實驗室風險評估文件

PAGEPAGE98成都市新都區(qū)中醫(yī)醫(yī)院實驗室生物安全風險評估報告一、檢驗職業(yè)感染的現(xiàn)狀

經血、呼吸道、粘膜傳播疾病直接危害著檢驗工作者身體健康。我國是HBV感染的高發(fā)區(qū),約有1.3億人攜帶HBV,HBV表面抗原(HBsAg)的攜帶率為8%-20%;自90年代以來HCV感染也呈上升趨勢,其感染率為3%。目前艾滋病感染在我國的流行已進入增長期。在無償獻血人群中檢出乙型肝炎、丙型肝炎、梅毒、艾滋病等病毒感染占有一定的比例。經調查顯示,針頭和玻璃碎片是主要銳器致傷因子,經常接觸針頭者發(fā)生銳器傷的危險是不經常接觸者的23倍。多種傳染病是通過血液傳染的,而血液檢驗中的職業(yè)暴露大多數(shù)來自實驗室工作人員在實驗操作和標本采集過程中,意外被帶病原體的血液污染破損的皮膚或被病原體感染的針頭、血常規(guī)采血針、采血玻璃管、吸頭等銳器刺破皮膚，呼吸道吸入氣溶膠也是傳播方式之一。因此,檢驗人員面臨著嚴峻的職業(yè)暴露危險。1.傳播途徑檢驗人員感染疾病的一般傳染途徑有:

（1）皮膚破損:帶有HIV、HBV、HCV、梅毒等病原體的血液,長時間接觸小傷口、潰瘍、擦傷等破損皮膚,將會造成機體的感染。

（2）穿刺:由于針頭、刀片等對皮膚的意外損傷,使帶有病毒的全血、血清或血漿進入皮下或循環(huán)系統(tǒng),造成感染。這種針頭意外損傷是職業(yè)性HBV和HIV感染最重要的原因。帶有HIV的針頭意外穿刺皮膚后,HIV感染的可能性在0--0.9%之間,平均為0.4%。而對于HBV,這個可能性在6%-30%之間,平均為18%。有學者進行了相應的統(tǒng)計推算,每1000個艾滋病病人,每年會產生1例由于針頭意外造成的職業(yè)性HIV感染;而每1000個乙肝患者,每年會產生45例類似職業(yè)性HBV感染。由于HBV在人群中的感染率比HIV高得多,在一定人群中,每年產生的因針頭意外造成的職業(yè)性HBV感染比HIV多得多。（3）粘膜:由于試管未封閉、離心意外等造成的血液飛濺,帶有病原體的血液與口腔、鼻腔黏膜或眼結膜等接觸,可以造成感染。還有被HIV、HBV、HCV、梅毒等病原體污染的電話、儀器、工作臺面等接觸,也可以造成感染。（4）吸入含病原體的氣溶膠引起感染:在采血窗口或發(fā)放化驗單時,直接與病人面對面接觸交談,易感染呼吸道疾病。此外,能引起氣溶膠的操作或事故有離心、溢出或濺灑、混合、混旋、研磨、超聲以及開瓶時兩個界面的分離等。2.危害因素

（1）血源性危害:調查研究發(fā)現(xiàn),檢驗人員被針刺傷占第2位。最常見危害較大的職業(yè)傳染病有以下3種：

1）乙型肝炎:HBV是檢驗人員面臨傳播危險性最大的血源性疾病,HBV在血液中的濃度可以高達108-109拷貝/ml,檢驗人員感染率較高。HBV主要傳播途徑是經血液的傳播,病毒攜帶者血液中HBV的濃度很高,針刺傷時,只需0.004ml，帶有HBV的血液足以使受傷者感染HBV。

2）丙型肝炎:丙肝病毒(HCV)在血液中的濃度在102-103/ml左右,主要經血液傳播,因此通過注射、針刺、含HCV血液污染的傷口和其他密切接觸傳播。丙型肝炎大多數(shù)患者的癥狀不明顯,往往不容易被發(fā)現(xiàn),可表現(xiàn)為流感樣癥狀,有時會造成比HBV更嚴重的后果。

3）艾滋病(AIDS):近年來我國AIDS的流行對檢驗人員造成了日益嚴峻的職業(yè)性感染威脅。HIV在血液中的濃度通常在100-104拷貝/ml,被HIV污染的銳器刺傷而感染的比率為0.3%。美國疾病控制中心最新資料顯示,截止到2000年底美國醫(yī)護人員中已有57人被確診感染了HIV,其中實驗室技術人員19人。

（2）呼吸道、接觸及節(jié)肢動物叮咬危害因素病原微生物感染：病原微生物實驗室、特別是高致病性病原微生物實驗室內操作的任何疏忽、失誤都可能造成難以彌補的損失。常見感染：結核分枝桿菌、腸道致病菌等。

3．防護措施

（1）增強檢驗工作人員的防護意識及防護行為：為了最大限度地減少危害,檢驗工作人員應主動地從多方面了解關于HBV、HCV、HIV等相關的知識,了解各種病毒的傳播方式,使自己知道采取什么樣的防護措施。醫(yī)院和檢驗科應高度重視,定期加強教育,讓檢驗工作人員都意識到自我防護的重要性,自覺地養(yǎng)成良好的習慣。

（2）規(guī)范操作程序：各類醫(yī)療廢物、垃圾必須分類放置,及時消毒后,再由衛(wèi)生清潔人員取走。特別注意對損傷性醫(yī)療廢物的及時處理。嚴格防止感染或致病因子外泄而污染環(huán)境。要嚴格規(guī)章制度,養(yǎng)成良好的工作習慣。檢驗科應制定一套有關衛(wèi)生防護的規(guī)章制度,人人都應自覺遵守。如在實驗室內禁止吸煙、吃東西、接聽手機;在免疫學檢驗室和細菌室工作,要戴口罩和手套。防止各種液體飛濺,必需避免手或皮膚直接接觸,若有意外污染應及時消毒、沖洗并擦干飛濺出的液體。在離心機停止轉動前時,不要打開頂蓋,以減少氣溶膠的產生。更不要用手去使離心機減速,避免機械損傷的發(fā)生。

（3）避免銳器損傷,熟練掌握銳利器械的使用：感染性的各種針管、吸管、吸頭、試管、玻片等用后及時放在專用容器內;用過的針頭不要套回針帽,避免刺傷。銳器損傷后立即擠出傷口處的血液,用肥皂水和流水清洗傷口,2%碘伏消毒后紗布包扎,可套橡皮指套(或橡皮手套),下班前洗手再重新消毒包扎,并準確記錄上報,確認損傷器械是否來自有傳染性疾病的患者,以使受傷者及時得到監(jiān)測和治療。

（4）重視手部清潔：院內感染病原體傳播最主要媒介是污染的手。戴醫(yī)用乳膠手套可以為醫(yī)務人員提供很好的保護。乳膠手套盡管不能避免針頭造成的機械損傷,但可以在很大程度上減少皮膚與血液的接觸。而且,當針頭造成意外損傷后,乳膠手套還可以起到一種阻擋、封閉作用,減少進入傷口的血量,從而降低感染。正確的洗手方法可使手表面的暫居菌減少1000倍,用普通肥皂和清水擦揉15s以上,可清除暫居菌或降低其在皮膚上的密度,搓洗15s,手表面的金黃色葡萄球菌可下降77%,洗2分鐘可降低85%;對銅綠假單胞菌效果更好,搓洗12s便可去除92%,洗2分鐘可去除97.8%。

（5）職業(yè)暴露的局部處理：工作中職業(yè)暴露后現(xiàn)場急救處理非常重要,若黏膜暴露應用生理鹽水或清水反復沖洗干凈;皮膚意外接觸到血液等污染物,應立即以肥皂和清水沖洗;若被血液污染的針頭或儀器等銳器刺傷,對傷口進行輕輕擠壓,盡可能擠出損傷處的血液,用肥皂和流水清洗傷口,用70%酒精、0.2%-0.5%過氧乙酸、0.5%碘伏等浸泡或涂抹消毒,并包扎傷口、帶手套等,發(fā)生意外傷害暴露后要立即進行傷口局部處理,并立即報告預防保健部門,受傷者及患者進行HBV、HCV、HIV和梅毒等檢測。依據(jù)檢測結果盡快采取相應的補救措施,減少職業(yè)感染率的發(fā)生。二、實驗室風險評估目的

風險評估的目的就是確定實驗室防護等級，建立生物安全防護機制，配備適當?shù)姆雷o用品，采取相應的防護措施。評估的范圍是科室所有涉及到的病原微生物，以及對化學、物理、輻射、電氣、水災、火災、自然災害和噪音等進行風險評估。科室管理機構要統(tǒng)籌安排。評估的結論要十分明確，包括危險程度極低的微生物?？梢愿鶕?jù)實驗室工作特點、儀器使用，打包評估。危害性評估始于實驗室設計建造之前，實施于實驗活動之中，在使用之后還需進行定期的階段性再評估。當發(fā)生實驗室意外，或新發(fā)傳染病，或嚴重疫情時，應特別注意要安排此項工作。緊急、意外事故應對方案提供以下操作規(guī)范：

1.防備火災、洪水、地震和爆炸等自然災害

2.意外暴露的處理和污染清除

3.意外事故發(fā)生時的繼續(xù)操作、人員緊急撤離4.人員暴露和受傷的緊急醫(yī)療處理，如醫(yī)療監(jiān)護、臨床處理和流行病學調查。三、風險評估內容（一）生物因子危害評估生物因子（biologicalagents）概念：可能引起感染、過敏或中毒的所有微小生物體，包括基因修飾的、細胞培養(yǎng)的和寄生于人體的。（1）危害評估內容包括生物因子已知或未知的特性，如生物因子的種類、來源、傳染性、傳播途徑、易感性、潛伏期、劑量－效應關系、致病性、變異性、在環(huán)境中的穩(wěn)定性、與其他生物和環(huán)境的交互作用、流行病學資料、預防和治療方案等。（2）制定評估報告：各種因素的風險發(fā)生概率程度、針對這些風險采取的預防措施以及風險發(fā)生后的補救方法。依據(jù)2006年1月11日中華人民共和國衛(wèi)生部頒布的《人間傳染的病原微生物名錄》，對醫(yī)院檢驗科可能接觸的病原體進行評估。。

