2021高中生物競賽-細胞生物學基礎02細胞生物學研究方法課件

2021高中生物競賽基礎細胞生物學第二章細胞生物學研究方法

細胞生物學的研究方法歸納起來大體上可劃分為四大類：形態(tài)觀察、生化分析、生理檢測、實驗性操作技術。光學顯微鏡（lightmicroscope）電子顯微鏡（electronmicroscope）掃描隧道顯微鏡（scanningtunnelingmicroscope）第一節(jié)細胞形態(tài)結構的觀察方法尼康E-600顯微鏡

一、光學顯微鏡（一）普通光學顯微鏡普通顯微鏡由聚光器、物鏡和目鏡三部分組成。小鼠肝細胞中糖原人肝癌細胞中的微絲蛋白LightPathwayofMicroscope普通顯微鏡最大放大倍數(shù)1000－1500倍因為它的分辨率有限，再放大也是空放大

分辨率（resolution）：能將物體相近兩點分辨清楚的距離極限

D代表分辨力：D=0.61

/N.A.

代表光波波長；N.A.為鏡口率，也稱數(shù)值孔徑（Numericalaperture)。

N.A.=n

Sin

/2

n：物鏡與標本間介質的折射率；（1或1.515）

：鏡口角（聚光焦點對物鏡鏡口的張角，<180o）物鏡鏡口

標本結論：通過公式可知光學顯微鏡最大分辨率0.2um減小分辨率需減小

介質空氣水香柏油α溴萘折射率11.331.5151.66顯微鏡的幾個光學特點：介質折射率越接近鏡頭玻璃的（1.7）越好。sinα/2的最大值小于1；普通光線的波長為400~700nm，光鏡分辨力約為0.2μm，人眼的分辨力為0.2mm，因此顯微鏡的最大有效倍數(shù)為1000X。（二）紫外線顯微鏡（ultravioletmicroscope）根據(jù)光學原理，光源光波越短，顯微鏡的分辨本領越大。紫外線顯微鏡以紫外線為光源，分辨率可提高一倍?？煽吹皆谄胀ü鈱W顯微鏡下看不到的膠體顆粒。可用來測定細胞中的核酸含量。透鏡：石英、螢石（CaF2)、碳酸鋰等制作。價格昂貴，使用受限。（三）熒光顯微鏡（fluorescentmicroscope）20世紀40年代在紫外線顯微鏡基礎上發(fā)明。原理：細胞中有些物質，如葉綠素等，受紫外線照射后可發(fā)熒光；另有一些物質本身雖不能發(fā)熒光，但如果用熒光染料或熒光抗體染色后，經(jīng)紫外線照射也可發(fā)熒光。熒光顯微鏡對這類物質進行定性或定量研究。結構：在普通光學顯微鏡上添加一些附件：A.光源：通常采用超高壓汞燈或氙燈，由它發(fā)出各種波長的光。B.濾片：根據(jù)性能分為兩組。一組是激發(fā)濾片，作用是僅使一定波長的激發(fā)光透過照射到標本上，而將其它光都吸收掉。二是阻斷濾片，安裝在物鏡后，作用是吸收和阻擋激發(fā)光進入目鏡，以免干擾熒光和刺傷眼睛；選擇并讓特異的熒光透過，表現(xiàn)出專一的熒光色彩。敏感性高，主要用于細胞結構和化學成分等的研究。熒光顯微鏡熒光顯微照片(微管綠,微絲紅,核藍)（四）暗視野顯微鏡（darkfieldmicroscope）原理：顯微鏡加裝特殊裝置，使直射光不能進入物鏡，只允許被標本反射、衍射的光線進入物鏡特點：視野的背景是暗的，樣品是的邊緣是亮的。特殊裝置：在聚光器中加裝中央遮光板或者使用暗視野光闌暗視野照明方式

能見到小至5nm的質點，分辨率比普通顯微鏡高40倍。有些細胞器如核、線粒體亦可見。能夠看到正在運動的微小物體（如精子），也能看到不運動的及某些不能被染色的脂粒，因而常用于微生物與膠體化學研究。（五）相差顯微鏡（phasecontrastmicroscope）相差顯微鏡由P．Zernike于1932年發(fā)明，并因此獲1953年諾貝爾物理獎。這種顯微鏡最大的特點是可以觀察未經(jīng)染色的標本和活細胞。原理：將透過標本的可見光的光程差（也就是相位差）變成光強差（即振幅差），從而提高了各種結構間的對比度，使各種結構變得清晰可見。

