人乳頭瘤病毒專家講座

人乳頭瘤病毒（HPV）HPV(人類乳頭瘤病毒)是以人類為唯一宿主一個(gè)DNA病毒，現(xiàn)在已經(jīng)明確，HPV與宮頸癌發(fā)生高度相關(guān)。醫(yī)學(xué)數(shù)據(jù)表明，60％～70％女性感染過HPV病毒，99.8％宮頸癌患者中能夠檢測(cè)到HPV，而HPV陰性者幾乎不會(huì)發(fā)生宮頸癌。除此之外，98％以上宮頸疾病患者體內(nèi)也存在HPV。人乳頭瘤病毒專家講座第1頁

當(dāng)前有100余種型別HPV,約35種型別與生殖道感染相關(guān)，大約20種型別與癌癥相關(guān)。與宮頸癌相關(guān)高危型HPV有13種：16，18，31，33，35，39，45，51，52，56，58，59，68。與宮頸癌相關(guān)低危型別有：6，11，40，42，43，44。人乳頭瘤病毒專家講座第2頁HPV基因分型檢測(cè)意義?宮頸病變及宮頸癌篩查，經(jīng)過分型檢測(cè)對(duì)患者個(gè)體化評(píng)定，預(yù)測(cè)宮頸病變發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)度,決定篩查間隔、治療方案制訂。?未明確診療意義非經(jīng)典鱗狀細(xì)胞和腺細(xì)胞（AS-CUS/AGUS）和宮頸上皮內(nèi)低度病變（LSIL）分流，提升診療可信度，降低漏疹風(fēng)險(xiǎn)。?宮頸病變治療后追綜和隨訪人乳頭瘤病毒專家講座第3頁HPV陽性還可提醒生殖器贅生物為尖銳濕疣可能性。HPV感染與宮頸炎發(fā)生有親密關(guān)系。HPV病毒也可引發(fā)宮頸糜爛。人乳頭瘤病毒專家講座第4頁宮頸癌篩查方案1.基本篩查方案醋酸或碘染色后肉眼觀察陽性陰性陰道鏡活檢+病理檢驗(yàn)對(duì)應(yīng)治療定時(shí)隨訪人乳頭瘤病毒專家講座第5頁2.普通篩查方案HPV檢測(cè)+傳統(tǒng)巴氏涂片HPV（-）Cyto≤ASC-USHPV（+）Cyto≤ASC-USHPV（-）Cyto≥ASC-HHPV（+）Cyto≥ASC-H隨訪（次/3-5年隨訪（次/年陰道鏡檢驗(yàn)/多點(diǎn)活檢+ECC對(duì)應(yīng)治療（-）（+）人乳頭瘤病毒專家講座第6頁3.最正確篩查方案HPV檢測(cè)+液基細(xì)胞學(xué)檢驗(yàn)HPV（-）Cyto≤ASC-USHPV（+）Cyto≤ASC-USHPV（-）Cyto≥ASC-HHPV（+）Cyto≥ASC-H隨訪（次/3-5年隨訪（次/年陰道鏡檢驗(yàn)/多點(diǎn)活檢+ECC對(duì)應(yīng)治療（+）（-）人乳頭瘤病毒專家講座第7頁HPV基因分型檢測(cè)方法我科當(dāng)前采取分子生物學(xué)前沿技術(shù)—多重PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）先進(jìn)技術(shù)，經(jīng)過對(duì)HPV-DNA基因分型，可快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)常見23種HPV亞型，包含5種低危型（HPV6，11，42，43，44）和18種高危型（HPV16，18，31，33，52等），覆蓋了現(xiàn)有已知與人生殖道感染相關(guān)絕大部分HPV亞型。人乳頭瘤病毒專家講座第8頁HPV基因分型芯片技術(shù)特點(diǎn)HPV基因芯片分型檢測(cè)，利用L區(qū)相對(duì)保守區(qū)引物對(duì)待測(cè)樣品中可能HPV亞型進(jìn)行廣譜擴(kuò)增，再將產(chǎn)物與固定在膜芯片上亞型特異性探針進(jìn)行雜交，顯色并判讀結(jié)果。此技術(shù)靈敏、準(zhǔn)確、高效、快速，并確定詳細(xì)亞型。人乳頭瘤病毒專家講座第9頁GC-HPV檢測(cè)試驗(yàn)流程人乳頭瘤病毒專家講座第10頁HPV檢測(cè)目標(biāo)物：宮頸脫落細(xì)胞、疣體組織、組織切片、活體組織人乳頭瘤病毒專家講座第11頁陰道鏡下“活檢”組織采集

經(jīng)過陰道鏡觀察宮頸表面血管病變，并用宮頸活檢鉗或?qū)m頸管刮勺從宮頸上提取可疑組織，裝入有保留液洗脫管中，旋緊管蓋，做好標(biāo)識(shí)