實驗室主要實驗活動序號實驗室活動涉及的病原微生物危害程度分類活動類別生物安全級別7抗酸染色結核分枝桿菌第二類樣本檢測BSL-211細菌培養(yǎng)魯氏不動桿菌第三類大量活菌操作BSL-212細菌培養(yǎng)鮑氏不動桿菌第三類大量活菌操作BSL-273細菌培養(yǎng)大腸桿菌第三類大量活菌操作BSL-283細菌培養(yǎng)產酸克雷伯菌第三類大量活菌操作BSL-284細菌培養(yǎng)肺炎克雷伯菌第三類大量活菌操作BSL-290細菌培養(yǎng)摩氏摩根菌第三類大量活菌操作BSL-2107革蘭染色淋病奈瑟菌第三類大量活菌操作BSL-2121細菌培養(yǎng)奇異變形菌第三類大量活菌操作BSL-2123細菌培養(yǎng)普通變形菌第三類大量活菌操作BSL-2124細菌培養(yǎng)產堿普羅威登斯菌第三類大量活菌操作BSL-2125細菌培養(yǎng)雷氏普羅威登斯菌第三類大量活菌操作BSL-2126細菌培養(yǎng)銅綠假單胞菌第三類大量活菌操作BSL-2130細菌培養(yǎng)腸沙門菌第三類大量活菌操作BSL-2132細菌培養(yǎng)甲乙丙型副傷寒沙門菌第三類大量活菌操作BSL-2133細菌培養(yǎng)傷寒沙門菌第三類大量活菌操作BSL-2137細菌培養(yǎng)粘質沙雷菌第三類大量活菌操作BSL-2138細菌培養(yǎng)志賀菌屬第三類大量活菌操作BSL-2139細菌培養(yǎng)金黃色葡萄球菌第三類大量活菌操作BSL-2142細菌培養(yǎng)肺炎鏈球菌第三類大量活菌操作BSL-2147抗體檢測梅毒螺旋體第三類樣本檢測BSL-245抗體檢測艾滋病毒第二類樣本檢測BSL-2107抗體檢測甲型肝炎病毒第三類樣本檢測BSL-2108抗體檢測乙型肝炎病毒第三類樣本檢測BSL-21.艾滋病抗體樣本檢測的風險評估一般生物學特性1.起源1981年6月5日美國亞特蘭大市疾病控制中心在當天出版的《發(fā)病率與死亡率周刊》中刊登了一篇只有幾頁的報告，簡要介紹了5位病人的病史。這5個人本來很健康，但他們得了一種十分罕見的威脅生命的疾病。第一位病人是33歲的美國人。他以前很健康，1981年1月突然發(fā)燒，再加上干咳，呼吸困難。3月份，他被洛杉礬一家醫(yī)院接收。醫(yī)生診斷認為，這種新的流行病是典型的肺炎，是由對健康人沒有危險的病原體卡氏肺囊蟲引起的。此外，醫(yī)生肯定，這種病是巨細胞病毒傳染的，化驗結果是白血球數(shù)目減少。盡管用最現(xiàn)代化的方法進行治療，但這位33歲的美國人仍然于1981年5月3日死了。這5位病人的共同特點是：大約30歲左右，發(fā)燒、咳嗽，患卡氏肺囊蟲肺炎，被認為是由巨細胞病毒傳染的。這種病的最終定名，還得感謝法國里昂的巴斯德研究所。以蒙特尼爾為首的研究小組在過去研究的基礎上設想：分離病毒最好的時機不是在病情已深人發(fā)展的時候，而是在病之初期，先兆癥狀剛剛出現(xiàn)之時。接著他們從一患者身上取出淋巴結組織進行培養(yǎng)，并采取有利于病毒繁殖的措施。15天后，漂浮在培養(yǎng)液上層的淋巴結細胞中發(fā)現(xiàn)了具有特征的逆轉錄酶。不久，又在電子顯微鏡下觀察到了這種新病原。1983年5月，他們在《科學》雜志上報2.基因組及其編碼產物HIV呈20面體立體對稱球形顆粒[3]，表面有刺突狀結構的糖蛋白，直徑約為100nm，分為包膜與核心兩部分，包膜以脂質雙層結構為框架，gp41蛋白橫跨脂質雙層，gp41外端連接gp120，包膜下有一層基質蛋白p17，附著脂質雙層膜的內層，起穩(wěn)定作用。病毒的核心呈錐形，核衣殼由核心蛋白p24組成，和其它逆轉錄病毒基因組一樣為二倍體基因，核心內有兩條相同的單股RNA鏈，由氫鍵將兩個RNA分子連接成70sRNA，重要的蛋白質有逆轉錄酶(p66/51)和整合酶(p34)(見圖1)。HIV基因組又稱HIVRNA，由約9200個堿基組成，其RNA中含有gag、env和pol三種結構蛋白的基因以及6種調控基因(tat，vif，vpr，vpu(在HIV-2型為vpx)，nef，rev)。gag基因先編碼一個55KD的前體蛋白(p55)然后在蛋白酶作用下裂解形成衣殼蛋白(CA)p24和基質蛋白p17，p24形成病毒蛋白的錐體核。pol基因一部分與gag重疊，表達融合蛋白p160，然后水解成3個片段，從5’到3’分別是p11,p66/51和p32。p11是蛋白水解酶，從前體裂解后獲得活性，是蛋白酶抑制劑的抗病毒位點，p66/51是逆轉錄酶，具有逆轉錄酶、核糖核酸酶H、DNA多聚酶活性，p32是整合酶。env基因編碼包膜糖蛋白，先編碼一個88KD的蛋白，經糖基化后分子量增至160KD，即包膜糖蛋白的前體gp160，該前體蛋白在蛋白酶作用下，裂解成gp120和gp41。p24、gp120、gp41及p55是HIV免疫學診斷的主要檢測抗原。調控基因編碼輔助蛋白，調節(jié)病毒蛋白合成和復制[3]。tat等6個基因被稱為調控基因，分別表達6種蛋白質，對病毒復制起調控作用，它們分別是tat(transactivator)反式激活因子，rev(regulatorofexpressionofvirionproteins)毒粒蛋白表達調節(jié)因子，nef(negativeregulatoryfactor)負調控因子，vpr(viralproteinr)病毒r蛋白，vpu(viralproteinu)病毒u蛋白，vif(virioninfectivityfactor)病毒感染因子。3.形態(tài)特征HTLV-III的病毒粒子是直徑約1000埃（長度單位，0.0000000010厘米）的圓球。粒子外包裹著由兩層脂質組成的膜。這種脂質取之于清主細胞的外膜。由糖蛋白（附有糖鏈的蛋白質）拴住這層膜。每個糖蛋白有兩種組分：覆蓋著膜的GP41和伸出膜外的GP120。這種由膜和蛋白質組成的被膜包裹著一個由蛋白質P24和P18組成的核。病毒RNA被攜帶在核內。此外還有逆轉錄酶的幾個挎貝，其功能是催化病毒DNA的裝配。4.培養(yǎng)特性以經植物血凝素激活的正常人外周血T淋巴細胞為滋養(yǎng)細胞，與含有HIV的淋巴細胞共同培養(yǎng)，同時加白細胞介素—2以支持T細胞的生長，加聚寧胺膠以促使病毒的吸附，加氫化可的松以抑制細胞的免疫反應。這是，HIV便可在培養(yǎng)的細胞內大量繁殖，然后進行病毒檢測。5.流行特性不管怎么說艾滋病是20世紀下半葉最嚴重的一種傳染病。至今全世界已有4000多萬人感染了艾滋病病毒。至1997年6月30日，全世界艾滋病患者已達1644183名，預計未來10年將超過1億。目前全球每分鐘有11人感染艾滋病病毒。截至1998年9月底，我國感染HIV者為11170人，艾滋病患者338例，死亡184例。實際上感染者已超過30萬，預計兩年后超過120萬二、致病性和感染劑量1、致病性一定量的病毒進入體循環(huán)中的淋巴細胞、單核細胞以及周圍淋巴結，病毒迅速復制和繁殖，病毒量急劇猛增，每毫升血漿中病毒RNA可達10萬至100拷貝（10的5次方-10的6次方拷貝/ML血漿），因此急性期在血清中可以發(fā)現(xiàn)相當高水平的HIV抗原，但抗體不能被檢測到。大約50%-70%的感染者會出現(xiàn)臨床癥狀，主要表現(xiàn)為發(fā)熱、皮疹、咽炎、淋巴結腫大、惡心、嘔吐、腹瀉等癥狀。這些癥狀一般都很輕微短暫，持續(xù)2-4周左右，經對癥處理甚至不經治療即可恢復正常。隨即機體的免疫系統(tǒng)迅速進入戰(zhàn)斗狀態(tài)，產生相應的抗體，由于免疫系統(tǒng)的防衛(wèi)功能，在短短幾個星期內，病毒RNA會降低，降低程度與免疫能力有密切關系，免疫能力越強病毒RNA降低越多，預后越佳。末梢血檢查，白細胞總數(shù)正?；驕p少，單核細胞增加。急性HIV感染期后，有一個較長的沒有任何臨床癥狀，能夠維持正常的免疫狀態(tài)的時期，即為無癥狀期，又稱臨床潛伏期，多為7-10年，平均8年。在潛伏期內，HIV在人體內一直維持著高度復制平衡狀態(tài)，也就是病毒每天大量產生，但同時也大量的被清除，不斷的感染和殺傷T淋巴細胞，也不斷的突變來逃避免疫系統(tǒng)的追擊，結果HIV感染者身上會整體表現(xiàn)出在長時間的無癥狀期后，病人可出現(xiàn)不明原因的進行性消瘦，乏力，這個時期感染者開始出現(xiàn)艾滋病相關綜合征（ARC）和較輕微的感染，繼而發(fā)生“機會性感染”，大多數(shù)表現(xiàn)為卡氏肺囊蟲肺炎或中樞神經系統(tǒng)的感染，這是大多數(shù)AIDS病人死亡的直接原因。血漿病毒載量開始上升，CD4+減少速度明顯加快。HIV病毒不僅進入淋巴細胞，同樣也進入血液循環(huán)中的其他細胞，比如單核細胞。