分光光度法講義

分光光度法云南先鋒化工質(zhì)量監(jiān)測中心1、分光光度法引言概念：分光光度法是通過測定被測物質(zhì)在特定波特長或肯定波〔是利用物質(zhì)所特有的吸取光譜來鑒別物質(zhì)或測定其含量的一項技術(shù)?！酬U述概念：在分光光度計中，將不同波長的光連續(xù)地照耀到肯定波長〔λ〕為橫坐標，吸取強度〔A〕為縱坐標，就可繪出該物質(zhì)的吸取光譜曲線。利用該曲線進展物質(zhì)定性、定量的分析方法，稱法，稱為紫外分光光度法；用可見光光源測定有色物質(zhì)的方法，稱Beer-Lambert定律為根底。上述的紫外光區(qū)與可見光區(qū)是常用的。但分光光度法的應(yīng)用光區(qū)包括紫外光區(qū)，可見光區(qū)，紅外光區(qū)。特點：靈敏度高、準確度高、操作簡便、快速。對于簡單的組分系統(tǒng)，無須分別即可檢測出其中所含的微量組分的特點。波長范圍(1)200～400nm的紫外光區(qū)，(2)400～760nm的可見光區(qū)，(3)2.5～25μm(按波數(shù)計為4000cm<-1>～400cm<-1>)的紅外光區(qū)。2、分光光度法的原理Lambert定律：一束單色光在通過透亮溶液時，由于溶液吸取一局部光能，使光的強度減弱，假設(shè)溶液濃度不變，則溶液的厚度越大，光線強度的減弱也越顯著，即光吸取的量與溶液的厚度成比例關(guān)

表示溶液的厚度，0

T=I/0K0IITI0lglg oII klBeer定律：一束單色光在通過透亮溶液時，假設(shè)溶液的厚度不變，則液的濃度成比例關(guān)系。IlgIlg okcIlgIIo kllgIlgIIo kllgIIo kclgIIolgIIo kclA=kcl3、如何求被測組分的含量(1).利用標準管計算測定物的含量A在一樣條件下測定濃度〔C〕標準液的吸光度〔〕，同AS SC 時也測定末知濃度〔〕的吸光度〔C U U依據(jù)定律得依據(jù)定律得：AuKuCuLuAsKsCsLs由于：KuKs LuLs所以As與Au之比值也等于兩濃度之比值A(chǔ)sCsAu CuCuAsCsAu(2)利用標準曲線計算測定物含量先配制一系列濃度由小到大的標準溶液，分別測出它們的吸光在方格坐標紙上作圖。過原點的直線，即標準曲線，亦稱工作曲線。以后對未知濃度物質(zhì)測定物的濃度。二乘法求得。Y=a+bx工作曲線應(yīng)定期校準。當條件有變動時，例如儀器經(jīng)過修理、更換光源、更換標準溶液、試劑重配，都應(yīng)重制作工作曲線。AA對末知濃度物質(zhì)測定時得測定物的濃度。0.80.6●●0.4●0.2●C標準曲線(濃度-吸光度曲線〕4、應(yīng)用實例：中控分析：廢水中甲醇含量的測定；生化廢水中COD〔催化快速法、NHN〔納氏試cr 3劑比色法、CHO〔4；液氧、液空中油含量的測定；65原材料分析：煤焦灰成分分析中二氧化硅的測定〔硅鉬黃光度法；二氧化鈦的測定；水質(zhì)環(huán)境監(jiān)測分析：水質(zhì)分析：SiO、PO3-2 4定；

、Fe、余ClNH+、NO-2 4 2

NO-、濁度、Cu、水質(zhì)色度的測3環(huán)境監(jiān)測站：1#、3COD〔催化快速法、NHN〔納氏試劑比色法、CHOHcr 3 654-氨基安替吡啉光度法〔亞甲基藍分光光度法〔紅外分光光度法砷含量的測定〔二乙氨基二硫代甲酸銀光度法；氟化物的測定〔氟試劑分光光度法；4-氨基安替吡啉光度法測定原理揮發(fā)酚類化合物于pH=10.00±0.204-在510nm波特長有最大吸取。用分光光度法測其含量。本法適用于含酚濃度為0.002mg/L～6mg/L的含酚廢水。試劑、材料1+3溶液；1+9溶液；NO)溶于水中稀釋至100mL置冰箱中保存,可使用一星期；

