TCSBM 0050.4-2024 創(chuàng)面修復(fù)材料有效性評(píng)價(jià) 第4部分：體外微血管形成試驗(yàn)評(píng)價(jià)方法

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T/CSBM團(tuán) 體 標(biāo) 準(zhǔn)T/CSBM0050.4—2024創(chuàng)面修復(fù)材料有效性評(píng)價(jià)4EffectivenessevaluationofwoundrepairmaterialsPart3:Invitromicroangiogenesisevaluationmethod2024-05-14發(fā)布 2024-10-01實(shí)施中國生物材料學(xué)會(huì) 發(fā)布T/CSBM0050.4T/CSBM0050.4—2024PAGE\*ROMANPAGE\*ROMANIII目 次前言 II引言 III范圍 1規(guī)范性用文件 1術(shù)語和義 1樣品制備 1血管形試驗(yàn) 1結(jié)果分析 3附錄A（資性） 體外微管形成驗(yàn)評(píng)價(jià)例 4前 言本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)工作導(dǎo)則 第部分：標(biāo)準(zhǔn)化件的結(jié)和起草規(guī)》的規(guī)起草。本文件是T/CSBM0050—2024《創(chuàng)面修復(fù)材料有效性評(píng)價(jià)》的第4部分。包括以下部分：——第1部分：水溶性材料體外評(píng)價(jià)方法；——第2部分：水不溶性材料體外浸提液評(píng)價(jià)方法；——第3部分：刺激因子屏蔽評(píng)價(jià)方法；——第4部分：體外微血管形成試驗(yàn)評(píng)價(jià)方法；——第5部分：體外細(xì)胞粘附和增殖直接接觸評(píng)價(jià)法；——第6部分：動(dòng)物食管創(chuàng)面模型促修復(fù)愈合評(píng)價(jià)方法；——第7部分：動(dòng)物胃創(chuàng)面模型促修復(fù)愈合評(píng)價(jià)方法；——第8部分：動(dòng)物腸道創(chuàng)面模型促修復(fù)愈合評(píng)價(jià)方法；——第9部分：動(dòng)物皮膚創(chuàng)面模型促修復(fù)愈合質(zhì)量評(píng)價(jià)方法。本文件由中國生物材料學(xué)會(huì)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。本文件起草單位：杭州英健生物科技有限公司、中國食品藥品檢定研究院、四川大學(xué)。毛鑫禮。引 言T/CSBM0050.4T/CSBM0050.4—2024PAGEPAGE1創(chuàng)面修復(fù)材料有效性評(píng)價(jià)第4部分：體外微血管形成試驗(yàn)評(píng)價(jià)方法范圍GB/T16886.12—2023 醫(yī)療械生物評(píng)價(jià) 第部分：樣制備與照樣品T/CSBM0050.1—2024 創(chuàng)面復(fù)材料效性價(jià) 第1部分：溶性材體外評(píng)方法T/CSBM0050.2—2024 創(chuàng)面復(fù)材料效性價(jià) 第2部分：不溶性料體外提液評(píng)方法術(shù)語和定義T/CSBM0050.1—2024界定的術(shù)語和定義適用于本文件。血管形成 angiogenesis血管內(nèi)皮增生、延伸而形成新血管的過程。樣品制備水溶性材料水溶性材料采用的濃度按照T/CSBM0050.1—2024中第4章規(guī)定的方法確定。浸提液制備按照T/CSBM0050.2—2024中第4章規(guī)定的方法制備。原理EA.HY926器具試驗(yàn)器具如下：酶標(biāo)儀；電子天平；液氮罐；T2524基質(zhì)膠；ImageJ試劑和耗材試驗(yàn)試劑和耗材如下MEM10％（PBS）；0.25％細(xì)胞系EA.HY926細(xì)胞。樣品制備試驗(yàn)樣品按照4.1、4.2制備?？瞻讓?duì)照MEM，37120r/min24h。試驗(yàn)步驟EA.HY926細(xì)胞復(fù)蘇將EA.HY926細(xì)胞凍存管于37MEM1000r/min離心3minMEMT25375％CO2h細(xì)胞傳代當(dāng)細(xì)胞密度約為80％時(shí)，吸去培養(yǎng)瓶中原有的培養(yǎng)基，使用PBS輕洗兩次，加入1mL～2mL0.25％胰蛋白酶消化3min～5min，MEM000r/min33mL～mLMEM375％CO21：4，2天～3細(xì)胞凍存000r/min3LmL，凍存密度為1×105/mL～1×106/mL4-2030min，然后-80小管形成試驗(yàn)步驟如下：42420200LEP管上方，手心不應(yīng)接觸EP管；415min3730使其凝固；待細(xì)胞融合至801×105/mL241mL，33h6h、9h6h并拍照，ImageJ結(jié)果分析A0.05則認(rèn)為該材料具有促進(jìn)血管生成的作用，否則材料沒有促進(jìn)血管生成的作用。附 錄 A（資料性）體外微血管形成試驗(yàn)評(píng)價(jià)實(shí)例器具試驗(yàn)器具如下：酶標(biāo)儀；電子天平；液氮罐；T2524基質(zhì)膠；ImageJ試劑和耗材試驗(yàn)試劑和耗材如下：MEM10％（PBS）；0.25％細(xì)胞系EA.HY926細(xì)胞，外購，自帶細(xì)胞STR鑒定報(bào)告。品制備浸提液制備以消化道創(chuàng)面保護(hù)膠為試樣，在無菌狀態(tài)下，按以下條件制備浸提液：a) 浸提溫度：37±1浸提時(shí)間：24h±2浸提條件：120r/minGB/T16886.12—20231空白對(duì)照MEM，37120r/min24h±2h。試驗(yàn)步驟EA.HY926按5.4.1進(jìn)行。按5.4.2進(jìn)行。各組細(xì)胞分別加入處理后的樣品重懸，隨后接種到鋪板基質(zhì)膠的24孔板中培養(yǎng)9h，觀察各組血管；3h6h100A.1。說明：A——空白對(duì)照組培養(yǎng)3h；B——空白對(duì)照組培養(yǎng)6h；C——空白對(duì)照組培養(yǎng)9h。a——試驗(yàn)組培養(yǎng)3