同時亦可進入人體各個臟器包括腦、胃腸道、肝、脾、腎及其他部位患者表現(xiàn)出嚴重的細胞免疫缺陷，發(fā)生各種致命的機會性感染和/或惡性腫瘤，CD4+細胞記數(shù)<200個/μL。2.感染劑量主要與感染的途徑有關三、感染途徑及潛在暴露結果人是唯一的傳染源，包括AIDS患者和HIV感染者。人體受HIV病毒感染后直到發(fā)病死亡，體內一直攜帶病毒。感染者的血液、精液、唾液、眼淚、尿、腦脊液、羊水、乳汁、宮頸及陰道分泌物中均能分離到HIV病毒，但在自然傳播中起主要作用的是血液、精液和宮頸及陰道分泌物。因此，實驗室工作者應穿工作服、戴手套，防止皮膚劃傷，并嚴格按照規(guī)程操作，做好自我保護和對污染物的消毒。性接觸是主要傳播途徑，其中男性同性戀的性接觸最易感染。美國成年AIDS有63%是同性戀男人，10%是通過異型性生活的男人和女人。在某些地區(qū)妓女在AIDS的傳播中起主導作用。輸注帶病毒的血液或血液成分是另一種主要傳播途徑，使用未經消毒的注射器和針頭是靜脈注射毒物者中傳播AIDS的主要途徑。與血液有關的另一種傳播方式是器官或骨髓移植。母嬰傳播是嬰幼兒感染HIV的主要方式，可通過血液經胎盤感染、產道羊水感染和哺乳時的母乳感染。到目前為止還沒有發(fā)現(xiàn)HIV通過空氣、食物、飲水、食具或日常生活接觸而傳播的報道。四、環(huán)境中的穩(wěn)定性HIV能耐受低溫而對高溫敏感，煮沸可迅速滅活，室溫下液體環(huán)境中HIV可存活15天，被HIV污染的物品至少3日內有傳染性，液體中的HIV加熱56℃10分鐘即可滅活。干燥狀態(tài)下外界蛋白質對HIV有顯著保護作用，真空冷凍干燥的血制品加熱68℃72小時才能保證所含HIV被滅活，HIV對甲醛、戊二醛、乙醇、鹵族化合物敏感。37℃時，以下消毒劑處理10分鐘，可滅活HIV，常用的消毒劑如70%酒精、10%漂白粉、2%戊二醛、4%福爾馬林、35%異丙醇、0.5%來蘇和0.3%過氧化氫等均能滅活病毒。消毒效果受以下因素制約：溫度、消毒劑濃度、作用時間、病毒數(shù)量、病毒株別、有無其它蛋白質及雜質。HIV對紫外線不敏感五、被操作微生物的濃度和劑量的影響在進行HIV抗體檢測時要防止血清污染。六、自然宿主和易感人群非洲叢林中，有人患怪病死去，其癥狀與那5個人很相似。于是人們把過去50年冷凍保存的叨萬份血樣進行化驗發(fā)現(xiàn)：在非洲綠猴的血液里存在一種病毒"猴艾滋病病毒"，這種病毒與人艾滋病病毒很相似。因而"猴艾滋病病毒"可能是人艾滋病病毒的祖先。但是綠猴只帶毒，不發(fā)病。后來人們又在貓、牛體內發(fā)現(xiàn)了"貓艾滋病病毒"和"牛艾滋病病毒"。因此有人推測艾滋病病毒是由于人與猴在玩耍中不小心被抓傷，"猴艾滋病病毒"從小小的傷口進人人體，經過變異在人的體內繁殖、生存、傳染。當然，這只是一個推測，也有人持不同意見。究竟"艾滋病病毒"來自哪里，現(xiàn)在還不十分清楚。都是易感人群七、實驗動物研究，實驗室感染和院內感染信息云南境內的北平頂猴對人類HIV－1病毒可感和易感，并不限制HIV-1在細胞內的復制。該發(fā)現(xiàn)表明，在現(xiàn)有的靈長類動物中，北平頂猴是較為理想和合適的艾滋病模型動物。八、實驗活動評估1.樣品采集HIV抗體檢測主要采集血液樣品，樣品采集的工作人員應掌握相關專業(yè)知識和操作技能，能有效地防止病原微生物擴散和感染。樣品采集過程中，工作人員必須清楚意識到待檢樣品的潛在感染性，操作時須戴手套（如果采集已知的HIV感染者或病人的樣本時，應戴雙層手套），提倡使用真空采血器，若使用普通的注射器，采血后，不得用手摘取針頭，不得給注射器重新“戴帽”，避免刺傷手。針筒內的血要小心緩慢地沿管壁注入試管內，防止血液外濺。盛有血液的試管必須及時加蓋，并放置于穩(wěn)妥的試管架上，防止傾側。試管在注入血液前應認真檢查試管底、管壁有否裂紋和破損。使用后的真空采血器或普通注射器及止血棉球都含有待檢樣本的血液，必須立即放入內含消毒液的容器內，按有關要求消毒一定期限后，作為醫(yī)療廢棄物處理，或放置于生物廢棄袋中，在密封的情況下送去作高壓滅菌處理。如果因流行病學調查及疾病監(jiān)測需要，在現(xiàn)場采集樣本時必須注意：（1）大面積采血時，盡可能不污染采血現(xiàn)場，工作臺面應采用一次性的臺布鋪墊；（2）受檢人員較多時，可能出現(xiàn)較混亂場面，應有工作人員注意維持工作秩序，防止人群弄翻已采好的血液樣本；（3）必須備足消毒液，以便對被污染的環(huán)境及時有效地進行消毒處理；（4）工作完畢，應該將所有的樣本采集的殘余物質用一次性臺布包裹集中放置于生物廢物袋（注意：針頭等銳器應放置于耐扎的容器內）帶回單位高壓滅菌后作無害化處理；（5）離開現(xiàn)場前，對現(xiàn)場進行一次徹底的消毒處理；（6）采集的血液樣本要按照有關規(guī)定運輸回本單位。2、樣品轉移.單位內部運輸一般單位的采血點與實驗室都有一定的距離，可能是在同一樓，或在另一樓內，采好的樣本放在規(guī)定的容器內送到實驗室，不得徒手拿到實驗室內。實驗室間遠程運輸需利用車、船、飛機等交通工具運輸?shù)臉悠?，應采用世界衛(wèi)生組織（WTO）提出的三級包裝系統(tǒng)，根據(jù)衛(wèi)生部2005年第45號令《可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運輸管理規(guī)定》的要求，高致病性病原微生物事先應進行規(guī)范合適的包裝和標記，辦妥必要的運輸申請手續(xù)，方可實施運輸。3、樣品接收、開啟實驗室接收樣本應在生物安全柜內開啟包裝件，并檢查盛裝樣品的試管有無破損或滲出的情況，如發(fā)現(xiàn)溢漏應立即將存留的樣品移出，對被污染的試管、試管架和盛器均需作嚴格消毒。4、樣品分離離心機分離血清樣品在離心前，最好在實驗室自然放置1-2h。在離心時，最好使用帶有密封離心桶（安全杯）或者密封轉頭的離心機分離血清，離心后，應在生物安全柜里開啟試管蓋。在生物安全柜內分離血清，操作時，盡量避免產生氣溶膠，工作人員的手臂動作幅度不能太大，以免影響安全柜內的空氣層流。如果是無蓋的試管，應在離心完畢后，靜止30min后，再開啟離心機蓋，如發(fā)生試管破損，要對離心機進行嚴格的消毒。血清分離器械的處理操作完畢后，所有的吸管、Tip吸頭、含血球的試管等廢棄物應置于規(guī)定的已含適當消毒液的容器內，小心的移出生物安全柜，高壓和/或焚燒。如使用濾紙片作為載體收集的樣本，在實驗室內使用緩沖液浸泡、離心收集樣本的操作，亦參照上述要求處理。要求工作人員將所有實驗操作移至生物安全柜中間進行，安全柜內工作臺面由左到右分別為相對清潔和污染區(qū)域。消毒應備有合適的消毒液，以隨時清除濺出物及溢出物。5、樣品檢測HIV抗體篩查檢測（1）手工操作：①加樣、混勻用移液器將分離好的血清在生物安全柜內加樣至酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）或其它試劑的反應孔中，小心混勻，盡可能避免氣溶膠的產生，封蓋后，用托盤平移至溫箱孵育；②洗滌、溢出洗滌儀使用前應檢查吸液針孔是否已阻塞，如發(fā)現(xiàn)阻塞應盡快疏通，在洗滌過程中要注意洗滌液不能溢出；每次洗滌完畢，用蒸餾水洗滌幾次，以免洗液中的成分產生結晶而阻塞針孔，造成實驗環(huán)境污染；吸入廢液瓶中的液體，應按量加入適量的消毒劑，作用規(guī)定時間后處置；（2）自動化酶標儀檢測:該儀器操作中存在有加樣探針及洗滌的廢液均應根據(jù)每次廢液的量加入足夠的消毒劑，作用規(guī)定的時間后處理。HIV抗體確認檢測（1）手工操作：必須注意，需確認的樣品陽性概率非常高。加好樣品以后，小心的將反應槽放于搖床上，啟動搖床，緩慢地提高轉速，直至達到規(guī)定的轉速，不要啟動后馬上達到轉速，將可能導致液體急促濺出，如搖床失常，液體溢出或泄漏，應及時用消毒劑處理；對每次反應后的廢液，應集中收集于容器內，加入足量的消毒劑，作用規(guī)定時間后棄之；（2）自動化蛋白印跡儀：儀器使用后收集的廢液應按照上述要求處理。6.剩余樣品處理如需保藏的血清或血漿樣本，應設有專用冰箱、登記造冊入檔、專人保管。若專庫保藏的，必須按照國家高致病性樣本管理要求保藏。不需保藏的所有樣本，按實驗室廢棄物處置。7.廢棄物處置廢棄物處置規(guī)范廢棄物處置應符合《實驗室生物安全通用要求》（GB19489-2004）和《消毒技術規(guī)范》（2002年版）。廢棄物處置從實驗室出來的所有廢棄物，包括不再需要的樣品（血球、血清等）、反應板、試劑陰陽性對照、ELISA標記物、試劑包裝盒等，均應視為感染性廢棄物，應置于專用的密封防漏容器或生物廢物袋中，經高壓無害化處理后，密封容器或扎緊廢物袋口，按環(huán)衛(wèi)部門要求處置。