(高清版)GB∕T 37545-2019 化妝品中38種準(zhǔn)用著色劑的測(cè)定 高效液相色譜法

GB/T37545—2019化妝品中38種準(zhǔn)用著色劑的測(cè)定高效液相色譜法國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局GB/T37545—2019ⅡGB/T37545—2019本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)提請(qǐng)注意，聲明符合本文件時(shí)，可能涉及專利號(hào)為ZL201410539619.X《化妝品中38種限用著色劑同時(shí)檢測(cè)的方法》專利的使用。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)對(duì)于該專利的真實(shí)性、有效性和范圍無(wú)任何立場(chǎng)?；蛘邆€(gè)人在實(shí)施該國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)時(shí)實(shí)施專利。該專利持有人的聲明已在本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)備案。相關(guān)信息可以通過以下聯(lián)系方式獲得：地址：大連市開發(fā)區(qū)鐵山東路102號(hào)。請(qǐng)注意除上述專利外，本文件的某些內(nèi)容仍可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別這些專利的責(zé)任。1化妝品中38種準(zhǔn)用著色劑的測(cè)定高效液相色譜法本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的高效液相色譜法適用于唇膏、指甲油、粉類等化妝品中38種準(zhǔn)用著色劑(不含色淀)本標(biāo)準(zhǔn)方法目標(biāo)物的檢出限和定量限參見附錄A中的表A.1。下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法4試劑和材料除非另有說明，所用水為GB/T6682中規(guī)定的一級(jí)4.110.5mol/L醋酸銨水溶液(含有0.5%抗壞血酸鈉):準(zhǔn)確稱取醋酸銨(4.8)3.85g和抗壞血酸鈉4.120.03mol/L醋酸銨水溶液(含0.075%甲酸):準(zhǔn)確稱取醋酸銨(4.8)2.31g,先加水溶解，然后繼續(xù)2加入準(zhǔn)確移取的750μL甲酸(4.4),最后加水定容至1L,震蕩混勻后備用。4.13標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液A:分別準(zhǔn)確稱取各標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(食品紅10、酸性紫43、酸性橙10、酸性藍(lán)62、酸性黃1、酸性藍(lán)7、酸性黃11、食品紅9、食品藍(lán)1、食品紅7、食品黃3、食品紅17、食品藍(lán)2、食品綠3和食品藍(lán)5共15種)5mg(精確至0.01mg)于棕色容量瓶中，用水溶解后定容至10mL,配制成質(zhì)量濃度為500μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于4℃~6℃條件下避光保存，保存期為3個(gè)月。4.14標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液B:分別準(zhǔn)確稱取各標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(酸性紅88、溴甲酚綠、堿性紫2、酸性橙7、酸性紅50、酸性紫9、酸性綠9、酸性黑1、酸性紅52、酸性藍(lán)1、酸性黃121、分散黃16、堿性藍(lán)26、酸性紅98、溶劑黃29、酸性紫50、酸性綠22共17種)5mg(精確至0.01mg)于棕色容量瓶中，用甲醇(4.3)溶解后定容至的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于4℃~6℃條件下避光保存，保存期為3個(gè)月。4.15標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液C:分別準(zhǔn)確稱取各標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(溶劑紅3、溶劑黃33和溶劑綠3共3種)5mg(精確至0.01mg)于棕色容量瓶中，用四氫呋喃溶解后定容至10mL,配制成質(zhì)量濃度為500μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于4℃~6℃條件下避光保存，保存期為3個(gè)月。4.16標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液D:準(zhǔn)確稱取標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(顏料紅4共1種)5mg(精確至0.01mg)于棕色容量瓶中，用四氫呋喃溶解后定容至10mL,配制成質(zhì)量濃度為500μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于4℃~6℃條件下避光保存，保存期為3個(gè)月。4.17標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液E:分別準(zhǔn)確稱取各標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(顏料紅49和顏料紅64共2種)5mg(精確至0.01mg)于棕色容量瓶中，用二甲基亞砜溶解后定容至10mL,配制成質(zhì)量濃度為500μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于4℃~6℃條件下避光保存，保存期為3個(gè)月。4.180.45μm微孔聚四氟乙烯(PTFE)濾膜針式過濾器。5.1高效液相色譜-二極管陣列檢測(cè)器。5.2高效液相色譜串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜儀，配置電噴霧電離源(ESI)(定性確證時(shí)使用)。