相差顯微鏡體外培養(yǎng)的Hela細胞構造：聚光器或光源上安裝環(huán)狀光闌（annulardiaphragm)；在物鏡中加了環(huán)形相板(annularphaseplate)。光闌的作用：使透過聚光器的光線形成空心光錐，聚焦到標本上。光線透過標本發(fā)生衍射，偏離了未透過標本的光線線路，波長延遲1/4

。相板作用：相板上有一環(huán)形區(qū)制成凹槽或凸起，器深度可使通過此區(qū)的光線提前或延遲1/4

。主要用于觀察活細胞或活組織，是體外細胞和組織培養(yǎng)工作的重要工具。（六）微分干涉差顯微鏡（differentialinterferencecontrast(DIC)microscope

）1952年，Normaski在相差顯微鏡原理的基礎上發(fā)明。能顯示結構的三維立體投影影像。

DIC顯微鏡下的硅藻（偽彩色）

分離的有絲分裂紡錘體左、微分干涉顯微鏡；中、相差顯微鏡；右、偏振光顯微鏡。（七）激光共聚焦掃描顯微鏡（laserconfocalscanningmicroscope）

用激光作掃描光源，逐點、逐行、逐面快速掃描成像。由于激光束的波長較短，光束很細，所以共焦激光掃描顯微鏡有較高的分辨力，大約是普通光學顯微鏡的3倍。激光共聚焦掃描顯微鏡既可以用于觀察細胞形態(tài)，也可以用于細胞內生化成分的定量分析、光密度統(tǒng)計以及細胞形態(tài)的定量。

laserconfocalscanningmicroscope,LCSMLCSMImageofaXenopusMelanophoremicrotubulecytoskeleton(green)andthenucleus(blue)光學顯微鏡小結普通光學顯微鏡：0.2um紫外線顯微鏡：0.1um熒光顯微鏡暗視野顯微鏡相差顯微鏡微分干涉差顯微鏡激光共聚焦掃描顯微鏡二、電子顯微鏡（electronmicroscope）簡稱電鏡電子顯微鏡以電子束代替了可見光，大大提高了顯微鏡的分辨率，可以觀察細胞的亞顯微結構。電子束的波長與電壓成反比，波長極短。例如，電壓為6萬伏，則

=0.0488埃，比最短的可見光4000埃約小10萬倍。德國西門子公司制成了第一臺電子顯微鏡，當時分辨率只有3nm。1964年后達到0.3nm，現(xiàn)在最佳性能的電鏡分辨本領可達0.1-0.2nm。電鏡的基本構造主要如下：

A：電子束照明系統(tǒng)；

B：電磁透鏡成像系統(tǒng)；

C：真空系統(tǒng)；

D：記錄系統(tǒng)；

E：電源系統(tǒng)。

電鏡與光鏡的主要區(qū)別：

光鏡電鏡

光源

可見光電子束

介質空氣（香柏油）真空

聚光鏡光學透鏡電磁透鏡

分辨力

0.3

0.1um0.1nm

放大倍數(shù)

1000倍百萬倍

（一）透射電子顯微鏡（TEM：transmissionelectronmicroscope）觀察標本內部細微結構放大近百萬倍超薄切片（500埃）通常以鋨酸和戊二醛固定樣品，以環(huán)氧樹脂包埋，以熱膨脹或螺旋推進的方式推進樣品切片，切片采用重金屬鹽染色，以增大反差。

JEM-1011透射電子顯微鏡

正在凋亡的乳腺細胞核被膜破裂，染色質凝集細胞毒T細胞結合到靶細胞（腫瘤細胞）上細胞毒T細胞殺死了靶細胞冰凍蝕刻（freeze-etching)，或冰凍斷裂(freeze-fracture)配合透射電鏡觀察而設計的一種標本制作技術。研究生物膜內部結構的有用技術。主要步驟：

A.冰凍標本（-1000C干冰或-1960C液氮）

B.冷刀斷開標本（冰凍斷裂）

C.升溫，冰升華，斷裂面結構暴露（蝕刻）

D.表面噴一層蒸汽碳和鉑，

E.將組織溶掉，碳和鉑的膜稱復膜（replica）F.電鏡下觀察復膜，復膜構造=標本構造冰凍蝕刻電鏡照片

（二）掃描電子顯微鏡（SEM：scanningelectronmicroscope）觀察標本表面形態(tài)結構標本特殊處理：固定脫水后，噴涂上一層重金屬微粒，重金屬在電子束的轟擊下發(fā)出次級電子信號。