所有廢棄物應按照HIV污染物品處理，由專人按特定程序和方法進行清潔和消毒，污染或可能造成污染的材料在帶出實驗室前均應嚴格進行消毒。記錄廢棄物的處理應做好記錄。消毒效果監(jiān)測可使用化學、生物指示帶/劑法，每次高壓滅菌需用化學指示帶、每月用生物指示劑來監(jiān)測滅菌效果。九、重組DNA操作和可能擴大的宿主范圍目前，尚未見到對應的操作和文獻資料十、預防和治療措施對于艾滋病，至今尚無根治之術。但科學家經過潛心研究，利用多種技術，取得了不少喜人的成果。其中最引人注目的就是美籍華人何大一推出的"雞尾酒"療法。他認為：多種藥物合用療效遠大于單一藥物。他將兩種逆轉錄酶抑制劑與一種病毒蛋白酶抑制劑合在一起，使被測者體內艾滋病病毒數(shù)量達到測不出來的水平。十一、人員安全狀況評估制定和完善烈性傳染病實驗室生物安全技術操作規(guī)程；加強可能暴露于HIV病毒或潛在感染性材料的相關業(yè)務人員生物安全知識培訓；預防和治療措切實落實和項管理制度；預防和控制實驗室等渠道造成HIV感染和傳播，建立實驗室工作人員可穎癥狀報告制度，并保證他們能及時被告定點?？漆t(yī)院收治，以防止實驗室感染擴散到社會。禁忌人群：從事HIV研究的實驗室工作人員必須在身體狀況良好的情況下才能進入HIV初篩實驗室進行工作，出現(xiàn)下列情況之一是不宜進入：患發(fā)熱性疾病；感冒，上呼吸道感染或其他到致抵抗力下降的情況；妊娠，已經在實驗室控制區(qū)域內連續(xù)工作4小時以上左其他原因造成的疲勞狀態(tài)。實驗室工作人員必須持有上崗證進行工作十二、評估結論病原微生物分類分級依據(jù)按衛(wèi)生部《可感染人間的病原微生物名錄》（2006年）（簡稱《名錄》），人類免疫缺陷病毒（HIV）列為危害程度第2類病原微生物，根據(jù)國務院2004年頒布的424號令《病原微生物實驗室生物安全管理條例》，HIV屬于高致病性病原微生物。實驗活動、實驗室級別以及人逐步形成防護要求實驗時，未經實驗室主任同意，限制或禁止進入實驗室。不許在工作區(qū)域飲食、吸煙、清洗隱型眼鏡和化妝。食物應存放在工作區(qū)域以外專用櫥柜或冰箱中。所有的操作過程應盡量細心，避免產生和濺出氣溶膠。對于污染的銳器，必須時刻保持高度的警惕，包括針、注射器、玻片、加樣器等。注射和吸取感染材料時，只能使用針頭固定注射器或一次性注射器（即注射器和針頭是一體的）。用過的一次性針頭必須彎曲、切斷、破碎、重新套上針頭套、從一次性注射器上去掉，或在丟棄前進行人工處理，要不將之小心放入不會被刺穿的、用于收集廢棄銳器的容器中。非一次性銳器必須放置在堅壁容器中，轉移至處理區(qū)消毒，最好高壓殺菌。打碎的器皿不能直接用手處理，必須用其它工具處理，如刷子和簸箕、夾子或鑷子。盛污染的針頭、銳器、碎玻璃的容器在倒掉前，應按照相關的規(guī)定進行消毒。所有的培養(yǎng)物、儲存物及其它規(guī)定的廢物在釋放前，均應使用可行的消毒方法進行消毒，如高壓滅菌。轉移到就近實驗室消毒的物料應置于耐用、防漏容器內，密封運出實驗室。離開該系統(tǒng)進行消毒的物料，在轉移前應包裝，其包裝應符合有關的法規(guī)。濺出或偶然事件中，明顯暴露于傳染源時，要立即向實驗室主任報告。進行適當?shù)尼t(yī)學評估、觀察、治療，保留書面記錄。按日常程序、在有關傳染源的工作結束后、尤其是傳染源濺出或灑出后、或受到其他傳染源污染后，實驗室設備和工作臺面應當使用有效的消毒劑消毒。污染的設備在送去修理、維護前，要按照相關的規(guī)定消毒；在離開設施轉移前，要按照相關的規(guī)定打包運輸。安全設備正確使用和保養(yǎng)生物安全柜、最好是二級生物安全柜、或其他合適的人員防護設施、或物理遏制裝置。確定可能形成傳染性氣溶膠或濺出物的實驗過程，包括離心、研磨、勻漿、劇烈震蕩或混勻、超聲波破裂、開啟裝有傳染源的容器、采集感染標本等。涉及高濃度或大體積的傳染源時，若選用密封轉頭或帶安全罩的離心機，若轉頭或安全罩僅在生物安全柜中打開，則可在開放實驗室內離心。當必須在生物安全柜外處理標本時，需采取面部保護措施（跟鏡、口罩、面罩、或其他防濺裝置），以免傳染源或其他有害物濺或灑到面上。在實驗室內，必須使用專用的防護性外衣、大褂、罩衫或制服。人員到非實驗室區(qū)域時，防護服必須留在實驗室內。防護服可以在實驗室內處理，也可以在洗衣房中洗滌，但不能帶回家中。能接觸潛在傳染源、被污染的表面或設備時，要戴手套。一次性手套不用清洗、不能重復使用，不能用于接觸“潔凈”的表面（鍵盤、電話等），也不應當戴著到實驗室外。要備有帶滑石粉的乳膠手套。脫掉手套后，要洗手。3.人員健康和素質要求實驗人員上崗前必須接受嚴格的生物安全培以及該類病毒實驗操作技術的全面培訓.4.預防和治療技工施要求目前尚無特效的病苗。感染后具休治療方案說見衛(wèi)生部（HIV診療方案）由于目前對病毒感染性疾病沒有特效的治療藥物，所以對AIDS也沒有有效的治療辦法。加之，HIV病毒核酸與宿主染色體DNA整合，利用宿主細胞進行復制，給藥物治療帶來了困難。HIV感染的早期治療十分重要。通過治療可減緩免疫功能的衰退。HIV感染者患結核、細菌性肺炎和卡氏肺囊蟲肺炎的危險性增加，進行早期預防十分重要。一、支持療法、盡可能改善AIDS患者的進行性消耗。二、免疫調節(jié)劑治療：（一）白細胞介素2（IL-2）：提高機體對HIV感染細胞的MHC限制的細胞毒性作用，亦提高非MHC限制的自然殺傷細胞（NK）及淋巴因子激活的殺傷細胞（LAK）的活性。（二）粒細胞集落刺激因子（G-CSF）及粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子（GM-CSF）：增加循環(huán)中性粒細胞，提高機體的抗感染能力。（三）靈桿菌素：激活腦下垂體——腎上腺皮質系統(tǒng)，調整機體內部環(huán)境與功能，增強機體對外界環(huán)境變化的適應能力，刺激機體產生體液抗體，使白細胞總數(shù)增加，吞噬功能加強，激活機體防御系統(tǒng)抗御病原微生物及病毒的侵襲。（四）干擾素（IFN）：α-干擾素（IFN-α），對部分病人可略提高CD4+T細胞，40%Kaposis肉瘤患者有瘤體消退；②β-干擾素（IFN-β）：靜脈給藥效果與IFN-α類似，但皮下注射，抗Kaposis肉瘤作用較弱；③γ-干擾素（IFN-γ）提高單核細胞—巨噬細胞活性，抗弓形體等條件性感染可能有一定效果。三、抗病毒制劑：（一）抑制HIV與宿主細胞結合及穿入的藥物：可溶性rsCD4能與HIV結合，占據(jù)CD4結合部位，使HIVgp120不能與CD4T淋巴細胞上的CD4結合，不能穿入感染CD4T淋巴細胞。劑量：rsCD4臨床試驗30mg/日，肌注或靜注，連續(xù)28天。（二）抑制HIV逆轉錄酶（RT）的藥物：通過抑制逆轉錄酶，阻斷HIV復制。效果較好的藥物有：疊氮胸苷、雙脫氧胞苷。5.菌種和實驗室活動管理要求該類病原微生物引起人類嚴重疾病，而且比較容易直接或間接在人與人動物與人動物與動物之間傳播，因此，對毒種的操作都必須在BSL-2實驗室內進行。6.應急預案和措施要求實驗室必須隨時備有足夠應急使用的消毒劑，消毒劑應在有效期內，保證消毒效果。發(fā)生意外事故時，應立即采取相應緊急處理措施，并報告實驗室負責人：（1）血液溢漏、傾翻于工作臺面或實驗地面時，應馬上采取消毒措施；（2）操作人員破損的皮膚或黏膜接觸了待檢樣本或含有HIV的血清，發(fā)生了職業(yè)暴露事故后，應立即用消毒液或清水處理被污染的部分，病原微生物起源盡可能用力擠壓皮膚，排出污染物，或使用洗眼裝置沖洗眼睛黏膜，然后按衛(wèi)生部《醫(yī)護人員艾滋病病毒職業(yè)暴露處理指導原則》認真做好職業(yè)暴露危害評估及處理；（3）未破損的皮膚只需立即消毒清洗；（4）工作人員衣物污染時，應馬上脫去，高壓滅菌后再清洗；（5）如果發(fā)生環(huán)境大面積污染，工作人員應及時離開實驗室；（6）做好意外和事故登記、報告和檢測。每次開啟后首先檢查氣流正常與否。每次實驗完畢后，使用合適的消毒液（防腐蝕）擦拭安全柜內壁。生物安全柜應定期檢查空氣的層流、流速、噪音、泄漏、紫外線強度、高效過濾膜的破損等。若生物安全柜出現(xiàn)正壓，或不能正常工作報警時，應被視為房間有試驗因子污染并對實驗室工作人員危害較大，應立即關閉安全柜電源，停止工作，緩慢撤出雙手離開工作位置，避開從安全柜出來的氣流。在保持房間負壓和加強個人防護的條件下進行消毒處理，撤離實驗室生物安全柜的高效過濾膜阻塞工作無效時，必須請專業(yè)人員在密封狀態(tài)下用福爾馬林熏蒸后再更換，更換下的濾膜應放置于專用塑料袋密封后移出實驗室，送到指定地點銷毀。2.乙型肝炎病毒的生物危害評估報告一、一般生物學特性概述1、起源乙型病毒性肝炎是常見傳染病,在我國廣泛流行,人群感染率高,是危害人民健康最嚴重的常見傳染病之一。

