CHAP2 醫(yī)藥微生物生物技術課件

CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1第一節(jié)人體正常菌群與致病菌第二節(jié)微生物藥物的主要類型第三節(jié)現(xiàn)代微生物藥物篩選方法第四節(jié)現(xiàn)代篩選模型CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1

我國:

豆腐上的霉菌治療瘡癤等疾病

歐洲、南美:

發(fā)霉面包治療潰瘍、腸道感染

我國傳統(tǒng)藥典：東漢《神農本草經》到明朝的《本草綱目》列舉民間藥用真菌，如靈芝、木耳、豬苓、馬勃、雷丸、冬蟲夏草

茯苓馬勃CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1民間傳說將靈芝稱為“仙草”，認為靈芝是采天地千年之正氣，集日月之精華，收藏龍臥虛之地靈，吸九天之星光，歷經千萬年才生成的?！渡褶r本草經》中說：“山川云雨，四時五行，陰陽晝夜之精，以生五色神芝?！盋HAP2醫(yī)藥微生物生物技術1神農嘗百草CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1

巴斯德：

微生物生物技術在醫(yī)藥中理論研究始于巴斯德，研究減毒或無毒疫苗，開創(chuàng)了人類戰(zhàn)勝傳染病的新紀元，奠定了現(xiàn)代免疫學基礎。梅契尼科夫（Metchnikoff）：利用乳酸桿菌抑制人腸道腐生菌

Fleming：1929年第一個發(fā)現(xiàn)青霉素

微生物代謝產物作為藥物開發(fā)始于20世紀40年代，青霉素的純化與工業(yè)化生產，開始了抗生素的發(fā)酵工業(yè)

Waksman：1945年發(fā)現(xiàn)鏈霉素（真正抗生素時代）CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1近年來發(fā)現(xiàn)平菇、草菇、金針菇、蘑菇等均含有抗癌成分，對腫瘤有防治作用。從真菌中尋找抗癌藥物已為世界矚目。猴頭菇有抗癌、治胃潰瘍和十二指腸潰瘍作用。用猴頭菌制成的的猴菇菌片可用來治療消化道腫瘤。豬苓用于治療肺癌，可以減緩癥狀。銀耳多糖、靈芝多糖等均為藥用真菌制成的新藥。

CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1蘑菇、銀耳、木耳、靈芝...含有各種真菌多糖，能增加免疫作用CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1第一節(jié)人體正常菌群與致病菌在正常人體皮膚、粘膜及外界相通的各種腔道（如口腔、鼻咽腔、腸道和泌尿道）等部位，長期寄居著微生物群，一般對人體無害,與宿主之間互相依存、互相制約，形成一個能進行物質、能量等交流的動態(tài)平衡的微生態(tài)系統(tǒng)，常稱之為正常菌群包括細菌、真菌、螺旋體、支原體等。CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1

人體各部位常見的正常菌群皮膚：表皮葡萄球菌、類白喉桿菌、綠膿桿菌、恥垢桿菌等口腔：鏈球菌（甲型或乙型）、乳酸桿菌、螺旋體、梭形桿菌、白色念球菌、（真菌）表皮葡萄球菌、肺炎球菌、奈瑟氏球菌、類白喉桿菌等胃：正常一般無菌腸道：類桿菌、雙歧桿菌、大腸桿菌、厭氧性鏈球菌、糞鏈球菌、葡萄球菌、白色念球菌、乳酸桿菌、變形桿菌、破傷風桿菌、產氣莢膜桿菌等CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1鼻咽腔：甲型鏈球菌、奈氏球菌、肺炎球菌、流感桿菌、乙型鏈球菌、葡萄球菌、綠膿桿菌、大腸桿菌、變形桿菌等眼結膜：皮表葡萄球菌、結膜干燥桿菌、類白喉桿菌等陰道：乳酸桿菌、白色念球菌、類白喉桿菌、大腸桿菌等尿道：表皮葡萄球菌、類白喉桿菌、恥垢桿菌等CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術11.內源性感染正常菌群的生理作用：