JEOL掃描電子顯微鏡

人類血細胞SEM照片

彈性纖維網(wǎng)

左：狗主動脈的低倍掃描電鏡圖片；右：同一血管外層的

縱向排列的致密彈性纖維網(wǎng)（高放大倍數(shù)）。

其它成分已用酶和甲酸消化。一個典型的有絲分裂中期的染色體近末端區(qū)域的掃描電鏡照片一個有絲分裂染色體的染色單體的透射電鏡照片一個正在分裂的動物培養(yǎng)細胞，掃描電鏡圖片早期小鼠胚胎的掃描電鏡照片A：2細胞時期B：4細胞時期C：8-16細胞時期，桑椹胚D：胚泡期ABCD三、掃描隧道顯微鏡(scanningtunnelingmicroscope,STM)Binning,Rohrer等1981年發(fā)明，獲1986年諾貝爾獎。用來顯示晶體表面原子布陣的一種顯微鏡。原理：加上一定電壓的精密探針。鎢絲或白金絲，直徑幾個埃。電子在樣品與探針之間（距離幾個埃）轉移形成電流。特點：分辨率高，橫向為0.1-0.2nm，縱向為0.001nm.三維圖像。三態(tài)物質均可觀察。細胞化學和組織化學技術免疫細胞化學顯微光譜分析技術放射自顯影術超離心技術分子雜交技術PCR技術第二節(jié)生物化學分析一、細胞化學和組織化學技術細胞化學染色是利用染色劑可同細胞的某種成分發(fā)生反應而著色的原理，從而對某種成分進行研究和分析。細胞的各種成分幾乎都能顯示，包括有無機物、醛、蛋白質、糖類、脂類、核酸、酶等。例：DNA的Feulgen反應顯示法1924年，F(xiàn)eulgen和Rossenbeck發(fā)明。原理：鹽酸水解，DNA分子中的嘌呤堿基被解離，出現(xiàn)醛基，試劑中的無色品紅與醛基反應，呈現(xiàn)紫紅色。例：

PAS（高碘酸席夫反應）──鑒定多糖類物質醛基與Schiff試劑反應，生成紅色化合物。。（一）固定物理固定：血膜空氣快速干燥、冷凍干燥?；瘜W固定：如甲醇、乙醇、丙酮、甲醛、戊二醛和鋨酸等試劑。顯示多糖常用乙醇固定，顯示酶類多用甲醛丙酮緩沖液固定。（二）顯示方法金屬沉淀法：如磷酸酶分解磷酸酯底物后，反應產(chǎn)物最終生成CoS或PbS有色沉淀，而顯示出酶活性。Schiff反應：細胞中的醛基可使Schiff試劑中的無色品紅變?yōu)榧t色。用于顯示糖和脫氧核糖核酸（Feulgen反應）。聯(lián)苯胺反應：過氧化酶分解H202。產(chǎn)生新生氧，后者再將無色聯(lián)苯胺氧化成聯(lián)苯胺藍，進而變成棕色化合物。脂溶染色法：借蘇丹染料溶于脂類而使脂類顯色。茚三酮反應：顯示蛋白質。二、免疫細胞化學（immunocytochemistry)是根據(jù)免疫學原理，利用抗體同特異抗原專一結合，對抗原進行定位測定的技術?？乖饕獮榇蠓肿踊蚺c大分子結合的小分子；抗體則是由漿細胞針對特異的抗原分泌的r球蛋白。如果將抗體結合上標記物，再與組織中的抗原發(fā)生反應，即可在光鏡或電鏡下顯示出該抗原存在于組織中的部位。

