣品中抗感染類藥物成分，用高效液相色譜儀分離，質(zhì)譜檢測(cè)器檢測(cè)，對(duì)樣品中的36種抗感染類藥物進(jìn)行初篩。篩查結(jié)果呈陽(yáng)性的樣品，以相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)品為對(duì)照，根據(jù)保留時(shí)間和特征離子對(duì)的相對(duì)豐度比定性，定量離子對(duì)峰面積定量，以標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算含量。本方法中36種抗感染類藥物的檢出限、定量下限及取樣量為0.2g時(shí)最低檢出濃度和定量濃度見(jiàn)附表2。3試劑和材料除另有規(guī)定外，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。3.1甲醇，色譜純；3.2乙腈，色譜純；3.3甲酸，色譜純；3.4氯化鈉。3.5飽和氯化鈉溶液：稱取40g氯化鈉，置于250mL磨口錐形瓶中，加入100mL水，超聲15分鐘，即得。3.6含0.5%甲酸的乙腈溶液：量取200mL乙腈于500mL容量瓶中，加入2.5mL甲酸，用乙腈稀釋并定容至刻度，搖勻。3.75mmol乙酸銨緩沖溶液（pH4.0）：稱取0.3854g乙酸銨于1000mL容量瓶中，加水980mL溶解后，用甲酸調(diào)節(jié)pH至4.0，加水定容至刻度，混勻，過(guò)0.22μm微孔濾膜。3.8氯霉素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液[（氯霉素）=1.0mg/mL]：精確稱取10mg（精確至0.01mg）的氯霉素對(duì)照品，置10mL棕色容量瓶中，加入甲醇（3.1）充分溶解后，用甲醇（3.1）定容至刻度，搖勻。該儲(chǔ)備液質(zhì)量濃度為1.0mg/mL。置于-18℃冰箱中貯存。3.9其他組分標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液[（待測(cè)組分）=0.1mg/mL]：分別精確稱取附表1中除氯霉素外其他待測(cè)組分對(duì)照品各10mg（精確至0.01mg）置于100mL棕色容量瓶中，加甲醇（3.1）使溶解（對(duì)于溶解性差的物質(zhì)可加入少量甲酸或水促進(jìn)溶解），并用甲醇（3.1）定容至刻度，搖勻，即得質(zhì)量濃度為0.1mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。置于-18℃冰箱中貯存。3.10混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：分別精確移取各待測(cè)組分標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（3.8和3.9）1.0mL于100mL容量瓶中，用甲醇（3.1）稀釋并定容至刻度，作為混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。置于-18℃冰箱中貯存。4儀器4.1高效液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀。4.2分析天平：感量0.0001g和0.00001g。。4.3超聲波清洗儀。4.4冷凍離心機(jī)。4.5渦旋混合儀。5測(cè)定步驟5.1篩查用混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備分別取混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（3.10）適量，用初始流動(dòng)相進(jìn)行稀釋，配制成氯霉素濃度為200ng/mL，其他組分濃度為20ng/mL的篩查用混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。5.2基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的制備取與待測(cè)化妝品配方相同或相近的基質(zhì)空白樣品5份于15mL離心管中（0.2g/份），分別加入標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備溶液適量，按照樣品處理操作步驟處理，配制成氯霉素濃度為200、400、600、800、1000ng/mL，其他組分濃度為20、40、60、80、100ng/mL的系列溶液（濃度范圍可根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行調(diào)整）。5.3樣品處理準(zhǔn)確稱取化妝品樣品（實(shí)際樣品或空白樣品）0.2g（精確到0.0001g），置于15mL離心管中，準(zhǔn)確加入3mL飽和氯化鈉溶液（3.5），渦旋30s，分散均勻，加入含0.5%甲酸的乙腈溶液（3.6）5mL，渦旋30s，超聲提取30min，渦旋混合搖勻，以8000r/min轉(zhuǎn)速0℃冷凍離心5min，吸取上清液于10mL容量瓶中，加水定容至10mL，混勻，經(jīng)0.22μm濾膜過(guò)濾后，濾液作為供試品溶液備用。5.4儀器參考條件5.4.1色譜條件色譜柱：C18柱（100mm×2.1mm，1.7m）或等效色譜柱；流動(dòng)相：溶液A：5mmol乙酸胺緩沖溶液pH4.0（3.7），溶液B：乙腈（含0.1%甲酸），梯度洗脫程序見(jiàn)表1；表1流動(dòng)相的梯度洗脫程序時(shí)間（min）溶液A（%）溶液B（%）0982141991719917.198220982流速：0.3mL/min；柱溫：40℃；進(jìn)樣量：5L。