生物拮抗作用（形成一層自然菌膜，一種非特異性的保護膜,可促機體抵抗致病微生物的侵襲及定植）

刺激免疫應答合成維生素（如核黃素、生物素、葉酸、吡哆醇及維生素K等，供人體吸收利用）CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1機會感染（內源性感染）：正常菌群與宿主平衡被打破，正常菌群中的一部分微生物能引起宿主患病。CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1內源性感染原因1）正常菌群突破上皮屏障例如皮膚粘膜受傷（特別是大面積燒傷）所導致的金黃色葡萄球菌感染、闌尾穿孔或腸道手術后的脆弱擬桿菌引起的腹膜炎2）外源性生物體干擾宿主的正常功能人工心臟瓣膜、人造關節(jié)以及導管的使用有利于細菌聚集并形成生物膜，細菌生物膜對吞噬細胞的吞噬作用及血清的殺菌作用有抵抗性，宿主難于清除這些微生物CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術13）由于正常菌群寄居部位的改變，發(fā)生了定位轉移，也可引起疾病。例如大腸桿菌進入腹腔或泌尿道，可引起腹膜炎、泌尿道感染4）使用抗腫瘤藥物或放射治療所致的免疫抑制腫瘤藥物或放射線殺滅快速生長細胞，包括免疫細胞CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術15）外源性病原體感染導致宿主免疫功能損害

HIV病毒、流感病毒（破壞呼吸道上皮細胞，削弱上皮細胞消滅細菌能力，抑制吞噬細胞作用，嚴重會引起肺炎或是心肺衰竭）

6）不合理使用抗生素CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術12.外源性感染工作人員帶菌者、患者與環(huán)境貯源的病原菌通過接觸或其源性傳播引起的感染.致病菌：能夠在具有完整特異性和非特異性防疫系統(tǒng)的個體中引起疾病的細菌。如霍亂弧菌、結核分枝桿菌、志賀菌CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1第二節(jié)微生物藥物的主要類型微生物在代謝過程中，會產生多種多樣的代謝產物。根據(jù)代謝產物與微生物生長繁殖的關系，可以分為：

初級代謝產物次級代謝產物轉化產物另外，微生物本身作為菌體、酶CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術11）初級代謝產物：指微生物通過代謝活動所產生的、自身生長和繁殖所必需的物質，如氨基酸、核苷酸等。2）次級代謝產物：指以初級代謝產物為原料、微生物生長到一定階段才產生的化學結構十分復雜、對該微生物無明顯生理功能，或并非是微生物生長和繁殖所必需的物質，如抗生素、激素、胞外多糖等。代謝障礙影響生命3）轉化產物微生物對外源物質（類固醇、烷烴、芳烴、雜環(huán)化合物）進行加工（特定位置引入羥基，還原雙鍵等）后的產物CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1抗生素、毒素、激素色素細胞內或外環(huán)境中生長和繁殖非必需物質一定階段才合成氨基酸、核苷酸、多糖、維生素細胞內生長和繁殖的必需物質不停地合成次級代謝產物初級代謝產物實例存在部位功能產生CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1一、微生物菌體醫(yī)藥概述1疫苗概念2第一代疫苗(傳統(tǒng)疫苗)3第二代疫苗（基因工程疫苗）4第三代疫苗(核酸疫苗)5疫苗舉例6免疫增強劑7微生物制劑8利用標記的微生物細胞檢測腫瘤CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1

英國醫(yī)生Jenner在1796年首創(chuàng)

接種牛痘預防天花。

據(jù)記載，宋朝（1000s）就接種

“人痘”預防天花。

1870s,巴斯德和柯赫系統(tǒng)地用

弱毒疫菌接種,預防羊炭疽病，

雞霍亂，狂犬病等傳染病。

1978年世界衛(wèi)生組織宣布，人

類消滅了天花。CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術11796年首例接種牛痘預防天花返回CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術11疫苗概念

典型的疫苗主要是滅活的或減毒的致病物質病原物經培養(yǎng)、純化后，或者被滅活，或者降低其毒性，但要保持其免疫能力使接受者獲得免疫力，免受疾病的侵染CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術12第一代疫苗

(傳統(tǒng)疫苗)利用Pasteur建立的減毒、弱化或者滅活病原體做疫苗的技術，人們發(fā)明了許許多多的人用傳染病疫苗。用病原體減毒或者弱化所得到的疫苗稱為第一代疫苗。CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1第一代疫苗的不足之處具有不安全性和對某些傳染病的使用效果不理想。所謂的不安全性是指疫苗生產過程中必須大量繁殖病原體，對工作人員是個嚴重的威脅；并且在使用中偶見因減毒或者滅活不徹底而導致被免疫者感染的情況。

CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術13第二代疫苗（基因工程疫苗）1）概念和特點是用基因工程方法或分子克隆技術，分離出病原的保護性抗原基因，將其轉入原核或真核系統(tǒng)使表達出該病原的保護性抗原，制成疫苗，或者將病原的毒力相關基因刪除掉，使成為不帶毒力相關基因的基因缺失苗特點：無毒、無感染能力具有較強的免疫原性。

CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術12）亞單位疫苗（subunitvaccine）：用病原微生物有效抗原成分制成的疫苗稱為亞單位疫苗.CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1外殼結合蛋白在膜外引發(fā)免疫反應的抗原決定簇CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1亞單位疫苗（單純皰疹病毒疫苗）病毒粒子含有33種以上蛋白，一半為糖蛋白；基因組為雙鏈線狀DNA，152.5Kb；引起性病，腦炎，也是一種致癌病毒；滅活或減毒疫苗都有危險；

CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1制備亞單位疫苗的關鍵：鑒定起主要作用的抗原HSV-1的gpD蛋白是抗原成分分離出HSV-1的gpD基因完整的gpD基因編碼的蛋白是結合在哺乳動物細胞膜上的膜結合蛋白，通過基因改造，去除了編碼跨膜結構域的序列，將改造過的基因轉移到中國倉鼠細胞中正確表達，最后將表達蛋白制成亞單位疫苗。CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術13）肽疫苗（口蹄疫疫苗）概念：引起免疫反應的病原微生物各部分并不都起相同的作用，往往只有部分結構物質起決定作用，稱抗原決定簇，類似于抗原決定簇的小肽的疫苗稱肽疫苗。免疫反應：位于病毒衣殼外且可與抗體結合的蛋白肽疫苗制備：合成口蹄疫病毒VP1的不同結構域對不同結構域進行檢測CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1VP1蛋白

C端三個肽段：

141~160，151~160，200~213N端三個肽段：

9~24，17~32，25~41

分別連接到載體蛋白上注入小豚鼠實驗CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1141~160肽段具有抗原活性CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1利用小肽作為疫苗的限制因素

1）充當抗原決定簇的肽段不能太長且要連續(xù)

2）抗原決定簇氨基酸分布在不同的區(qū)域

3）肽段的構象必須與完整病毒上抗原決定簇上的構象一致

4）單一的肽段要有足夠強的抗原性CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1目前正在正在研制的或者已經上市的基因工程疫苗還有：皰疹病毒疫苗、腮腺炎病毒疫苗、流行性出血熱病毒疫苗、風疹病毒疫苗、輪狀病毒疫苗等。

CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術14第三代疫苗(核酸疫苗)

所謂核酸疫苗是指含有編碼蛋白質基因序列的質粒載體，經肌肉注射或者微彈轟擊等方法導入體內，通過宿主細胞表達抗原蛋白，誘導宿主產生對該抗原蛋白的免疫應答，以達到預防和治療疾病的目的。CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1Wolff等1993發(fā)現(xiàn)將DNA直接注射入小鼠骨骼肌細胞后可以引起特異的免疫反應；將流感病毒核蛋白抗原基因克隆到表達載體，直接注入小鼠骨骼肌肉細胞；丙型肝炎病毒的核心蛋白基因免疫動物；CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1DNA疫苗的優(yōu)越性

1）DNA比蛋白質更穩(wěn)定；

2）DNA的分離、純化比蛋白質要容易的多；

3）任何DNA片段都可以插入質粒中制成疫苗，同一個質?？梢匀菁{一個以上的抗原基因；

4）DNA疫苗對于一些目前難以用常規(guī)方法防治的疾病具有重要意義；

5）用于一些疑難病的治療。CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1現(xiàn)已廣泛使用的疫苗

活病毒疫苗

病毒亞單位疫苗脊髓灰質炎乙型肝炎流行性腮腺炎滅活細菌疫苗麻疹百日咳風疹傷寒黃熱病滅活細菌毒素（類毒素）

滅活病毒疫苗白喉流感破傷風CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術15疫苗舉例

病毒性疾病疫苗

細菌性疾病疫苗

CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術15.1病毒性疾病疫苗肝炎病毒疫苗艾滋病病毒疫苗其它病毒性疾病疫苗CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1補充：HepatitisBandHepatitisBVaccineCHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1

什么是乙型肝炎？

簡單地說，就是由乙型肝炎病毒（HBV）引起的肝臟炎性損害。它是是目前世界上流傳最廣泛、危害最嚴重的一種傳染病。CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1乙肝形勢不容樂觀??！全世界現(xiàn)有3.5億慢性乙肝病毒（HBV）攜帶者，占世界人口的5％；其中，亞洲和非洲HBV攜帶率為8％～15％HBV攜帶者中50％～70％病毒復制活躍，為慢性乙肝CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1大部分乙型肝炎在急性期經治后能痊愈，很多病例病程遷延或轉為慢性，其中一部分可發(fā)展為肝炎后肝硬化變甚至肝癌；極少數(shù)病例病程發(fā)展迅猛，肝細胞出現(xiàn)大片壞死，成為重型肝炎；另有一些感染者則成為無癥狀的病毒攜帶者。乙肝的潛在危害CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1慢性乙肝病人肝硬化發(fā)生率為2％～20％，代償性肝硬化發(fā)展成失代償性肝硬化為20％～23％，發(fā)展成肝癌的占6％～15％。