2、基因組及基編碼產物目前，已可從感染HBV病人的血清中及感染肝臟提純的病毒核心中分離出環(huán)狀雙股DNA，從而確定HBV屬DNA病毒。目前，由于克隆化DNA完整核苷酸已經確定，現(xiàn)已證實HBsAg和HBcAg都是由Dane顆粒的DNA所編碼，并且二類基因存在同一DNA分子上。有人比較病毒基因編碼能力和病毒多少，發(fā)現(xiàn)HBVDNA負鏈能編碼全部已知的HBV蛋白質，而其正鏈開放讀碼區(qū)，不能編碼病毒蛋白。HBVDNA負鏈有四個開放區(qū)，分別稱為S、C、P及X，能編碼全部已知的HBV蛋白質。S區(qū)可分為二部分，S基因和前S基因。S基因能編碼主要表面蛋白。S基因之前是一個能編碼163個氨基酸的前S基因，編碼PreS1和PreS2蛋白。C區(qū)基因包括前C基因和C基因，分別編碼HBeAg和HBcAg。P區(qū)最長，約占基因組75%以上，編碼病毒體DNA多聚酶。X區(qū)可能編碼有154個氨基酸的堿性多肽。3、形態(tài)特征乙型肝炎病毒屬嗜肝DNA病毒，有包膜，病毒顆粒為直徑42nm的圓球形。在病毒感染者的外周血中還有直徑22nm的圓形和管形顆粒。這種顆粒為乙型肝炎表面抗原，沒有核酸，無傳染性。1．大球形顆粒：亦稱Dane顆粒，它是一種由一個囊膜和一個含有DNA分子的核衣殼組成的病毒顆粒，直徑約42nm。核衣殼為20面體對稱結構。游離的核衣殼只能在肝細胞核內觀察到。血中Dane顆粒濃度以急性肝炎潛伏期后期為最高，在疾病起始后則迅速下降。Dane顆粒表面含有HBsAg，核心中還含有雙股有缺口的DNA鏈和依賴DNA的DNA多聚酶。目前認為Dane顆粒即完整的HBV。HBVDNA的兩鏈長短不一，長鏈（L）完整，為負鏈，長度恒定，約3200個核苷酸。短鏈（S）為正鏈，長度可變，約為長鏈長度的50～100%，鏈的增生按5′-3′順序進行。在不同分子中短鏈3′端的位置是可變的，而短鏈和長鏈的5′端位置固定點為粘性末端，通過250～300個核苷酸堿基配對，以維持DNA分子的環(huán)狀結構。在粘性末端兩側，兩鏈5′端各有一個由11個bp組成的直接重復序列（DirectrepeatDR）-5′TTCACCTCTCC，該DR位于第1824個核苷酸者稱DR1，位于第1590個核苷酸者稱DR2，在病毒復制中起作用。2．小形球顆粒：直徑約22nm的小球形顆粒是HBV感染后血液中最多見的一種。它由HBsAg，即病毒的囊膜組成?；瘜W組成為脂蛋白，可按其特有的密度與正常血清蛋白部分分離。在此顆粒中未檢出達DNA多聚酶活性。目前認為HBV的小顆粒不是HBV，可能是它感染肝細胞時合成過剩的囊膜而游離于血循環(huán)中。3．管形顆粒：直徑約22nm，長度可在100～700nm之間。實際上它是一串聚合起來的小顆粒，但同樣具有HBsAg的抗原性。4、培養(yǎng)特性5、流行特性我國約10％的人為乙型肝炎HBsAg攜帶者，約有1000萬慢性肝炎病人，全世界共有乙肝病毒攜帶者3.5億，我國占1/3。我國每年新發(fā)病例200萬，其中20~25%為乙型肝炎。二、致病性和感染劑量肝炎的前驅表現(xiàn)為突然厭食(對香煙厭惡也是早期的一個特征性表現(xiàn)),全身不適,惡心,嘔吐和發(fā)熱,有的病人可能突發(fā)蕁麻疹,關節(jié)疼痛,尤其在乙肝病毒感染患者,而感染3~10日后出現(xiàn)尿色加深,隨后出現(xiàn)黃疸(即黃疸期)。全身癥狀在黃疸期可能好轉,盡管黃疸不斷加深,但病人感覺會好一些。肝內膽汁淤積可能發(fā)生,而且通常在發(fā)病的1~2周內黃疸最明顯,然后在2~4周的恢復期逐漸消退。體檢可見不同程度的黃疸,通常肝腫大并觸痛,但邊緣平滑且質軟,15%~20%的病人有輕度的脾腫大。在無并發(fā)癥的患者找不到慢性肝病的體征。HBV還與很多肝臟疾病有關,從亞臨床型的攜帶者到急性肝炎,慢性肝炎,肝硬化,甚至肝細胞肝癌。它還和許多原發(fā)的非肝臟疾病,如多結節(jié)性動脈炎,其他膠原血管疾病,膜性腎小球腎炎,混合性冷球蛋白血癥,幼年型丘疹樣肢皮病有關,但病毒所起的作用還不清楚,但在部分患者體內發(fā)現(xiàn)含有病毒抗原的免疫復合物在組織中沉積。三、感染途徑及潛在暴露結果乙型肝炎病毒通常是經過腸道外途徑傳播,其典型的傳播途徑是輸入污染的血及血制品。HBV的傳染性很強，據(jù)報道，接種0.00004ml含病毒的血液足以使人發(fā)生感染。外科和口腔手術、針剌、使用公用剃刀、牙刷等物品，皮膚微小操作污染含少量病毒的血液，均可成為傳染源。通過呼血吸昆蟲傳染乙型肝炎亦有報道。對獻血者作HBsAg的常規(guī)檢查已使輸血后HBV感染大大降低,吸毒者共用針頭的傳播仍是一個重要問題。腎透析和腫瘤治療單位的患者感染此病毒的風險增加,而且醫(yī)務工作者接觸血液時也易受感染。另外,由于乙型肝炎患者和HBsAg攜帶者的精液、陰道分泌物均可檢出HBsAg，因此，兩性接觸傳播乙型肝炎的可能性是存在的。這種病毒也可在被囚禁者(如精神病患者和罪犯)中擴散,但傳染性遠低于甲型肝炎病毒,而且感染的方式也不清楚。昆蟲叮咬在傳播中的作用仍不清楚。許多散在發(fā)生的急性乙型肝炎病例沒有明確的傳染源。近來有人報告在急性乙型肝炎患者和慢性HBsAg攜帶者唾液標本中檢測到HBsAg及Dane顆粒，因此，HBsAg隨唾液經口傳播的途徑應當重視。孕婦在妊娠后期患急性乙型肝炎，其新生兒容易感染此病。四、環(huán)境中的穩(wěn)定性HBV在環(huán)境中比較穩(wěn)定五、被操作微生物的濃度和劑量的影響樣本檢測不能污染皮膚。六、自然宿主和易感人群慢性乙肝病毒攜帶者是世界范圍的乙肝病毒傳播源,其流行性隨地理環(huán)境和其他因素不同而有很大的差異,北美和北歐＜0.5%,而在遠東地區(qū)則＞10%。母嬰垂直傳播也是擴散的部分原因,這種情況尤見于高發(fā)區(qū)。七、實驗動物研究，實驗室感染和院內感染信息尚未有資料八、實驗活動評估乙型肝炎的臨床表現(xiàn)形式多樣，診斷的依據(jù)除病人癥狀，體征外，須根據(jù)流行病學，實驗室檢查和或肝活檢等手段進行綜合分析，動態(tài)觀察診斷。1、急性型肝炎1）流行病學資料：半年內接受過血及血制品或曾有其他醫(yī)源性感染，生活中的密切接觸，尤其是性接觸。2）癥狀：近期出現(xiàn)的無其他原因可解釋的持續(xù)一周以上的明顯乏力和消化道癥狀。3）體征：肝腫大，伴有觸痛或叩痛；皮膚，鞏膜黃染。4）肝功能檢查：谷丙轉氨酶（ALT）明顯增高，血清膽紅素（Bil）大于17.1μmol/L（大于1mg/dL）和/或尿膽紅素陽性并排除其他疾病所致的黃疸。5）HBV標記物檢查：乙型肝炎表面抗原（HBsAg）陽性，抗HBc-IgM高滴度（1:1000稀釋仍陽性），兩項陽性或僅后者陽性。如患者皮膚，鞏膜無黃染，肝功能檢查血清膽紅素正常，尿膽紅素陰性為急性無黃疸性乙型肝炎，反之為急性黃疸性乙型肝炎。2、慢性遷延型肝炎（簡稱慢遷肝）1）急性乙肝病程超過半年尚未痊愈者：如無急性乙肝史，乙肝病程超過半年未痊愈者；病情較輕不足以診斷慢性活動性肝炎者2）肝功能檢查ALT持續(xù)或間歇異常3）HBV標記物檢查：符合慢性乙肝的病原學指標，抗HBcIgM滴度低于1：32或陰性，血清HBsAg或HBV-DNA任何一項陽性，病程持續(xù)半年以上。4）肝臟病理組織檢查可出現(xiàn)三類情況：慢性小葉性肝炎主要是肝小葉內的炎癥和肝細胞的變性及壞死；慢性間隔性肝炎主要是匯管區(qū)有纖維細胞向小葉內伸展形成間隔；慢性門脈性肝炎門脈區(qū)有少量炎性細胞浸潤，致使門脈區(qū)增大。3、慢性活動性肝炎（簡稱慢活肝）有明顯的肝炎癥狀。1）體征：可有肝病面容，肝掌，蜘蛛痔，脾腫大或黃疸（排除其他原因）。2）肝功能檢查：ALT反復和或持續(xù)升高，血漿蛋白降低，A/G蛋白比例失常，r-球蛋白升高和或膽紅素長期或反復異常。3）HBV標記物檢測：4）肝臟病理組織學特征：臨床上慢活肝輕型與慢遷肝很難區(qū)別，確診須借助病理組織學特征與臨床表現(xiàn)相結合加以鑒別。慢活肝的病理改變以碎屑狀壞死為主要特征，小葉內點狀或灶狀壞死，甚至灶性融合性壞死以及變性和炎癥反應。并依據(jù)壞死程度分為輕型，中型和重型慢活肝。4、重型肝炎1）急性重肝①既往無乙肝病史，以急性黃疸型肝炎起病，并在起病后10天內迅速出現(xiàn)精神神經癥狀（Ⅱ度以上的肝性腦?。?