人乳頭瘤病毒專家講座第12頁疣體樣本采集用棉拭子在疣體表面剮蹭4-6遍，也能夠把經(jīng)過手術(shù)切除下來疣體直接作為檢測(cè)樣本。人乳頭瘤病毒專家講座第13頁專用宮頸脫落細(xì)胞采集器人乳頭瘤病毒專家講座第14頁步驟1.標(biāo)本采集擴(kuò)陰器暴露宮頸口，用棉拭子將分泌物擦去將宮頸刷伸入宮頸口，單向輕柔轉(zhuǎn)動(dòng)4-5周將其放入有保留液洗脫管中旋緊管蓋，做好標(biāo)識(shí)將宮頸刷折斷，刷頭留在管中人乳頭瘤病毒專家講座第15頁步驟二：提取HPVDNA13000rpm10分鐘，棄上清

將標(biāo)本轉(zhuǎn)移到1.5mL微量離心管中加50

L裂解液充分懸浮沉淀100℃加熱10分鐘

13000rpm離心10分鐘，保留上清待用人乳頭瘤病毒專家講座第16頁步驟三：PCR擴(kuò)增50℃ 15min95℃ 10min 94℃ 30s42℃ 90s40cycles72℃ 30s72℃ 5min

人乳頭瘤病毒專家講座第17頁

51℃洗脫15min步驟四：雜交與洗脫

設(shè)定雜交儀溫度，無需看管，于51℃雜交1小時(shí)

PCR產(chǎn)物加入雜交緩沖液中,沸水浴變性10min人乳頭瘤病毒專家講座第18頁步驟五顯色與結(jié)果判讀POD孵育POD洗滌顯色前準(zhǔn)備配制顯色液,顯色人乳頭瘤病毒專家講座第19頁檢測(cè)結(jié)果：膜條顯色直接提醒感染HPV亞型，包含高危及低危亞型。HPV6HPV11HPV16HPV18HPV31HPV33HPV35HPV39HPV42HPV43HPV45HPV51HPV52HPV53HPV56HPV58HPV44HPV59HPV66HPV68HPV73HPV83HPVMM4PC人乳頭瘤病毒專家講座第20頁適用人群：三年以上性行為或21歲以上有性行為女性宮頸病變及宮頸癌患者治療后隨訪尖銳濕疣患者咽喉部HPV感染造成疣體增生嬰幼兒人乳頭瘤病毒專家講座第21頁受檢前須知：月經(jīng)來潮后10-18天為最正確檢驗(yàn)時(shí)間檢驗(yàn)前三天內(nèi)不要用避孕藥膏等陰道內(nèi)用藥品及陰道沖洗檢驗(yàn)前24小時(shí)最好不要有性生活人乳頭瘤病毒專家講座第22頁HPV檢驗(yàn)匯報(bào)單將分為高危及低危兩組匯報(bào)結(jié)果，并注明兩組中詳細(xì)陽性亞型，未注明表示為陰性。例：HPV-DNA分型匯報(bào)單高危組陽性（+）16，33

低危組陰性（-）人乳頭瘤病毒專家講座第23頁結(jié)果分析HPV-DNA陽性：

20％－30％HPV病毒感染會(huì)引發(fā)疾病，假如HPV-DNA陽性，并伴隨宮頸病變，應(yīng)采取深入醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)，以明確病變性質(zhì)。60％－70％人僅是HPV陽性而未見宮頸病變，提醒即使發(fā)生HPV感染但并沒有造成宮頸病變或?qū)m頸癌，只需每年進(jìn)行一次HPV病毒篩查及相關(guān)其它檢驗(yàn)即可。HPV-DNA陰性：假如30歲以上女性HPV檢測(cè)結(jié)果為陰性，同時(shí)細(xì)胞學(xué)檢驗(yàn)提醒沒有發(fā)生任何病變，3－5年內(nèi)都無需再做類似檢驗(yàn)。人乳頭瘤病毒專家講座第24頁HPV檢測(cè)后處理HPV基因分型檢測(cè)陰性常規(guī)篩查陽性低危高危無癥狀一年后復(fù)查疣體組織對(duì)應(yīng)治療（冷凍、激光）液基細(xì)胞學(xué)檢驗(yàn)（TCT）正常一年后復(fù)查HPV和TCT≤AS-CUS一年后復(fù)查HPV和TCT或陰道鏡檢驗(yàn)≥ASC-H陰道鏡活檢/多點(diǎn)活檢+ECC6個(gè)月后復(fù)查HPV和TCT（-）（+）對(duì)應(yīng)治療人乳頭瘤病毒專家講座第25頁標(biāo)本搜集時(shí)間及結(jié)果匯報(bào)標(biāo)本可于天天要求工作時(shí)間（8：00AM~5：00PM）送檢驗(yàn)科，未及時(shí)送檢可于4℃冰箱保留。在臨床送檢標(biāo)本量滿足天天檢測(cè)前提下，當(dāng)日8：30后送檢標(biāo)本，次日下午發(fā)出匯報(bào)，若標(biāo)本量較少，則集中在每七天三、五進(jìn)行檢測(cè)。人乳頭瘤病毒專家講座第26頁HPV感染后教育信息HPV檢測(cè)陽性只說明一個(gè)病毒感染，而不是疾病。