11133鐵氰化鉀溶液80g/L：稱取8g鐵氰化鉀(K3

[Fe(CN)6至100mL置冰箱中保存可使用一星期；硫酸銅溶液：100g/L；〔pH≈10〕：稱取20g氯化銨〔NH100mL氨水中，加塞，置冰箱中保存；苯酚標準溶液：1mL溶液含0.01mg苯酚；甲基橙指示劑：1g/L。儀器分光光度計；3.2電爐：800W；圓底蒸餾燒瓶：500mL，帶支管；蛇形冷凝管；容量瓶：棕色，250mL；分析步驟標準曲線的繪制

Cl〕溶于4于50mL比色管中分別參加0.50、1.00、3.00、5.00、7.00、10.00、12.50mL酚標準溶液(2.7)，定容。加0.50mL氨-氯化銨緩沖溶液(2.6)，混勻，此時pH值為10.0±0.2，加1.00mL4-氨基安替比林溶液(2.3)，混勻。加1.00mL鐵氰化鉀溶液(2.4)，充分混勻后放置10min,于510nm波特長，用2cm比色皿，以試劑空白為參比，測其吸光度，并繪制標準曲線。水樣測定水樣預(yù)處理取200.0mL2～32滴甲基橙指示劑(2.8)，用磷酸溶液(2.1)或用硫酸溶液(2.2)調(diào)整至pH=4左右〔溶液呈橙紅色〕，參加10mL硫酸銅溶液(2.5)。連接冷凝器，加熱蒸250mL180mL定容。水樣的比色測定取適量餾出液于50mL4.1，測其吸光度。結(jié)果計算

H表示，65按以下公式計算：CH

(Ea)k1000OH，mg/L= V10006 5式中：?E吸光度讀數(shù)；?