據(jù)調查推算，中國的慢性乙肝病人中，約25％～40％最終將死于肝硬化或合并肝癌。HBV攜帶者最終死于相關肝病的危險性，男性為50％，女性為15％。這與男性的病毒不易被清除及吸煙、飲酒等有關。乙肝的潛在危害CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1我國乙肝病情分布金字塔CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1兩方面問題

HBV——罪魁禍首Hepatitis離我們有多遠？傳播途徑醫(yī)學鑒定——明明白白疫苗——防患于未然

……CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1乙肝病毒

HBV1970年Dane等在電鏡下鑒定了Dane顆粒，即HBV（theHepatitisBVirus）顆粒。CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1乙肝病毒

HBVHBV是一種小型DNA病毒，基因組由單個環(huán)形DNA分子構成；球形顆粒，直徑42nm；包膜為脂質構成（含乙肝表面抗原HBsAg），內為20面體核蛋白殼（含乙肝核心抗原，HBcAg）。CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1aconceptualpicture

s=surfaceproteinsc=coreproteinD=ViralDNAp=DNAPolymerase乙肝病毒

HBVCHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1通常，大多數(shù)成人的免疫系統(tǒng)都能夠抵抗B型肝炎病毒，并毫無問題地“復原”。但是也有許多成人無法抵抗B型肝炎病毒，以及大多數(shù)受到傳染的嬰兒和兒童因為嬰兒和兒童的免疫系統(tǒng)尚未健全，無法識別“敵人”,反而把“敵人”當成體內的“自己人”,長期“和平共處”HBV進入人體CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1HBV侵染肝細胞

當HBV進入人體后（如果不幸讓它繞過了人體免疫系統(tǒng)），它將首先攻擊肝細胞。

乙肝病毒不直接引起肝細胞病變，只是利用肝細胞攝取養(yǎng)料賴以生存，并在肝細胞內復制。CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1

FromwithinthecellnucleusthehepatitisBDNAcausesthelivercelltoproduce:(viamessengerRNA)surface(HBs)proteins,thecore(HBc)protein,DNApolymerase,theHBe、HBxprotein,possiblyotherasyetundetectedproteinsandenzymes.HBVreplicationCHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1

DNApolymerasecausesthelivercelltomakecopiesofhepatitisBDNA.Viatheaboveprocess,versionsofthehepatitisBvirusareconstructedbythelivercell.Thesecopiesofthevirusarereleasedfromthelivercellmembraneintothebloodstreamandfromtherecaninfectotherlivercellsandthusreplicateeffectively.

HBV侵染肝細胞CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1目前尚不是很清楚基本上是這樣：乙型肝炎病人的肝臟受損,并不是乙型肝炎病毒在肝細胞內繁殖的直接結果，而是機體的免疫反應造成的。。乙型肝炎病毒感染人體后,可激發(fā)機體產生對乙型肝炎病毒的各種細胞免疫反應和體液免疫反應,并激發(fā)自身免疫反應引起免疫調節(jié)功能紊亂。機體的這些免疫反應,可清除已感染病毒的肝細胞,又可引起肝細胞的損傷,造成不同類型的病理變化及臨床轉歸。

乙型肝炎致病機理CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1乙肝傳播途徑？B型肝炎病毒通過接觸被感染者的血液或體液傳播，和導致艾滋病的人類免疫缺陷病毒(HIV)的途徑相同。然而，HBV比HIV感染性強50到100倍。

CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1乙肝病毒主要傳播途徑：血源性傳播；醫(yī)源性傳播；胎源性傳播是病毒傳染，而不是遺傳!生活密切接觸性傳播乙肝病毒的傳播CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1在世界范圍內，大多數(shù)傳染發(fā)生于從被感染的母親到孩子，一家人中兒童和兒童的接觸，以及重用未殺菌的針和耳咽管。但2003年的一項調查表明：隨著社會的發(fā)展、醫(yī)療技術條件的改進、人們生活方式的變遷，通過生活密切接觸傳播已越來越成為乙肝的主要傳播方式。乙肝病毒的傳播CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1但乙肝不會通過水和食物以及通常的接觸傳播(不過不能合用剪刀，指甲鉗，牙刷等)所以對乙肝攜帶者的歧視是由于人們對乙肝知識的匱乏導致的偏見造成的。乙肝病毒的傳播CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1乙肝兩對半（乙肝三系）HBV－DNA定量檢測肝功能化驗

……醫(yī)學化驗CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1醫(yī)學鑒定HepatitisBDNA&HepatitisBDNApolymerase.

