SNT 1961.11-2013 出口食品過(guò)敏原成分檢測(cè) 第11部分：實(shí)時(shí)熒光PCR方法檢測(cè)麩質(zhì)成分_第1頁(yè)
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出口食品過(guò)敏原成分檢測(cè)第11部分：實(shí)時(shí)熒光PCR方法2013-03-01發(fā)布2013-09-16實(shí)施I 本部分為SN/T1961的第11部分。1出口食品過(guò)敏原成分檢測(cè)第11部分：實(shí)時(shí)熒光PCR方法檢測(cè)麩質(zhì)成分(Gliadin)、黑麥管家基因(Secl)、燕麥管家基因(Avenin)的特異性檢測(cè)引物和探針進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光PCR2名稱(chēng)序列(5'-3’)目的基因內(nèi)參照5’端引物內(nèi)參照3’端引物內(nèi)參照探針AATTTGCGCGCCTGCTGCCTTCFAM-CCGTTTCTCAGGCTCCCTCTCCGGAA真核生物18SrRNA基因AACAGCTAAACCCATGCAAGFAM-TCCTCCAGCAGCAGTGCAGCCCT大麥Hordein基因小麥探針FAM-CATGCCGACACACATCAAGGTTGAC小麥Gliadin基因黑麥3'端引物黑麥探針AAAAGAACAATCATATCCGCAFAM-TCACACCAACCATTTCCCACACCGC黑麥Secl基因AGCCCTTGTAGTGTTCTTAGAFAM-CCCACCGCAGTGCCCTGTCGC燕麥Avenin基因10%鹽酸調(diào)pH至8.0,121℃,高壓滅菌20min,備用。5.1070%乙醇。36.4冰箱：2℃~8℃,-20℃。c=A?6×N×50………………47.3.2實(shí)時(shí)熒光PCR反應(yīng)參數(shù)50℃/2min,95℃/10min;45個(gè)循環(huán)為95℃/15s,58℃/1min。a)如Ct值≤35.0,則判定為被檢樣品陽(yáng)性.擴(kuò)增靶標(biāo)序列參見(jiàn)附錄A。c)如35.0<Ct值<40.0,則重復(fù)一次。如再次擴(kuò)增后Ct值仍為<40.0,則判定被檢樣品陽(yáng)性；檢測(cè)過(guò)程中防止交叉污染的措施按照GB/T27403中的規(guī)定執(zhí)行。5(資料性附錄)過(guò)敏原麩質(zhì)成分的基因擴(kuò)增靶標(biāo)參考序列A.1過(guò)敏原大麥成分hordein基因擴(kuò)增靶標(biāo)參考序列(150bp)

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