250a截距〔回歸直線方程〕；?k斜率的倒數(shù)〔回歸直線方程〕；?V移取餾出液的體積的數(shù)值，單位為毫升〔mL〕。?留意事項蒸餾前須檢查蒸餾裝置是否漏氣，無誤后開頭進展蒸餾；往蒸餾瓶中加數(shù)粒玻璃珠，以防溶液暴沸；硫酸銅溶液后產(chǎn)生較多量的黑色硫化銅沉淀，則應(yīng)搖勻后放置片刻，待沉淀后，再滴加硫酸銅溶液，至不再產(chǎn)生沉淀為止；蒸餾過程中，如覺察甲基橙的紅色褪去，應(yīng)在蒸餾完畢后，再加1增加硫酸或磷酸參加量，進展蒸餾；4-氨基安替比林固體試劑易潮解氧化，應(yīng)保存在枯燥器中；氨-氯化銨緩沖溶液使用時應(yīng)避開氨的揮發(fā)所引起pH值的改量配制。3、分光光度計的根本構(gòu)造4、721分光光度計操作步驟開機，預(yù)熱30分鐘轉(zhuǎn)動波長旋鈕調(diào)所需波長按 鍵切換到透射比檔將遮光體放入光路中，合上蓋，按 鍵校零開蓋，將參比液按空白液、標準液、待測液挨次放入比色皿架上，合上蓋，按 鍵切換到拉動比色架拉桿，將空白液放入光路中，合上蓋，按鍵校零A檔即可讀取其吸光度A讀數(shù)后，將黑體放入光路中，開蓋取出比色皿將參比液倒回原試管中，清洗比色皿并晾干關(guān)機，蓋上防塵蓋，登記儀器使用登記本。分光光度計使用的留意事項〔在使用儀器前，必需認真閱讀其使用說明書〕比色皿應(yīng)相匹配性〔對光的吸取和反射應(yīng)全都〕，不得隨便挪置于某一波特長，石英比色杯；220nm、700nm裝蒸餾水，玻璃比色杯：700nm處裝蒸餾水，將某一個池的透射比值調(diào)至100%，測量其±0.5%果的影響。比色皿應(yīng)持其側(cè)壁的毛玻璃面。用濾紙沾去水份，再用擦鏡紙擦干凈。測畢，比色液一般應(yīng)倒回原試管中，直至計算無誤前方可倒掉。假設(shè)大幅度轉(zhuǎn)變測試波長，需稍等片刻，等燈熱平衡后，重校正?°0?±和?°100%?±點。然后再測量。比色皿使用完畢后，請馬上用蒸餾水沖洗干凈，并用干凈松軟操作人員不應(yīng)輕易動燈泡及反光鏡燈，以免影響光效率。分光光度計由于其光電接收裝置為光電倍增管，它本身的特點而導(dǎo)致工作不穩(wěn)。放大器靈敏度換擋后，必需重調(diào)零。分光光度計檢定(測試)的主要工程對分析結(jié)果的影響波長準確度分光光度法原理要求照耀在樣品池上的單色光必需對應(yīng)于樣品吸些。但是，當吸取峰寬度較小，而且吸取峰兩側(cè)邊緣比較陡直，此時波長準確度的影響就必需引起留意。透射比〔吸光度〕準確度很明顯,透射比或吸光度的誤差越大,測試結(jié)果的可信性越差,從而影響到測試數(shù)據(jù)的準確性.雜散光雜散光是由于光學元件制造誤差以及光學和機械零件外表的漫反射形成的。雜散光是分析樣品的非吸取光，隨著樣品濃度的增加，雜散。因此，雜散光的大小也是儀器性能的一項重要指標。1〕儀器不能調(diào)零?？赡芫売桑篴〕光門不能完全關(guān)閉。解決方法：修復(fù)光門部件，使其完全關(guān)閉。b〕透過率?°100%?±旋到底了。解決方法：重調(diào)整?°100%?±旋鈕。c〕儀器嚴峻受潮。解決方法：可翻開光電管暗盒，用電吹風吹上一會兒使其枯燥，并更換枯燥劑。d〕電路故障。解決方法：送修理部門，檢修電路。2〕儀器不能調(diào)?°100%?±?？赡芫売桑篴〕光能量不夠。解決方法：增加靈敏度倍率檔位，或更換光源燈〔盡管燈還亮〕。比色皿架未落位。解決方法：調(diào)整比色皿架使其落位。光電轉(zhuǎn)換局部老化。解決方法：更換部件。d〕電路故障。解決方法：調(diào)修電路。測量過程中,?°100%?±點常常變動。可能緣由： a〕比色皿在比色皿架中放置的位置不全都，或其外表有液滴。解決方法：用擦鏡紙擦干凈比色皿外表，然后將其安放在比色槽的左邊，上面用定位夾定位。b〕電路故障〔電壓、光電接收、放大電路〕。解決方法：送修。數(shù)顯不穩(wěn)?？赡芫売桑篴〕預(yù)熱時間不夠。解決方法：延長預(yù)熱時間至30分鐘左右〔局部儀器由于老化等緣由，長時間處于工作狀態(tài)時，也會工作不穩(wěn)〕法：烘烤電路，并更換或烘烤枯燥劑。。解決方法：改善工作環(huán)境。d〕光電管、電路等其它緣由。解決方法：送修。提高分光光度計透射比檢定及使用精度的幾種方法在分光光度計的使用或檢定中,透射比(吸光度)的準確度是衡量儀器工作性能的一項重要指標,它的準確程度直接關(guān)系到所測數(shù)據(jù)的重要。下面結(jié)合近年來對分光光度計的檢定或修理實踐,把如何提高透射比的測試及使用精度的幾點方法列表表達如下：1〕比色皿架及比色皿在使用中的正確到位問題。有些使用者對這個問題不夠重視，因操作不當造成偶然誤差，嚴峻影響分析結(jié)果。首先，應(yīng)保證比色皿不傾斜放置。稍許傾斜，就會使參比樣品與待池，導(dǎo)致測試比準確度不符合要求。其次，應(yīng)保證每次測試時，比色皿架推拉到位。假設(shè)不到位，將影響到測試值的重復(fù)性或準確度。最終,還應(yīng)保證比色皿的清潔度,延長其使用壽命.2〕枯燥劑的使用問題?？菰飫┦?dǎo)致a〕數(shù)顯不穩(wěn)、無法