血液中最先能被檢驗出來（感染一周內）；但其檢測比較復雜且昂貴所以一般檢測HBsAg、 HBsAb、HBeAg 、HBeAb、 HBcAbCHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1乙肝三系CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1乙肝三系乙型肝表面抗原HBsAg就是過去人們經常說的“澳抗”，指HBV的外膜蛋白。

（“澳抗”是“澳大利亞抗原”的簡稱，因為它最早是在澳大利亞發(fā)現(xiàn)的，所以稱為“澳抗”。）表面抗原在所有體液中都能檢出，但只有血、陰道分泌物、經血、精液顯出有傳染性；CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1我國漢族乙肝病毒表面抗原陽性率達15％左右，藏族高達26%，維吾爾族最低，約2%左右，總陽性率達10%左右。HBsAg陽性是HBV感染的標志。（但目前有提出了反對意見，認為,很多時候乙肝病毒被清除后，乙肝病毒的部分基因整合到了肝細胞的基因內，構成了“合資企業(yè)”。HBsag作為“合資企業(yè)”的一種產品持續(xù)出現(xiàn)在血液中。因為整合的病毒基因常是缺損的，往往只能復制出HBsag） （摘自2004年4月1日一塌糊涂） ～～～～@_@??乙肝三系CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1乙型肝炎表面抗體即抗-HBs，是由HBsAg誘導產生，為保護性抗體。在HBV感染恢復期或注射乙肝疫苗后出現(xiàn)，它的出現(xiàn)標志對HBV感染產生特異性免疫乙肝三系CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1乙肝病毒e抗原/e抗體顧名思義，乙肝病毒e抗原中“e”是英文

early(早期)的意思，e抗原是乙肝病毒復制的標志，它可以判定傳染性的大小乙肝病毒e抗原見于病毒感染早期，表示病毒復制活躍。感染后期或機體建立免疫反應則乙肝病毒e抗體陽性，病毒復制受抑制；或免疫壓力過大，乙肝病毒基因前c和c區(qū)基因變異，乙肝病毒e抗原免疫原性改變則常規(guī)ELISA試劑不能檢測出來，但機體產生無保護性的抗體而測出乙肝病毒e抗體。乙肝三系CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1核心抗體(抗HBc)

核心抗體是人體感染了乙肝病毒以后，最早出現(xiàn)的一種抗體。但是，它對人體沒有保護作用。陽性時，如果加號多(醫(yī)學上的說法是“滴度高”)，提示病毒正在復制，傳染性也強。乙肝三系CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1“大三陽”和“小三陽”？“大三陽”表示“二對半”檢測結果為乙肝病毒表面抗原、乙肝病毒E抗原、乙肝病毒核心抗體三項陽性，

即HBsAg（+）、HBeAg（+）、HBcAb（+）“小三陽”表示“二對半”檢測結果為乙肝病毒表面抗原、乙肝病毒E抗體、乙肝病毒核心抗體三項陽性，

即HBsAg（+）、HBeAb（+）、HBcAb（+）CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1“大三陽”、“小三陽”區(qū)別僅限于HBeAg(+)/HBeAb(+)