方法：原位分析體外蛋白質分析（一）原位分析★免疫反應

直接法：Ag+Ab*

鏡檢（*代表標記物）間接法：Ag+Ab1+Ab2*

鏡檢標記物可以為多種：熒光素─免疫熒光技術或稱熒光抗體法酶─酶標抗體法放射性同位素標記—放射自顯影鐵蛋白標記免疫膠體金技術常用標記物：熒光素、酶。常用熒光素：異硫氰酸熒光素、羅丹明；常用的酶：辣根過氧化物酶。酶標抗體法，又名酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），利用酶標記抗原或抗體以檢測相應抗原或抗體的一種免疫學標記技術。其基本原理是使抗原或抗體結合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性，而相對應的抗體或抗原與某種酶連接成酶標抗體或抗原，酶標抗體或抗原既保留了免疫活性可以與固相載體表面的抗原或抗體結合，又保留了酶活性能夠以酶為檢測信號，加入酶反應的底物后，底物被酶催化為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與受檢抗體或抗原的量成比例，故可根據(jù)顏色深淺來定性或定量分析。酶標抗體法具有靈敏性強，特異性高，重復性好，檢測速度快的特點，尤其適用于大批量樣本檢測，是國際認可的標準化診斷方法。（二）體外蛋白質分析蛋白質印跡法（Westernblotting）技術路線：（圖）樣品制備—樣品分離—樣品轉移—免疫反應——檢測蛋白質由SDS聚丙烯凝膠

硝酸纖維素膜轉移的過程即為印跡（blotting）三、顯微光譜分析技術細胞中有些成分具有特定的吸收光譜，核酸、蛋白質、細胞色素、維生素等都有自己特征性的吸收曲線，如核酸的吸收波長260nm，蛋白質280nm。有些成分經(jīng)組織化學染色后，對可見光有特定的吸收光譜。根據(jù)細胞成分所具有的這種特性，可利用細胞分光光度計對一定的成分進行定位、定性，甚至定量測定。四、流式細胞術*儀器：流式細胞計—flowcytometer*特點：細胞是高速運動的*主要應用：用于定量測定細胞中的DNA、RNA或某一特異蛋白的含量；測定細胞群體中不同時相細胞的數(shù)量；從細胞群體中分離某些特異染色的細胞。二、流式細胞術用途：對單個細胞進行快速定量分析與分選的一門技術。原理：包在鞘液中的細胞通過高頻振蕩控制的噴嘴，形成包含單個細胞的液滴，在激光束的照射下，這些細胞發(fā)出散射光和熒光，經(jīng)探測器檢測，轉換為電信號，送入計算機處理，輸出統(tǒng)計結果，并可根據(jù)這些性質分選出高純度的細胞亞群，分離純度可達99%。包被細胞的液流稱為鞘液，所用儀器稱為流式細胞計（flowcytometer）。五、放射自顯影（radioautography)放射自顯影技術：利用放射性物質使照相乳膠膜感光，再經(jīng)顯影以顯示該物質自身的存在部位的技術。由于有機大分子均含有碳、氫原子，實驗室一般采用14C、3H標記。14C、3H均為弱β放射性同位素，半衰期長。14C半衰期為5730年，3H為12.5年一般常用3H胸腺嘧啶脫氧核苷來顯示DNA，用3H尿嘧啶核苷顯示RNA。在研究蛋白質和粘多糖時，分別選用3H氨基酸、3H甘露糖、3H巖藻糖等。3H-尿嘧啶脈沖標記的細胞，示異染色質區(qū)（核內白色區(qū)）無轉錄活性五、超離心技術高速離心：10000—25000r/min超速離心：轉速大于25000r/min沉降系數(shù)（“S”—Svedbergunit）:單位離心場中溶質分子的沉降速度1S相當于1

10-13s離心目的：分離細胞器與生物大分子及其復合物大多數(shù)蛋白質和核酸的沉降系數(shù)在4S和40S之間，核糖體及其亞基在30S和80S之間，多核糖體在100S以上。離心種類：分析離心：用于分析和測定制劑中的大分子的種類和性質等制備離心：差速離心：分離密度不同的細胞組分密度梯度離心：精細組分或生物大分子的分離（介質蔗糖、氯化銫）微粒體(microsomes)在超離心時，分離出的小泡狀成分，系由內質網(wǎng)等膜的碎片組成，小泡的外表面常附有核糖體，是研究糙面內質網(wǎng)功能活動的良好材料。（二）密度梯度離心用介質在離心管內形成一連續(xù)或不連續(xù)的密度梯度，將細胞混懸液或勻漿置于介質的頂部，通過離心力場的作用使細胞分層、分離。類型：速度沉降、等密度沉降。常用介質：氯化銫、蔗糖、多聚蔗糖。分離活細胞的介質要求：1）能產(chǎn)生密度梯度，且密度高時，粘度不高；2）PH中性或易調為中性；3）濃度大時滲透壓不大；4）對細胞無毒。1、速度沉降velocitysedimentation