，黃疸迅速加深，嚴重的消化道癥狀。②體征：肝濁音界迅速縮小等。③肝功能異常：特別是凝血酶原時間延長，凝血酶原活動度低于40%。④HBV檢測：符合急性乙肝的病原學指標，但HBsAg可陰性而早期出現(xiàn)抗HBs陽性和抗HBe陽性。⑤肝病理組織特點：有條件者可做肝活檢，急性水腫性重型肝炎表現(xiàn)為嚴重的彌漫性肝細胞腫脹，胞膜明顯，胞漿淡染或近似透明，細胞相互擠壓呈多邊形，小葉結構紊亂，小葉中有少數(shù)大小不等的壞死灶，腫脹的肝細胞間有明顯的毛細膽管淤膽，急性壞死性重型肝炎表現(xiàn)有廣泛的肝細胞壞死，壞死處肝細胞消失，遺留網織支架，肝竇充血，有中性、單核淋巴細胞及大量吞噬細胞浸潤，部分殘留的網狀結構中可見小膽管淤膽。2）亞急性重型肝炎①以急性黃疸型肝炎起病，病程在10天以上8周以內，出現(xiàn)意識障礙（Ⅱ度以上的肝性腦?。?，同時黃疸迅速升高，并有出血傾向。②實驗室檢測：肝功能全面損害，血清膽紅素大于171μmol/L或每天上升大于17.1μmol/L，膽固醇降低，凝血酶原活動度小于40％。③HBV標記物檢查：符合急性乙肝的病原學指標。④肝臟病理組織學特點：可見新舊不等的大片壞死和橋型壞死，網織支架塌陷，有明顯匯管區(qū)集中現(xiàn)象，可見大量增生的膽管和淤膽殘存的肝細胞增生呈團，呈假小葉樣結構。3）慢性重型肝炎，在慢活肝或乙肝后肝硬化基礎上發(fā)生，臨床表現(xiàn)和肝功能變化基本上同亞急性重型肝炎5、淤膽型肝炎1）急性黃疸型肝炎起病，黃疸持續(xù)2～4個月或更長2）臨床表現(xiàn)為肝內梗阻型黃疸，并能除外其他原因所致的肝內外梗阻型黃疸3）實驗室檢查：血清膽紅素升高以直接膽紅素為主，堿性磷酸酶，r-GT，膽固醇明顯升高4）HBV標記物檢查：符合急性乙肝的病原學指標5）肝臟病理組織學特點：必要時可做肝臟活檢，其表現(xiàn)與急性黃疸型肝炎相似，并有毛細膽管內膽栓形成，該細胞內膽色素滯留，肝細胞內出現(xiàn)小點狀顆粒，匯管區(qū)有小膽管擴張及中性白細胞浸潤等。九、重組DNA操作和可能擴大的宿主范圍尚未有相關資料十、預防和治療措施1、預防措施1）健康教育：應向群眾宣傳乙肝知識，認清乙肝病毒傳播途徑的復雜性和乙肝在我國人群中的普遍性，樹立預防為主，自我保護意識。2）執(zhí)行新生兒乙肝疫苗計劃免疫，做好產前檢查，特別是HBsAg伴有HBeAg的雙陽母親新生兒，用乙肝疫苗聯(lián)合乙肝高效價免疫球蛋白注射以阻斷母嬰傳播。3）)獻血員的篩選：獻血員必須做到每次獻血前檢測血清轉氨酶（ALT），以敏感的方法（ELISA）檢測HBsAg，兩項中任何一項陽性均不得獻血。4）防止醫(yī)源性傳播，各級醫(yī)療衛(wèi)生單位，應嚴格實行一人一針一管，各種醫(yī)療衛(wèi)生用品及器械應遵照GB15982有關規(guī)定執(zhí)行。2、慢性HBsAg攜帶者的管理與隨訪，血液HBsAg陽性但無癥狀體征，各項肝功能正常，經半年隨訪無變化者為慢性HBsAg攜帶者。1）慢性HBsAg攜帶者不能獻血，可以照常工作與學習。2）注意個人衛(wèi)生、經期衛(wèi)生和行業(yè)衛(wèi)生，所用剃須刀，修面用具，牙刷，盥洗用品等應單獨使用。3、對病人、接觸者及直接接觸環(huán)境的管理1）疫情監(jiān)測：乙型肝炎是法定傳染病，各地設專人負責監(jiān)測和管理全國肝炎監(jiān)測網工作。要求各地區(qū)醫(yī)院對乙肝病人做出及時準確的診斷和進行病例報告。全國肝炎監(jiān)測網及時掌握疫情數(shù)字按月統(tǒng)計發(fā)病數(shù)，死亡數(shù)，按年統(tǒng)計發(fā)病率，死亡率，對臨床可疑病例作特異性血清學診斷（監(jiān)測抗HBcIgM抗體）確定誤診和漏診率以核實疫情。2）人群中乙肝指標的監(jiān)測：人群中HBsAg、抗HBs和抗HBc的監(jiān)測可反映人群中乙肝病毒流行率及免疫狀況，對指導乙肝防治策略的制定具有重要意義。4、流行期措施乙型肝炎在我國常年散發(fā)，感染人群基數(shù)很大，沒有明顯季節(jié)性，暴發(fā)流行的形勢也不常見，突然的暴發(fā)流行常見于血制品的污染、毒品使用人群，應特別做好血制品管理工作，打擊販毒以阻止暴發(fā)流行，控制流行的首選方法是新生兒免疫接種，降低下一代感染率，最終達到控制流行的目的。5、治療病毒性肝炎目前還缺乏可靠的特效治療方法。各型肝炎的治療原則均以足夠的休息、營養(yǎng)為主，輔以適當藥物，避免飲灑、過勞或損害肝臟藥物。各臨床類型肝炎的治療重點則有所不同。1）急性肝炎以一般及支持療法為主。①休息與隔離應強調早期臥床休息，至癥狀明顯減退，可逐步增加活動。初感染的急性黃疸型肝炎患者，于隔離期（乙型肝炎至HBsAg陰轉，丙型肝炎至HCVRNA陰轉）滿，臨床癥狀消失，血清總膽紅素在17.1μmol/L以下，ALT在正常值2倍以下時可以出院。但出院后仍應休息1~3個月，恢復工作后應定期復查1~3年。②飲食飲食宜清淡，熱量足夠，蛋白質攝入爭取達到每日1~1.5g/kg，適當補充維生素B族和C，進食量過少者可由靜脈補充葡萄糖及維生素C。不強調高糖和低脂肪飲食。③條件具備時，急性丙型肝炎應進行抗病毒治療。早期應用干擾素可取得較高療效。重組白細胞干擾素α1、α2a、α2b，及類淋巴母細胞干擾素αN1的劑量為300萬U，隔日皮下或肌肉注射，3~6個月一療程。療程結束后近期療效（ALT復常，HCVRNA陰轉）可達70%，隨訪6個月后遠期療效約為50%。復發(fā)時可以再用。丙型肝炎患者如加用利巴韋林（ribavirin，病毒唑）口服，800~1000mg/d，可增強療效。2）輕度慢性肝炎除一般及支持療法以外，還需要進行對癥和抗病毒治療。①休息無需絕對臥床休息，宜用動靜結合的療養(yǎng)措施。處于活動期的患者，應以靜養(yǎng)為主；處于靜止期的患者，可從事力所能及的輕工作。癥狀消失，肝功能正常3個月以上者，可恢復其原來工作，但仍需隨訪1~2年。②飲食應適當進食較多的蛋白質，避免過高熱量飲食。以防止肝臟脂肪變性。也不宜進食過多的糖，以免導致糖尿病。③對癥治療包括降低轉氨酶制劑，如聯(lián)苯雙脂、垂盆草、齊墩果酸等，具有非特異性降低ALT的作用。這些降酶藥物雖然可能具有護肝的作用，但停藥后容易產生ALT反跳。故在顯效后應注意逐漸停藥。一般的非特異性護肝藥物，主要包括維生素類（B族、C、E、K等），促進解毒功能藥物如葡醛內脂（肝泰樂）、還原型谷胱甘肽、維丙胺、硫辛酸等，促進能量代謝藥三磷酸腺苷（ATP）、促進蛋白質合成藥物（肝安、水解蛋白等）以改善微循環(huán)藥物（丹參、低分子右旋糖酐等）可作為輔助治療，但宜精簡，避免使用過多藥物。④免疫調節(jié)特異性免疫增強劑可試用特異性抗-HBV免疫RNA。非特異性免疫增強劑可選用胸腺肽、胸腺素等。⑤抗病毒治療：a.干擾素慢性乙型肝炎時干擾素使用的指征為：HBV在活動性復制中；肝炎處于活動期；HBVDNA血濃度低；抗-HBcIgM陽性。使用干擾素治療時劑量應偏大（300萬~600萬U/次），療程應偏長（6個月~1年）。干擾素一般僅能抑制HBV復制，使HBeAg和HBVDNA轉陰，而難以使HBsAg轉陰。慢性丙型肝炎時干擾素使用方法同急性丙型肝炎，但療程應延長至6~12個月，同時加用利巴韋林800~1000mg/d口服。使用干擾素要注意適應癥和禁忌證。有心、肝、腎代嘗功能不全者不宜使用。開始用前應詳細體檢和化驗檢查。療程第一、二周要密切觀察不良反應，以后每月復查肝功能和血常規(guī)。白細胞減少時應給予提高白細胞藥物。肝硬化失代償期為禁忌證。b.核苷類似物拉米夫定（lamivudine，3TC，TM）主要通過抑制HBVDNA逆轉錄酶的活性及抑制共價閉合環(huán)DNA（covalentlyclosedcircleDNA,cccDNA）的合成而抑制HBVDNA的合成。它不抑制線粒體DNA和骨髓，無直接調節(jié)免疫作用，因而基本上無不良反應。口服拉米夫定100mg/d，約2周內平均血清HBVDNA水平下降90%以上。采用斑點雜交法檢測，服藥12周后血清HBVDNA陰轉率可達85%~100%。服藥52周后肝組織學改變明顯優(yōu)于對照組。長期（6個月以上）用藥可使HBVDNA發(fā)生YMDD變異（HBVP基因第741位核苷酸的A→G點突變）而產生耐藥性，出現(xiàn)HBVDNA反跳。