“大三陽”,表示機體內病毒復制活躍，見于急性病毒性肝炎、慢性病毒性肝炎和無癥狀乙肝病毒感染者,傳染性很強“小三陽”表示：非變異株時機體內病毒復制不活躍；變異株產生時病毒毒力增加（即機體免疫反應性下降）甚至誘導肝細胞癌變，見于急性乙型肝炎（后期，病毒復制受抑，病情趨于好較，近期可能痊愈）、慢性肝炎（或病毒復制減少或停止，病情減輕或穩(wěn)定；病毒變異，毒力增加，病情反復，進展較快，甚至發(fā)展為肝硬化和肝癌癥或重癥肝炎）。但傳染性較弱“大三陽”和“小三陽”？CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1這種方法借助了乙肝病毒抗原和抗體的測定，并不能代表病毒本身，也無法知道病毒的多少。乙肝三系檢驗的缺點CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1（附表）乙肝兩對半結果模式及其意義乙肝兩對半結果模式及其意義編號HBsAgHBsAbHBeAgHBeAbHBcAb頻度臨床意義1+-+-+常見急肝，慢性活動期，有傳染性2+--++常見恢復期，弱傳染性3---++常見恢復期，弱傳染性4+---+常見急肝，慢性sAg攜帶者5----+常見急性窗口期，既往感染過6-+-++常見康復期CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1編號HBsAgHBsAbHBeAgHBeAbHBcAb頻度臨床意義7-+--+常見既往感染過，仍有免疫力8-+---常見康復期，主動被動免疫后9-----常見未感染過HBV10+----少見急性早期，慢性sAg攜帶者11+-+--少見早期感染，強傳染性12+--+-少見恢復期，慢性sAg攜帶者易陰轉（附表）乙肝兩對半結果模式及其意義CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1編號HBsAgHBsAbHBeAgHBeAbHBcAb頻度臨床意義13+-+++少見急性感染，趨于恢復，慢性攜帶者14++---少見不同亞型HBV二次感染，亞臨床型HBV15+++-+少見不同HBsAg亞型感染，感染早期16++-++少見感染早期17++--+少見感染早期18--+--少見非典型性急性感染，提示NANB型肝炎（附表）乙肝兩對半結果模式及其意義CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1編號HBsAgHBsAbHBeAgHBeAbHBcAb頻度臨床意義19--+-+少見非典型性急性感染，提示NANB肝炎20-++--少見非典型感染21-++-+少見非典型感染22--+++少見急性感染中期23---+-少見HBV感染恢復期24-+-+-少見HBV感染恢復期（附表）乙肝兩對半結果模式及其意義CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1乙肝病毒核心中的基因組是由乙肝病毒脫氧核糖核酸分子（HBV－DNA）及脫氧核糖核酸聚合酶（簡稱DNA聚合酶，或DNA-P）組成。乙肝病毒DNA和DNA聚合酶主宰乙肝病毒復制，即無性繁殖。所以它們陽性就表示有乙肝病毒顆粒存在，并且復制活躍，傳染性強HBV－DNA定量檢測CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1近年，新研制成功的熒光定量PCR的出現(xiàn)為乙肝病毒的檢測診斷提供了新手段大量臨床標本測定結果證明，其特異性為100％，靈敏度可達.01fg(10--12mg),相當于2.5個乙肝病毒顆粒.HBV－DNA定量檢測CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1肝功能檢查

肝功能檢查的種類很多，反映肝功能的試驗已達700余種，新的試驗還在不斷地發(fā)展和建立。CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1主要包括四大類：反映肝細胞損傷的試驗反映肝臟排泄功能的試驗反映肝臟儲備功能的實驗反映肝臟間質變化的試驗

肝功能檢查CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1遠離乙肝最安全有效的方法就是注射乙肝疫苗，一般來說，凡沒有感染過乙肝病毒者都應該注射乙肝疫苗。乙肝疫苗有兩種類型：一種是血源性疫苗乙肝血源疫苗是采用乙肝表面抗原攜帶者的血清或血漿作為原料，經過化學濃縮，提純其中的表面抗原，而制成的乙肝疫苗，這種疫苗已停止使用。另一種是基因工程疫苗?，F(xiàn)在我國均采用基因工程酵母菌來制造的乙肝疫苗稱為基因工程乙肝疫苗。CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1大致是在6個月的時段內注射（皮下）3次疫苗結束時作一次血液乙肝三系的檢查。因為只有注射疫苗后能產生足量抗體的人，才有預防作用。約有90~95%人會因此而獲得免疫能力乙肝疫苗CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術11981年Edman等人成功地克隆了乙肝表面抗原（HbsAg）基因并獲得大量的表面抗原；

1982年，乙肝疫苗首次在美國面市1986年美國FDA首先批準了Merk公司基因工程乙肝疫苗（酵母表達系統(tǒng)）上市。乙肝疫苗CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1目前用基因工程生產乙肝疫苗主要有兩種方法：一是美國和日本等國采用的，將重組DNA導入酵母菌，由酵母菌產生乙肝抗原而制成的疫苗二是以色列等國采用的，將重組DNA導入倉鼠細胞，由倉鼠細胞生產疫苗。

CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1注射后產生的保護性抗體不是永久性的，一般只能維持3～5年

（這個時間眾說紛紜，WHO，世界衛(wèi)生組織認為至少有15年）以后必須在醫(yī)生指導下再加強注射。最好是定期檢查（1年）CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1甲型肝炎和丙型肝炎是兩種經由消化道傳染的流行較廣的病毒性肝炎。國外已有甲型肝炎病毒滅活疫苗面市。我國使用的減毒疫苗也取得了很好的效果。

甲型肝與丙型肝炎CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1丙型肝炎病毒感染后，大部分人轉為慢性肝炎，其中部分病人可發(fā)展為肝硬化甚至肝癌。70年代：非甲非乙性肝炎，1989：更名為丙肝。目前尚無特效治療藥物或預防方法。丙型肝炎病毒目前已知至少存在6種不同基因的病毒，各型之間的異源性達到25%~30%，且存在著高突變率，尤其是包膜區(qū)的多變性，給丙肝疫苗的研究帶來了重重困難。一個病人可能帶有15－20種一個丙肝亞種的變種，可能有150個不同的亞種。這也是至今仍未見丙肝疫苗上市的原因之一。CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1艾滋病病毒疫苗