用途：分離密度相近而大小不等的細胞或細胞器。特點：介質密度較低，介質的最大密度應小于被分離生物顆粒的最小密度。原理：介質密度梯度平緩，分離物按各自的沉降系數(shù)以不同的速度沉降而達到分離。2.等密度沉降isopycnicsedimentation用途：分離密度不等的顆粒。特點：介質密度較高，陡度大，介質的最高密度應大于被分離組分的最大密度。所需的力場通常比速率沉降法大10~100倍，往往需要高速或超速離心。原理：樣品各成分在連續(xù)梯度的介質中經(jīng)過一定時間的離心則沉降到與自身密度相等的介質處，并停留在那里達到平衡，從而將不同密度的成分分離。（一）差速離心Differentialcentrifugation特點：介質密度均一；速度由低向高，逐級離心。用途：分離大小相差懸殊的細胞和細胞器。沉降順序：核——線粒體——溶酶體與過氧化物酶體——內質網(wǎng)與高基體——核蛋白體?？蓪⒓毎鞒醪椒蛛x，常需進一步通過密度梯離心再行分離純化。六、分子雜交技術（molecularhybridization)原理：具有互補核苷酸序列的兩條單鏈核苷酸分子片段，在適當條件下，通過氫鍵結合，形成DNA-DNA,DNA-RNA或RNA-RNA雜交的雙鏈分子。方法：原位雜交體外分析核酸的主要方法★Southernblotting又稱DNA印跡法Northernblotting又稱RNA印跡法原位雜交（insituhybridization)：在不破壞細胞或細胞器的情況下，用核酸探針檢測特定核苷酸序列在染色體上的精確位置的技術。染色體在高pH值條件下，DNA解鏈，帶標記的核酸探針即刻與染色體一定部位雜交。既可檢測DNA序列，也可檢測RNA序列。帶放射性的DNA探針，放射自顯影；免疫探針法。人類染色體端粒DNA的熒光原位雜交

熒光原位雜交顯示的著絲粒衛(wèi)星DNA（黃）七、PCR技術：聚合酶鏈式反應原理：將DNA片段經(jīng)過若干次解鏈和復性循環(huán)，大量擴增，甚至可擴增到十幾億倍，以便于對已知DNA片段進行分析，如基因分析、序列分析、進化關系分析和臨床診斷等。一般可擴增106-107。DNA聚合酶：Taq酶，來源于一種嗜熱水生菌。最適作用溫度75-80度，95度下短時間不失活。第三節(jié)細胞生理學技術1、膜電位檢測技術細胞內外存在電位差（20~100mV）稱為膜電位，膜電位的變化反應了細胞的生理變化2、膜片鉗位記錄技術主要用于檢測單個特定離子通道性質及變化3、細胞電泳細胞表面帶有許多電荷，因而可以在外加電場的作用下移動三、細胞電泳原理：在一定PH值下細胞表面帶有凈的正或負電荷，能在外加電場的作用下發(fā)生泳動。各種細胞或處于不同生理狀態(tài)的同種細胞荷電量有所不同，故在一定的電場中的泳動速度不同。用途：檢測細胞生理狀態(tài)和病理狀態(tài)、分離不同種類的細胞，如分離哺乳動物的XY精子。第四節(jié)實驗操作技術一、細胞培養(yǎng)高等生物是由多細胞構成的整體，在整體條件下研究單個細胞或某一群細胞在體內的功能活動十分困難?；罴毎x體培養(yǎng)（一）動物細胞培養(yǎng)20世紀初，Harrison（1907）兩棲類胚胎神經(jīng)管組織懸浮培養(yǎng)，神經(jīng)細胞存活多天，觀察到神經(jīng)細胞分化成神經(jīng)元，伸出了軸突。20世紀40年代，W.Earle和R.Dulbecco設計出細胞培養(yǎng)液配方，并將組織分散成單個細胞進行懸浮培養(yǎng)，細胞培養(yǎng)工作廣泛展開。體外培養(yǎng)細胞生長特點：接觸抑制現(xiàn)象細胞消化方法：酶法：胰酶，果膠酶非酶法：EDTA細胞培養(yǎng)方式：A.