停藥后大部分病人在4周內HBVDNA恢復至治療前水平，但再次給藥仍然有效。3）中度和重度慢性肝炎除上述治療以外，應加強護肝治療，包括定期輸注入血清白蛋白和血漿，其劑量和療程視血液內白蛋白濃度而定。免疫調節(jié)藥物也可適當選用，如注射1L-2、自體LAK細胞回輸?shù)取Ｔ谄渌煼ó斨?，可試用豬苓多糖注射液（并用乙型肝炎疫苗）、山豆根注射液、香菇多糖注射液等。十一、人員安全狀況評估制定和完善傳達室染病實驗室生物安全技術操作規(guī)范；加強可桶暴露于該菌污染的或潛在感染性材料的相關業(yè)務人員生物安全知識培訓；切實落實各項管理制度；預防和控制實驗室等渠道造成該菌的感染和傳播，建立實驗室工作人員可穎癥狀報告制度，并保證他們能及時被定點專科醫(yī)院科室收治，以防止實驗室感染擴散到社會。禁忌人群：從事實驗室工作人員必須在身體狀況良好的情況下才能進入實驗室進行工作，出現(xiàn)下列情況之一是不宜進入：患發(fā)熱性疾??；感冒，上呼吸道感染或其他到致抵抗力下降的情況；妊娠，已經在實驗室控制區(qū)域內連續(xù)工作4小時以上左其他原因造成的疲勞狀態(tài)。實驗室工作人員必須持有上崗證進行工作。十二、評估結論根據(jù)《病原微生物生物實驗室生物安全管理條例》中的有關規(guī)定，人間傳播的微生物名錄（待頒布）乙型肝炎病毒屬于三類，BSL-2。防護對策包括避免暴露和暴露后管理。避免職業(yè)性血液及體液暴露是實驗室預防HBV傳播的主要措施，然而，乙型肝炎疫苗免疫接種和血液攜帶病原暴露后的管理是完整的預防感染計劃的重要內容，也是工作場所安全的重要組成部分。醫(yī)療機構應讓員工知曉關于即時報告、評估、咨詢、處理和跟蹤置醫(yī)務人員于血液攜帶病原感染危險的職業(yè)暴露的書面方案。①避免暴露措施實驗室管理者應建立關于去除或減少員工職業(yè)暴露的書面的暴露控制計劃。暴露控制計劃應包括暴露確定（exposuredetermination）、貫徹應遵守的操作方法（methodsofcompliance）的日程和措施、乙型肝炎疫苗免疫接種和暴露后評估與跟蹤、讓員工了解危險、暴露記錄等等。該計劃應每個員工人手一冊，應與法規(guī)一致。該計劃應每年修訂和更新，以適應新的、變化的影響職業(yè)暴露的工作任務、程序和崗位。應對實驗室員工進行崗前安全培訓和安全再教育，提高員工安全操作的意識。在醫(yī)療服務中執(zhí)行普遍預防原則。普遍預防是一種感染控制的方法，它將所有人的血液和一些體液當作具有潛在HBV傳染性的標本來處理。實驗室管理方應提供安全的工作環(huán)境，改善設施以減少職業(yè)暴露。如逐步采取無針頭系統(tǒng)（needlelesssystems）和工程化防護銳器損傷的銳器（sharpswithengineeredsharpsinjuryprotections）以減少針刺及銳器損傷和暴露。實驗室員工應嚴格按照應遵守的操作方法操作，處理臨床標本時采取普遍預防措施。②暴露后管理管理者應建立包括對員工暴露后的跟蹤、事故報告要求的暴露控制計劃。提供暴露后處理的醫(yī)生應24小時在崗。應儲備乙型肝炎免疫球蛋白（hepatitisBimmuneglobulin,HBIG）、乙型肝炎疫苗以便及時施與。負責提供暴露后管理的醫(yī)生應熟悉評估和處理方案。應教育實驗室員工，一旦職業(yè)暴露發(fā)生，應立即報告。尤其是因為在暴露后盡能可快地施與HBIG、乙型肝炎疫苗對大多數(shù)暴露有效。處于職業(yè)暴露于血液攜帶病原危險的實驗室員工應熟悉暴露后管理的原則，應將該原則作為定崗和崗位繼續(xù)培訓內容的一部分。1、暴露點（exposuresite）的處理傷口和接觸血液或體液的皮膚位點應以肥皂和水洗滌；黏膜應以水沖洗。沒有證據(jù)支持使用抗菌劑處理傷口或擠壓傷口以排出液體可進一步減少血液攜帶病原傳播的危險；當然，也不禁止使用抗菌劑。不推薦使用腐蝕劑（如漂白粉）處理傷口，也不推薦在傷口處注射抗菌劑和消毒劑。2、暴露報告如果職業(yè)暴露發(fā)生，暴露情況和暴露后管理應記錄在個人暴露的機密醫(yī)學記錄（通常為醫(yī)療機構為此目的專門設計的表格）里。并且，管理者應遵守國家和地方的要求，記錄和報告職業(yè)損傷和暴露。3、暴露和暴露源（exposuresource）的評估①暴露評估應基于暴露物質類型、暴露途徑和暴露嚴重程度評估暴露傳播的可能性。血液、含有可見血液的體液或其它潛在感染性體液（包括精液、生殖道分泌物、腦脊液、關節(jié)腔液、胸腹水、心包液和羊水）和組織是具有血液攜帶病毒感染性的。通過穿皮損傷或黏膜接觸暴露于這些液體或組織使實驗室員工處于血液攜帶病毒傳播的危險，需要進一步臨床評估。而且，在研究實驗室和產業(yè)實驗室，直接接觸（如沒穿戴個人防護裝備或個人防護裝備沒有有效地保護皮膚和黏膜）濃縮病毒是要求臨床評估的暴露。對于皮膚暴露，僅暴露于以上列出的體液和皮膚完整性受損（如皮炎、擦傷或開放性傷口）時需進行跟蹤。②暴露源評估應對導致職業(yè)暴露的暴露源個體的血液或體液進行評估，以確定其HBV的感染狀況。a.暴露時的可利用的醫(yī)學記錄信息（如實驗室測試結果、入院診斷或以前的病史）或來自暴露源個體的信息，可確證或排除血液攜帶病毒感染。b.如果暴露源的HBV感染狀況不清楚，應通知事件的暴露源個體來進行血液攜帶病毒感染的血清學測試。測試暴露源個體，應取得暴露源個體的知情同意和遵守適用的國家和地方法規(guī)。應給予感染HBV的暴露源個體適當?shù)淖稍兎蘸吞幚?。任何時候都應保護暴露源個體的醫(yī)密。確定暴露源個體HBV感染狀況的測試應盡可能快地執(zhí)行，應采用最合適的測定方法，快速地獲取結果。在作出暴露后管理的決定以前，沒必要作陽性反應的確證試驗，但在通知暴露源個體以前應完成確證試驗測試c.如果暴露源是未知的或不能測試的，應根據(jù)流行病學評估暴露發(fā)生的具體情況信息，確定傳播HBV的可能性。確定的情形和暴露類型可提示危險的高低；應對感染源物質來源的普通人群（機構或社團）的HBV流行情況作重點考慮。例如發(fā)生在靜脈注射毒品高流行區(qū)的暴露或戒毒治療機構的廢棄針頭暴露比發(fā)生在老年人家庭護理的暴露的傳播危險高得多。不管是否知道暴露源個體，不推薦對涉及暴露的針頭或其它銳器進行測試。這種測試的可靠性和結果解釋尚值得懷疑，并且測試對銳器處理者具有潛在危險。d.當評估暴露源個體的可能的HBV感染情況時，應考慮的信息包括：實驗室信息[如HBV測試結果、免疫學檢查和肝臟功能（如ALT）]、臨床癥狀和最近3個月的HBV可能暴露史。4、HBV的暴露后預防與管理對穿皮或黏膜血液暴露，作出提供預防決定時應考慮幾個因素。這些因素包括：暴露源的HBsAg狀態(tài)、暴露者的乙型肝炎疫苗接種情況和疫苗反應狀態(tài)。這種暴露通常涉及進行過乙型肝炎免疫的員工。對未免疫接種的員工的血液或體液暴露，應啟動乙型肝炎疫苗接種。應對暴露者的乙型肝炎疫苗接種情況和疫苗反應狀態(tài)（如果知道）進行評估。根據(jù)暴露源的HBsAg狀態(tài)及暴露者的乙型肝炎疫苗接種情況和疫苗反應狀態(tài)作出的穿皮或黏膜血液暴露的推薦預防方案見表1。表1暴露于HBV的PEP推薦方案暴露者*的免疫接種和抗體反應狀況處理暴露源HBsAg陽性暴露源HBsAg陰性暴露源不明確或未檢測未免疫接種HBIG§×1和啟動乙型肝炎疫苗接種啟動乙型肝炎疫苗接種啟動乙型肝炎疫苗接種以前已免疫接種有反應者**不需處理不需處理不需處理無反應者#HBIG×1和啟動再次免疫接種或HBIG×2§§不需處理如果知道感染源高度危險，當作暴露源HBsAg陽性處理抗體反應未知測試暴露者的抗-HBs，如果足夠**，不需處理；如果不足#，施與HBIG×1和疫苗增強不需處理測試暴露者的抗-HBs，如果足夠，不需處理；如果不足，施與疫苗增強和在1～2個月后再檢測抗體滴度*以前感染過HBV，對再感染有免疫力的暴露者不需PEP。§乙型肝炎免疫球蛋白，劑量0.06ml/kg，肌肉注射。**有反應者為有充足水平的HBsAg血清抗體的暴露者（如抗-HBs>10mIU/mL）。#無反應者為對免疫接種反應不足的暴露者（如抗-HBs<10mIU/mL）?！臁鞂ξ赐瓿?次疫苗接種中第二次接種的無反應者，選擇單劑量HBIG和再啟動免疫接種；對以前完成第二次接種的無反應者，選擇兩劑量HBIG。