5.4.2質(zhì)譜參考條件離子源：電噴霧離子源（ESI源）；監(jiān)測(cè)模式：正離子、負(fù)離子多離子反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式，監(jiān)測(cè)離子對(duì)及相關(guān)參數(shù)設(shè)定見(jiàn)附表3（可根據(jù)儀器情況調(diào)整）；0–2min：不進(jìn)入質(zhì)譜儀分析，2–20min：進(jìn)入質(zhì)譜儀分析。5.5定性判定取供試品溶液與相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品溶液，在相同試驗(yàn)條件下測(cè)定，樣品中如呈現(xiàn)定量離子對(duì)和定性離子對(duì)的色譜峰，被測(cè)組分的特征離子峰保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)溶液對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間一致，且選擇的定性離子的相對(duì)豐度比與相當(dāng)濃度對(duì)照品溶液的定性離子的相對(duì)豐度比的最大偏差應(yīng)不超過(guò)表2的規(guī)定，則可以判定樣品中存在對(duì)應(yīng)的抗感染類藥物成分。表2定性確證時(shí)相對(duì)離子豐度的最大允許偏差相對(duì)離子豐度（k）k>50%50%≥k>20%20%≥k>10%k≤10%允許的最大偏差±20%±25%±30%±50%5.6定量測(cè)定取基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液依次測(cè)定，以待測(cè)組分的系列濃度為橫坐標(biāo)，待測(cè)組分的峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，建立基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線，其線性相關(guān)系數(shù)應(yīng)不小于0.99。取供試品溶液測(cè)定，將對(duì)應(yīng)的定量離子色譜峰面積代入線性回歸方程，按“計(jì)算”項(xiàng)下公式，計(jì)算樣品中各組分的含量。6計(jì)算QUOTEρ×V×Dω式中：ω——化妝品中的抗感染類藥物禁用物質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)，μg/g；ρ——供試品溶液中抗感染類藥物禁用物質(zhì)的質(zhì)量濃度，g/mL；V——樣品定容體積，mL；m——樣品取樣量，g；D——稀釋倍數(shù)（不稀釋則為1）。相同條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)試結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的15%。

附表136種抗感染藥物的CAS編號(hào)、分子式、分子量和結(jié)構(gòu)式序號(hào)中文名稱英文名稱CAS分子式結(jié)構(gòu)式1甲硝唑Metronidazole443-48-1C6H9N3O3171.162氧氟沙星Ofloxacin82419-36-1C18H20FN3O4361.373環(huán)丙沙星Ciprofloxacin85721-33-1C17H18FN3O3331.344克林霉素Clindamycin18323-44-9C18H33ClN2O5S425.05克林霉素磷酸酯Clindamycinphosphate24729-96-2C18H34ClN2O8PS504.976林可霉素Lincomycin154-21-2C18H34N2O6S406.57多西環(huán)素Doxycycline564-25-0C22H24N2O8444.48米諾環(huán)素Minocycline10118-90-8C23H27N3O7457.59阿奇霉素Azithromycin83905-01-5C38H72N2O12748.9810克拉霉素Clarithromycin81103-11-9C38H69NO13747.9511羅紅霉素Roxithromycin80214-83-1C41H76N2O15837.0512氯霉素Chloramphenicol56-75-7C11H12C2N2O5323.113克霉唑Clotrimazole23593-75-1C22H17ClN2344.8414酮康唑Ketoconazole65277-42-1C26H28Cl2N4O4531.4315氟康唑Fluconazole86386-73-4C13H12F2N6O306.2716聯(lián)苯芐唑Bifonazole60628-96-8C22H18N2310.3917磺胺吡啶Sulfapyridine144-83-2C11H11N3O2S249.2918磺胺甲嘧啶Sulfamerazine127-79-7C11H12N4O2S264.319磺胺甲二唑Sulfamethizole144-82-1C9H10N4O2S2270.3320磺胺甲氧嗪Sulfamethoxypyridazine80-35-3C11H12N4O3S280.321磺胺氯噠嗪Sulfachloropyridazine80-32-0C10H9ClN4O2S284.7222磺胺甲噁唑Sulfamethoxazole723-46-6C10H11N3O3S253.2823依諾沙星Enoxacin74011-58-8C15H17FN4O3320.3224沙拉沙星Sarafloxacin98105-99-8C20H17F2N3O3385.3625培氟沙星Pefloxacin70458-92-3C17H20FN3O3333.3626氟羅沙星Fleroxacin79660-72-3C17H18F3N3O3369.3427雙氟沙星Difloxacin98106-17-3C21H19F2N3O3399.3928