群體培養(yǎng)（massculture)：將含有一定數(shù)量細胞的懸液置于培養(yǎng)瓶中，讓細胞貼壁生長，匯合后形成均勻的單細胞層。B.

克隆培養(yǎng)(clonalculture)：將高度稀釋的游離細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，各個細胞貼壁后，彼此距離較遠，經(jīng)過生殖生長，每一個細胞形成一個細胞集落，此種集落即稱為克?。╟lone)。群體培養(yǎng)（左）和克隆培養(yǎng)（右）

C.

轉鼓培養(yǎng)法：使用大容量的原培養(yǎng)瓶，在培養(yǎng)過程中不斷地轉動，使培養(yǎng)細胞始終處于懸浮狀態(tài)之中而不貼壁，用于細胞大規(guī)模培養(yǎng)而制取細胞產(chǎn)品?；瘜W合成培養(yǎng)基：TC-199，RPMI-1640等細胞培養(yǎng)中要注意：細胞所需要的營養(yǎng)成分要盡量滿足要保持適當?shù)臐B透壓嚴格控制pH值添加細胞所需的生長因子血清、血漿等正常組織的初級培養(yǎng)物，細胞傳代培養(yǎng)的壽命有一定的限度只有癌細胞和發(fā)生轉化的細胞才能無限生長下去轉化：正常細胞在某種因子的作用下發(fā)生突變而成癌性細胞。細胞培養(yǎng)的基本概念外植體：用于體外培養(yǎng)的組織和細胞群原代培養(yǎng)（primaryculture）──原代細胞傳代培養(yǎng)（sub-culture）細胞株:通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得具有特殊性質或標志物稱為細胞株。

細胞系：原代培養(yǎng)物經(jīng)首次傳代成功即稱為細胞系（CellLine），因此細胞系可泛指一般可能傳代的細胞。克?。阂粋€細胞經(jīng)有絲分裂繁殖的一群后代（二）植物細胞培養(yǎng)動物細胞—體外不能分化，不能形成組織；植物細胞—體外可分化發(fā)育為植株，即再生植株。植物細胞培養(yǎng)分為：1.花藥或花粉培養(yǎng)：花粉培養(yǎng)液愈傷組織分化培養(yǎng)基長出莖葉另一分化培養(yǎng)基根形成花盆植株2.胚和胚珠培養(yǎng)：胚幼胚培養(yǎng)基2~3周分化胚狀體的培養(yǎng)基長出莖葉……3.莖頂端培養(yǎng)：莖頂或葉片組織酶消化單細胞愈傷組織途徑……4.原生質體高滲培養(yǎng)基生成細胞壁分化培養(yǎng)基愈傷組織……

植物細胞經(jīng)纖維素酶或果膠酶去掉細胞壁即成原生質體，原生質體可進行細胞融合及轉基因操作。二、顯微操作技術在顯微鏡下，用顯微操作裝置對細胞進行解剖手術和微量注射的技術。顯微操作技術包括細胞核移植、顯微注射、嵌合體技術、胚胎移植以及顯微切割等。

三、細胞融合概念：真核細胞通過介導和培養(yǎng)，兩個或多個細胞合并成一個雙核或多核細胞的過程稱為細胞融合（cellfusion)或細胞雜交（cellhybridization)。基因型相同的細胞融合成的雜交細胞稱為同核體（homokaryon)；來自不同基因型的雜交細胞則稱為異核體（heterokaryon)。同種細胞在培養(yǎng)時2個靠在一起的細胞自發(fā)合并，稱自發(fā)融合；異種間的細胞必須經(jīng)誘導劑處理才能融合，稱誘發(fā)融合。誘導細胞融合的方法有三種：生物方法（病毒）、化學方法（聚乙二醇PEG）、物理方法（電激和激光）。細胞融合不僅可用于基礎研究，而且還有重要的應用價值，在植物育種方面已經(jīng)成功的有蘿卜+甘藍、粉藍煙草+郎氏煙草、番茄+馬鈴薯等等。小麥+各種禾本科草單克隆抗體技術是細胞雜交技術的成功應用.正常淋巴細胞（如小鼠脾細胞）具有分泌抗體的能力，但不能在體外長期培養(yǎng)，瘤細胞（如骨髓瘤）可以在體外長期培養(yǎng)，但不分泌抗體。于是英國人Kohler和Milstein1975將兩種細胞雜交而創(chuàng)立了單克隆抗體技術，獲