(高清版)GBT 40175.3-2021 紡織品 生物化學分析方法 第3部分：有機磷類農(nóng)藥（酶聯(lián)免疫法）

紡織品生物化學分析方法第3部分：有機磷類農(nóng)藥(酶聯(lián)免疫法)國家市場監(jiān)督管理總局國家標準化管理委員會IGB/T40175.3—2021本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定本文件是GB/T40175《紡織品生物化學分析方法》的第3部分。GB/T40175已經(jīng)發(fā)布了以下部分：-——第1部分：鎘和鉛(膠體金法);——第2部分：擬除蟲菊酯類農(nóng)藥(酶聯(lián)免疫法);請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔識別專利的責任。本文件由中國紡織工業(yè)聯(lián)合會提出。本文件由全國紡織品標準化技術委員會(SAC/TC209)歸口。學、南京海關動植食產(chǎn)品檢測中心、上海天祥質(zhì)量技術服務有限公司、江蘇省檢驗檢疫科學技術研究院、晉江中紡標檢測有限公司、紡織工業(yè)標準化研究所。1GB/T40175.3—2021紡織品生物化學分析方法第3部分：有機磷類農(nóng)藥(酶聯(lián)免疫法)警示：使用本文件的人員應有正規(guī)實驗室工作的實踐經(jīng)驗。本文件并未指出所有可能的安全問題。使用者有責任采取適當?shù)陌踩徒】荡胧⒈ＷC符合國家有關法規(guī)規(guī)定的條件。1范圍本文件規(guī)定了紡織品中甲基對硫磷、甲基對氧磷、殺螟硫磷、倍硫磷四種有機磷類農(nóng)藥殘留量的酶聯(lián)免疫檢測方法。本文件適用于各種紡織品。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法3術語和定義本文件沒有需要界定的術語和定義。4原理試樣中的有機磷類農(nóng)藥與試劑盒中已包被在酶標板上的有機磷類農(nóng)藥抗原競爭性結(jié)合有機磷類農(nóng)藥抗體，再加入酶標二抗，在酶標板上形成抗原-一抗-酶標二抗復合物。復合物與顯色劑發(fā)生反應，用酶標儀測定吸光度值。吸光度值與試樣中的農(nóng)藥殘留量呈負相關。5試劑與材料所用試劑應均為分析純，水為符合GB/T6682規(guī)定的三級水。5.1有機磷類農(nóng)藥測定酶聯(lián)免疫試劑盒：附錄A給出了一種有機磷類農(nóng)藥酶聯(lián)免疫試劑盒示例，試劑盒組成如下：a)酶標板。b)有機磷類抗體工作溶液。c)酶標二抗。d)甲基對硫磷標準工作溶液：可使用試劑盒中提供的標準工作溶液，也可按如下方法配制準確稱取50.0mg甲基對硫磷標準品(CAS號298-00-0,純度≥99%)置于100mL容量瓶中，加入少量甲醇(5.6)溶解后，用甲醇定容至刻度，濃度為500.0mg/L。然后根據(jù)需要的系列標2GB/T40175.3—2021準溶液工作濃度進行稀釋。g)終止液：每升包含54.3mL濃硫酸(98%)的水溶液。按照體積比1:9加水稀釋(1份濃縮洗滌液+9份水)。5.3顯色液：使用前將底物A液5.1e)和底物B液5.1f)按體積比1:1混合。酸氫二鈉和0.24g磷酸二氫鉀，用0.01mol/L鹽酸調(diào)節(jié)溶液的pH值至7.4,加水定容至1000mL。5.8甲醇-磷酸鹽緩沖溶液：按照體積比1:4將甲醇與緩沖溶液(5.7)混勻。6設備儀器和器皿7試驗步驟稱取5g代表性的試樣，剪碎至5mm×5mm以下，混勻。從混合樣中稱取1.0g試樣，置于50mL帶旋蓋的離心管中。準確加入20mL體積比為1:1的正己烷(5.4)和乙酸乙酯(5.5)混合溶劑，置于45℃的超聲波浴(6.4)中萃取30min,取1mL萃取液，7.2.1測試前需要將所有試劑放置至室溫(20℃~27.2.2取系列甲基對硫磷標準工作溶液5.1d)和待測樣品溶液(7.1)各50μL分別加入至相應的酶標板中37℃下反應30min。7.2.3棄去孔中液體，并將酶標板5.1a)剩余殘液在吸水紙上拍干。每孔注滿洗滌液(5.2),輕輕振蕩，7.2.4在每孔中加入50μL酶標二抗5.1c),在烘箱(6.6)中于37℃下反應30min。37.2.6在每孔中加入50μL顯色液(5.3),在烘箱(6.6)中于37℃下避光顯色15min。7.2.7在每孔中加入50μL終止液5.1g)以終止反應，于10min內(nèi)用波長450nm的酶標儀(6.1)測定吸光度值。7.3空白試驗在不加試樣的情況下，按上述步驟進行試驗。8結(jié)果計算與表達8.1相對吸光度值的計算分別計算標準溶液和樣品溶液的平均吸光度值，按公式(1)計算標準溶液或樣品溶液的相對吸光度值。 (1)式中：A——相對吸光度值；B——系列標準工作溶液或樣品溶液的平均吸光度值；B?——0μg/L標準工作溶液的平均吸光度值。8.2繪制標準工作曲線以相對吸光度值為縱坐標(%),標準工作溶液濃度(μg/L)的對數(shù)值為橫坐標，繪制標準工作曲線。每次試驗均應繪制標準工作曲線。8.3有機磷類農(nóng)藥濃度的計算和結(jié)果表達從8.2中繪制的標準工作曲線上，讀取樣品溶液相對吸光度值所對應的有機磷類農(nóng)藥濃度。按公式(2)計算試樣中的有機磷類農(nóng)藥的含量。 (2)式中：X——試樣中有機磷類農(nóng)藥的含量，單位為微克每千克(μg/kg);c——從標準工作曲線上得到的試樣中有機磷類農(nóng)藥濃度，單位為微克每升(μg/L);V——復溶后樣品溶液體積，單位為毫升(mL);m——試樣質(zhì)量，單位為克(g)。計算結(jié)果應扣除空白，精確至一位小數(shù)。如被測試樣中有機磷類農(nóng)藥含量小于2.0μg/kg,則結(jié)果表示為未檢出；如含量超則結(jié)果為實測值，宜使用GB/T18412.3中規(guī)定的方法或其他儀器分析方法再進行檢測。9檢出限10試驗報告試驗報告至少應給出下述內(nèi)容：4GB/T40175.3—2021a)本文件的編號；b)樣品來源及描述；d)試驗日期；e)任何偏離本文件的細節(jié)。5GB/T40175.3—2021(資料性)有機磷類農(nóng)藥酶聯(lián)免疫試劑盒示例A.1試劑盒組成試劑盒組成如下：——有機磷類抗試劑(一抗)——底物液B液40mL——稀釋液A.2試劑盒的保存本試劑盒在-2℃~8℃的溫度下儲存，有效期為1年。如果超過3個月不使用試劑盒，將一抗和二抗放