艾滋病（AIDS）全稱是人類獲得性免疫缺陷綜合癥，是由人類免疫缺陷病毒（HIV）的感染引起的。1980－1981年發(fā)現(xiàn)，1983－1984年定性疫苗研究集中于基因工程苗。CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1其它病毒性疾病疫苗脊髓灰質炎疫苗

狂犬病疫苗

流感病毒疫苗CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術15.2細菌性疾病疫苗霍亂弧菌疫苗麻風桿菌疫苗

幽門螺旋桿菌疫苗

CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1霍亂弧菌疫苗（活體重組疫苗）應用基因工程方法：

非致病性微生物攜帶并表達某種特定病原物的抗原決定簇基因，產生免疫原性；修飾或去掉致病微生物毒性基因，但仍保持抗原性CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1霍亂弧菌（Vibriocholerae）產生腸毒素:由745個氨基酸組成的蛋白質,它包括五個B亞基和一個A亞基

A亞基：具有ADP糖基化的活性能激活腺苷環(huán)化酶兩個功能域，A1肽和A2肽

A1肽包含毒性區(qū)，含194個氨基酸

B亞基:無毒

CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1麻風桿菌疫苗麻風是由麻風分枝干菌引起的慢性傳染病，這是1873年由Hansen最早確定的人類第一個致病菌，是一種毀容的疾病，在世界范圍內曾是一種常見的病，甚至《圣經》里也曾提到過麻風病。病變在皮膚和周圍神經。臨床表現(xiàn)為麻木性皮膚損害、神經粗大，嚴重者甚至肢端殘廢。但由于這種細菌仍然未能在體外培養(yǎng)，因而嚴重地阻礙了對麻風病的診斷、免疫學和治療學方面的研究，也嚴重阻礙了疫苗的開發(fā)。CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1幽門螺旋桿菌疫苗幽門螺旋桿菌是慢性胃炎和消化道潰瘍的主要病原體，慢性胃炎可發(fā)展為粘膜萎縮、異型增生，最終導致胃癌。目前在幽門螺桿菌疫苗研制方面已取得了進展，相信不遠的將來幽門螺桿菌疫苗將成為預防和控制幽門螺桿菌感染的有效手段。CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1

微生物及其產物

卡介苗(BCG)、胞壁酰二肽(MDP)、短小棒狀桿菌、溶血性鏈球菌Su(OK-432)等微生物組分或其代謝產物可作為免疫佐劑而發(fā)揮治療作用。

免疫佐劑：本身不具有抗原性，但同抗原一起或預先注射到機體內能增強免疫原性或改變免疫反應類型。

植物多糖

多種植物多糖（如云芝多糖、香菇多糖等）可促進淋巴細胞增殖并產生細胞因子，可用于抗腫瘤和感染的輔助治療。6.免疫增強劑CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1中草藥

多種中草藥（如人參、黃芪、枸杞、刺五加、淫羊藿等）可明顯增強機體免疫功能。

淫羊藿，補腎壯陽

CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1東北刺五加果能增加睡眠，對心悸、健忘、乏力等癥狀，刺五加的作用與人參相似。刺五加有扶正固本、養(yǎng)血安神、滋補強壯之功能，主要藥效成分含水量多種糖甙、丁香甙、香豆精甙、多糖及果酸，是治療體虛、咳嗽、高血壓、神經衰弱等癥的良藥。古代曾有“寧要五加一把，不要金玉滿車”之說，對刺五加給予極高的評價。CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1細胞因子

由于細胞因子生物學效應的多樣性和復雜性，使其臨床應用受到限制。

化學合成藥物

具代表性的是左旋咪唑(levomisole)，對免疫功能低下者具明顯免疫增強作用。

CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1（1）濟南假單胞菌菌苗使巨噬細胞功能增強并產生特異性抗體，誘導機體產生干擾素（IFN）及腫瘤壞死因子（TNF），是一種免疫佐劑。免疫佐劑：本身不具有抗原性，但同抗原一起或預先注射到機體內能增強免疫原性或改變免疫反應類型。采用胸腔注射方式還可治療惡性胸腔積液。CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1（2）溶血性鏈球菌制劑（國外稱OK-432或Picibanil，國內稱沙培林或鏈球菌-722）非特異性免疫增強劑,它由溶血性鏈球菌經青霉素處理后凍干而成，為干菌制劑。

CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1非特異性免疫機體的兩道防線：①皮膚和粘膜；②體液中的殺菌物質（如溶菌酶破壞細胞壁）和吞噬細胞。非特異性免疫：機體的兩道防線是生來就有的天然防御功能，對多種病原生物都有一定程度的防御作用，沒有特殊的針對性，所以叫非特異性免疫。具有種的特異性，如人對雞霍亂弧菌天然不感染，雞和蛙對炭疽菌不感染。CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1特異性免疫特異性免疫：又稱獲得免疫，是經后天感染(病愈或無癥狀的感染)或人工預防接種(菌苗、疫苗、類毒素、免疫球蛋白等)而使機體獲得抵抗感染能力。一般是在微生物等抗原物質刺激后才形成的(免疫球蛋白、免疫淋巴細胞)，并能與該抗原起特異性反應。CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1OK-432廣泛用于臨床：腹腔內注入OK-432后可迅速使中性粒細胞進入腹腔，隨后腹水中的巨噬細胞和T淋巴細胞明顯增加，從而殺傷腫瘤細胞及減少腹水產生。治療胃癌、肝癌、膽管癌、大腸癌、上腭癌、喉癌、舌癌、甲狀腺癌等CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1

惡性腹水的治療免疫治療沙培林(OK-432)干擾素腫瘤壞死因子白介素-2(IL-2)短小棒狀桿菌CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1惡性腹水的治療實驗沙培林(OK-432)

Torisu等用該制劑治療134例胃腸源性惡性腹水(10KE，1次/周腹腔注射，療程6周)，結果有76例腹水完全消退，8例腹水明顯減少，腹圍減小10cm以上，總有效率達62.7%(84/134)，且患者生存期(平均10.2個月)也較50例對照組(平均3.1個月)顯著延長，其中對腹水細胞學檢查呈陽性的患者更有效。提示OK-432可能是治療惡性腹水的有效制劑。CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1OK-432注射治療淋巴管瘤兩次沙培林注射治療后，腫瘤完全消失沙培林注射治療，抽出暗血性淋巴液頸部囊性淋巴管瘤CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1進行5次沙培林注射治療后，腫瘤明顯消退，取得顯效位于頸部、口底合并舌體的巨大海綿狀和混合性淋巴管瘤CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1（3）短小棒狀桿菌

為短小棒狀桿菌（Corynbacterium

parvum）的死菌懸液，也是一種強的非特異性免疫增強劑,主要通過激活巨噬細胞，使其吞噬活性加強，還可激活NK細胞，增加干擾素產生，協(xié)同化療藥物如環(huán)磷酰胺的抗癌作用。但是在一定條件下抑制細胞免疫應答反應，降低小鼠對第二次腫瘤攻擊的抵抗力。

臨床試用于惡性黑色素瘤、乳腺癌及肺小細胞型未分化癌。腹腔注射對癌性腹水也有治療作用。

不良反應和注意：寒戰(zhàn)發(fā)熱。轉氨酶升高、血壓波動等。

CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1電鏡照片吞噬細胞正在攻擊細菌CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1惡性腹水的治療實驗短小棒狀桿菌

腹腔內注入短小棒狀桿菌可引起纖維性腹膜炎，而包裹腫瘤細胞，減少滲出。有人曾用其治療乳腺和卵巢癌所致的惡性腹水病人，4例中有3例腹水明顯減退。CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1（4）卡介苗卡介苗（BacillusCalmette-Guérin,BCG）是用于結核病的疫苗，由減毒活牛分枝桿菌制備；牛分枝桿菌在特殊的人工培養(yǎng)基上，經數(shù)年的傳代，喪失對人類的致病能力，但仍保持有足夠高的免疫原性，成為可在一定程度上預防結核的疫苗。

CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1歷史

卡介苗疫苗的發(fā)明是來自牛痘的經驗。1882年德國的柯霍（RobertKoch）首次發(fā)現(xiàn)結核桿菌，在第一次世界大戰(zhàn)期間法國細菌學家卡邁特（Calmette）與他的助手介嵐（Guerin）研發(fā)了“卡介苗（BCG）”，1919年移交給巴黎巴斯德研究所，1921年首次使用于人體上。人們?yōu)榱思o念兩位法國科學家卡氏和介氏，故將這種疫苗稱之為卡介苗。

CHAP2醫(yī)藥微生物生物技術1接種卡介苗已被列為國家計劃免疫疫苗之一，卡介苗接種的主要對象是新生兒，一般新生兒出生后立即接種，因此常被稱為“出生第一針”。作用：

(1)作為疫苗：預防結核病。不完善的一面：即接種卡介苗后并不能保證今后一生中不再患結核病，這說明卡介苗的保護力是有限的(