當有應用HBIG的指征時，應在暴露后盡可能快地施與（最好在24小時內）。在暴露7天后施與HBIG的有效性不明確。當有應用乙型肝炎疫苗的指征時，也應在暴露后盡可能快地施與（最好在24小時內）；并且可與HBIG于分開的注射位點同時施與。通常在三角肌處接種疫苗。對處于免疫接種過程中但未完成免疫接種的暴露者，應按期完成接種。對第一次免疫接種無反應的暴露于HBsAg陽性血液或體液的員工，應施與單劑量HBIG，并且盡可能快地再次啟動乙型肝炎疫苗接種；另一可選擇的方法為，施與兩劑量HBIG，一劑量在暴露后盡可能快地施與，另一劑量在1月后施與。對未完成3次疫苗接種中第二次接種的無反應者，選擇單劑量HBIG和再啟動免疫接種；對以前完成第二次接種的無反應者，選擇兩劑量HBIG。乙型肝炎疫苗是安全的，接種乙型肝炎疫苗的最常見副反應為注射點疼痛和輕度至中度發(fā)熱。接種組和安慰劑接受組副反應的發(fā)生率沒有差別。少見的副反應有脫發(fā)、過敏反應（發(fā)生率為1/600000）。施與HBIG后，嚴重副反應的發(fā)生率非常低?？砂l(fā)生注射點局部疼痛和觸痛、風疹和血管水腫。盡管過敏反應非常罕見，但有注射人免疫球蛋白制品后發(fā)生的報道。對免疫球蛋白有過敏反應史的暴露者不應接受HBIG。妊娠和哺乳期婦女暴露者都可施與乙型肝炎疫苗接種和HBIG。3.甲肝抗體樣本檢測的風險評估一、一般生物學特性概述1、起源1973年Feinstone應用免疫電鏡技術從急性肝炎患者糞便中發(fā)現(xiàn)。由于其理化性狀與腸道病毒相似，1982年國際病毒命名委員會將其分為小RNA病毒科腸道病毒屬72型。但由于有些特性并不與腸道病毒相同，如HAV在細胞內增殖遲緩，不引起CPE等，故近年又被單列為小RNA病毒科的肝病毒屬。2、基因組及基編碼產物單股正鏈RNA，約7.4kb,分5’非編碼區(qū)、編碼區(qū)和3’非編碼區(qū)。5’非編碼區(qū)起到識別和鏈接宿主核糖體的作用。5’末端的第735個堿基處開始有一個單一的開放讀碼框架，編碼一種多聚蛋白，并被病毒蛋白酶水解成非結構蛋白和結構蛋白。結構蛋白是一個大分子蛋白質，斷裂成VP1、VP2、VP3、VP4。VP1是衣殼蛋白，誘發(fā)中和抗體。人類HAV為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅶ型，主要是Ⅰ、Ⅲ型，僅個別毒株為Ⅱ和Ⅶ型。HAV僅為一個血清型。與其他肝炎病毒無交叉反應。3、形態(tài)特征圓球狀，直徑約27nm，無包膜，呈20面對稱體，有飽滿和空心兩種顆粒。病毒顆粒以五聚體前體進行裝配。12個五聚體以一種濃度依賴形式裝配成空的衣殼，不含RNA核心，具抗原性但無感染性。實心的HAV顆粒具傳染性。4、培養(yǎng)特性在細胞培養(yǎng)中HAV不能使細胞產生病變，電鏡檢查也未能在細胞中找到典型的病毒顆粒。但HAV的CR326株（為狨猴適應株）可在FRhK6猴腎細胞株中連續(xù)傳代，也可將病人糞便接種非洲綠猴腎細胞中連續(xù)傳代，免疫熒光法可在細胞質中發(fā)現(xiàn)HAV抗原。我國近年發(fā)現(xiàn)HAV可在人胚腎細胞MERN株中增殖。5、流行特性主要經過糞-口途徑傳播，可造成暴發(fā)或散發(fā)流行，潛伏期短，發(fā)病較急，一般不轉為慢性，亦無慢性攜帶者，預后良好。二、致病性和感染劑量關于甲型肝炎的發(fā)病機制研究較少，尚未完全闡明。經口感染HAV后，發(fā)病前有短暫病毒血癥階段，然后再定位于肝臟。既往認為HAV對肝細胞有直接損害作用。近年研究表明：實驗感染HAV的動物肝細胞及HAV體外細胞培養(yǎng)時均不發(fā)生細胞病變；患者血清CD+8細胞亞群增高，致敏淋巴細胞對HAV感染的肝細胞顯示細胞中毒性；肝內炎癥反應明顯等。根據(jù)研究結果，目前認為，其發(fā)病機制傾向于以宿主免疫反應為主。發(fā)病早期，可能由于HAV在肝細胞中大量增殖及CD+8細胞毒性T細胞殺傷作用共同造成肝細胞損害，病后期可能以免疫病理損害為主。甲型肝炎病毒在肝細胞內復制的過程中僅引起肝細胸輕微損害，在機體出現(xiàn)一系列免疫應答(包括細胞免疫及體液免疫）后，肝臟出現(xiàn)明顯病變，表現(xiàn)為肝細胞壞死和炎癥反應。HAV通過被機體的免疫反應所清除，因此，一般不發(fā)展為慢性肝炎，肝硬化或病毒性攜帶狀態(tài)。其致病機制除病毒直接作用外，肝臟免疫病理損傷也起作用。病后產生抗HAV的IgG抗體，且可維持多年，對病毒再感染有免疫力。甲型肝炎的預后較好。三、感染途徑及潛在暴露結果致病性與免疫性傳染源為患者，主要通過糞—口途徑傳播。HAV隨糞便排出體外，污染水源、食物和海產品等，造成散發(fā)流行或大流行，潛伏期15～50天。病毒侵入人體后，在局部繁殖，入血形成病毒血癥，再進入肝內，引起甲型肝炎。四、環(huán)境中的穩(wěn)定性HAV在體外抵抗力較強，乙醚pH3、56°C30min不能使它滅活。在-20℃條件下保存數(shù)年，其傳染性不變，但在100°C5min可殺死HAV，甲醛或氯處理可使它滅活。五、被操作微生物的濃度和劑量的影響在進行HAV抗體檢測時要防止血清污染。六、自然宿主和易感人群人類對各型肝炎普遍易感，各種年齡均可發(fā)病。甲型肝炎感染后機體可產生較穩(wěn)固的免疫力，在本病的高發(fā)地區(qū)，成年人血中普遍存在甲型肝炎抗體，發(fā)病者以兒童居多。⑴職業(yè)易感人群：處理污物或污水的工人；食品行業(yè)從業(yè)人員，如果他們接觸那些沒有包裝的食品，而這些食品是沒有經過烹調的，他們就有可能受到感染。如果工作人員感染了HAV，他們就會污染食物，從而有可能造成在使用這些食品的人中發(fā)生爆發(fā)流行；與兒童接觸的工作人員。如在托兒所、幼兒園、學校等工作的人員；醫(yī)務工作者；實驗室從事檢驗的人員；生活在低傳染地區(qū)到中度或高度流行地區(qū)旅行、出差的商人、外交人員、軍人等。⑵個體易感者：生活在低傳染地區(qū)到中度或高度流行地區(qū)旅行的個人；與易感HAV接觸的人（集體、監(jiān)獄、多人口家庭）；兒童-主要病毒宿主，是兒童-成人傳播方式的傳染源；患慢性肝病的人，他們對HAV十分敏感；多次輸血的人；靜脈吸毒者；男性同性戀者。七、實驗動物研究，實驗室感染和院內感染信息HAV的易感動物較多：猩猩、美洲絨猴、獼猴、恒河猴等眾多靈長類動物對HAV敏感。我國學者毛江森以HAV感染浙江紅面猴，余昌晏以HAV感染廣西樹猴均獲成功。八、實驗活動評估1.樣品采集HAV抗體檢測主要采集血液樣品，樣品采集的工作人員應掌握相關專業(yè)知識和操作技能，能有效地防止病原微生物擴散和感染。樣品采集過程中，工作人員必須清楚意識到待檢樣品的潛在感染性，操作時須戴手套，避免刺傷手。針筒內的血要小心緩慢地沿管壁注入試管內，防止血液外濺。盛有血液的試管必須及時加蓋，并放置于穩(wěn)妥的試管架上，防止傾側。試管在注入血液前應認真檢查試管底、管壁有否裂紋和破損。使用后的真空采血器或普通注射器及止血棉球都含有待檢樣本的血液，必須立即放入內含消毒液的容器內，按有關要求消毒一定期限后，作為醫(yī)療廢棄物處理，或放置于生物廢棄袋中，在密封的情況下送去作高壓滅菌處理。2、樣品轉移院內標本運送過程中，一般致病微生物可能通過經口、經粘膜或破損皮膚等途徑導致傳染：容器破裂可造成標本泄露污染環(huán)境和運送人員或其他人員；容器傾倒可造成標本潑灑而致環(huán)境和人員污染。容器表面污染：標本采集時或發(fā)生泄露、潑灑時可導致容器外表面污染而具有潛在危害。3、樣品接收、開啟實驗室接收樣本時檢查盛裝樣品的試管有無破損或滲出的情況，如發(fā)現(xiàn)溢漏應立即將存留的樣品移出，對被污染的試管、試管架和盛器均需作嚴格消毒。4、樣品分離離心時可能噴射出氣溶膠粒子，特別是在離心結束前的制動過程中以及在打開試管蓋帽等時均可產生大量具有潛在感染性的氣溶膠顆粒；玻璃離心管可因為破碎造成標本泄漏；離心管內標本盛裝過滿可造成泄漏。操作完畢后，所有的吸管、Tip吸頭、含血球的試管等廢棄物應置于規(guī)定的已含適當消毒液的容器內，進行焚燒。消毒應備有合適的消毒液，以隨時清除濺出物及溢出物。5、樣品檢測HAV抗體篩查檢測（1）手工操作：①加樣、混勻用移液器將分離好的