莫西沙星Moxifloxacin151096-09-2C21H24FN3O4401.4329諾氟沙星Norfloxacin70458-96-7C16H18FN3O3319.3330恩諾沙星Enrofloxacin93106-60-6C19H22FN3O3359.431呋喃它酮Furaltadone139-91-3C13H16N4O6324.2932四環(huán)素Tetracycline60-54-8C22H24N2O8444.433土霉素Oxytetracyclin79-57-2C22H24N2O9460.434金霉素Aureomycin57-62-5C22H23ClN2O8478.935螺內(nèi)酯Spironolactone52-01-7C24H32O4S416.5736灰黃霉素Griseofulvin126-07-8C17H17ClO6352.77注：附表1參考部分藥物臨床使用情況排序附表236種抗感染藥物的檢出限與定量下限序號(hào)化合物檢出限（ng）定量下限（ng）最低檢出濃度（μg/g）定量濃度（μg/g）1甲硝唑0.0250.0750.250.752磺胺吡啶0.0250.0750.250.753磺胺甲嘧啶0.0250.0750.250.754磺胺甲二唑0.0250.0750.250.755磺胺甲氧嗪0.0250.0750.250.756磺胺氯噠嗪0.0250.0750.250.757磺胺甲噁唑0.0250.0750.250.758依諾沙星0.0250.0750.250.759沙拉沙星0.0250.0750.250.7510培氟沙星0.0250.0750.250.7511氧氟沙星0.0250.0750.250.7512氟羅沙星0.0250.0750.250.7513雙氟沙星0.0250.0750.250.7514莫西沙星0.0250.0750.250.7515諾氟沙星0.0250.0750.250.7516環(huán)丙沙星0.0250.0750.250.7517恩諾沙星0.0250.0750.250.7518呋喃它酮0.0250.0750.250.7519林可霉素0.0250.0750.250.7520克林霉素0.0250.0750.250.7521克林霉素磷酸酯0.0250.0750.250.7522四環(huán)素0.0250.0750.250.7523多西環(huán)素0.0250.0750.250.7524米諾環(huán)素0.0250.0750.250.7525土霉素0.0250.0750.250.7526金霉素0.0250.0750.250.7527阿奇霉素0.0250.0750.250.7528克拉霉素0.0250.0750.250.7529羅紅霉素0.0250.0750.250.7530氯霉素0.10.31331螺內(nèi)酯0.0250.0750.250.7532灰黃霉素0.0250.0750.250.7533克霉唑0.0250.0750.250.7534酮康唑0.0250.0750.250.7535氟康唑0.0250.0750.250.7536聯(lián)苯芐唑0.0250.0750.250.75注：附表2參考各組分色譜圖出峰順序排序附表336種抗感染藥物的監(jiān)測(cè)離子對(duì)及相關(guān)參數(shù)設(shè)定表序號(hào)物質(zhì)名稱電離方式母離子（m/z）Frag.（V）子離子（m/z）CE（V）1甲硝唑ESI+172.02282.0*18172.022128.0222磺胺吡啶ESI+250.010156.0*16250.01092.0263磺胺甲嘧啶ESI+265.022156.0*15265.02292.0184磺胺甲二唑ESI+271.130156.0*15271.13092.0255磺胺甲氧嗪ESI+281.135156.0*25281.13592.0256磺胺氯噠嗪ESI+285.020155.9*15285.02092.0287磺胺甲噁唑ESI+254.122156.0*18254.122107.9188依諾沙星ESI+321.140232.0*30321.140303.1359沙拉沙星ESI+386.26299.1*28386.26342.11810培氟沙星ESI+334.213233.1*20334.213290.11611氧氟沙星ESI+362.230261.1*28362.230318.21812氟羅沙星ESI+370.229269.1*28370.230326.02013雙氟沙星ESI+400.238299.1*22400.238356.02014莫西沙星ESI+402.26261.1*24402.26364.52815諾氟沙星ESI+320.140233.1*25320.140276.12016環(huán)丙沙星ESI+332.242231.0*22332.242288.11817恩諾沙星ESI+360.229245.1*20360.229342.22018呋喃它酮ESI+325.028100.0*15325.028281.01219林可霉素ESI+407.240359.4*20407.240126.12520克林霉素ESI+425.220377.2*18425.220126.22521克林霉素磷酸酯ESI+505.230126.1*30505.230457.23022四環(huán)素ESI+445.130410.2*18445.130427.31423多西環(huán)素ESI+445.26428.2*20445.26154.02824米諾環(huán)素ESI+458.28441.3*18458.28283.13025土霉素ESI+461.24426.1*18461.24444.21826金霉素ESI+479.125444.1*20479.125462.21627阿奇霉素ESI+749.655591.5*30749.655116.13028克拉霉素ESI+748.635158.1*30748.635590.62029羅紅霉素ESI+837.622158.1*31837.622679.63630氯霉