5.3分析天平：感量0.001g;0.005.4渦旋混合器。5.5超聲波清洗器：功率不低于300W。5.6離心機(jī)：轉(zhuǎn)速不小于5000r/min,離心試管容量10mL。5.7移液槍或移液器。6試樣制備準(zhǔn)確稱取0.2g樣品(精確至0.001g)于10mL具塞刻度離心管中，首先加入6mL四氫呋喃(4.5)渦旋并超聲10min,使樣品分散并提取目標(biāo)物(若遇唇膏樣品無(wú)法分散的情況，可用80℃水浴適當(dāng)加熱1min～2min即可分散)。繼續(xù)向離心管中依次加入2mL甲醇(4.2)和2mL醋酸銨水溶液(4.11),渦旋混合均勻，超聲提取10min,然后于5000r/min離心10min。準(zhǔn)確移取上層提取液2mL于5mL刻度塑料試管中，氮吹濃縮至約0.5mL,然后用甲醇(4.2)稀釋并定容至4mL,超聲30min后，經(jīng)微孔聚四氟乙烯(PTFE)濾膜(4.18)過濾轉(zhuǎn)入進(jìn)樣瓶中待測(cè)。7分析步驟7.1液相色譜參考條件液相色譜參考條件如下：a)色譜柱：ZORBAXSB-Aq,3.5μm,3.0mm×150mm(或相當(dāng)者);3GB/T37545—2019c)流動(dòng)相：A:0.03mol/L醋酸銨水溶液(含0.075%甲酸)(4.12);B:乙腈；f)液相色譜分離條件參見表1。時(shí)間/min流速/(mL/min)08688色譜柱的型號(hào)、內(nèi)徑和長(zhǎng)度及色譜填料粒徑可根據(jù)色譜分離情況自由選擇。流動(dòng)相的梯度設(shè)置應(yīng)根據(jù)不同色譜柱上目標(biāo)化合物的保留時(shí)間做相應(yīng)調(diào)整。色譜柱對(duì)流動(dòng)相中的酸度變化敏感，流動(dòng)相中甲酸需準(zhǔn)確添加。注：1min～28min為色譜分離過程，28min～32min為色譜柱重新平衡過程。質(zhì)譜定性確證參考條件如下：h)其他質(zhì)譜參數(shù)見表2。表238種目標(biāo)物的質(zhì)譜分析參考參數(shù)序號(hào)目標(biāo)物名稱母離子m/z子離子m/z碰撞能量/掃描模式1食品紅9372.0*ESI-2食品藍(lán)1423.0342.5*ESI+4表2(續(xù))序號(hào)目標(biāo)物名稱母離子m/z子離子m/z碰撞能量/掃描模式3290.6*ESI-4酸性黃1233.0*296.0ESI-5酸性橙10407.1301.8*ESI-6407.0206.9*ESI-7食品紅10464.0358.9*299.7ESI-8食品紅17453.1216.9*201.8ESI+9682.8*ESI-食品藍(lán)2306.0*ESI+485.1*449.1ESI-320.9*ESI506.9*ESI-酸性藍(lán)1462.9*265.0ESI-ESI-512.8*477.1ESI415.0*430.1ESI+479.2*435.0ESI685.6*ESI-621.0*ESI220.9*ESI-5表2(續(xù))序號(hào)目標(biāo)物名稱母離子m/z子離子m/z碰撞能量/掃描模式顏料紅49ESI溴甲酚綠696.7536.9*617.7ESI-407.9310.1*ESI-545.1*ESI酸性藍(lán)62316.0*289.0ESI-酸性藍(lán)7669.0562.9*ESI+223.1*ESI+酸性紫50554.1*ESI+溶劑黃33274.1256.2*ESI+酸性黃121693.1649.0*443.9ESI顏料紅64293.0214.7ESI+291.1262.0*232.9ESI279.0ESI+667.0325.0*ESI-ESI-418.9328.0*ESI+堿性藍(lán)26470.1454.0*ESI+高豐度離子。釋液(4.10)稀釋至刻度，配制成各標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)質(zhì)量濃度均為10μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。取適量610μg/mL混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，用標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋液(4.10)稀釋，配制成各標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)質(zhì)量濃度分別為8μg/mL、6pg/mL、4pg/mL、2pg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。以上標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，均需現(xiàn)用現(xiàn)配。7.4定性分析將在相同的液相色譜條件下獲得的樣品溶液的液相色譜分離譜圖與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的液相色譜分離譜圖進(jìn)行比較，若樣品譜圖中存在保留時(shí)間與某標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的保留時(shí)間一致的色譜峰，并且其扣除背景后的紫外吸收?qǐng)D譜與該標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的紫外吸收?qǐng)D譜一致，則可確認(rèn)樣品中存在該物質(zhì)。38種準(zhǔn)用著色劑的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)液相色譜分離譜圖參見附錄C中的圖C.1～圖C.7。對(duì)經(jīng)高效液相色譜法確認(rèn)為超范圍或超限量使用了準(zhǔn)用著色劑的化妝品樣品，必要時(shí)需進(jìn)行質(zhì)譜確證。7.5定量測(cè)定移取系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液(7.3),按照色譜條件(7.1)進(jìn)行高效液相色譜分析，以系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。酸性橙10、酸性綠22和酸性紫9(3種)根據(jù)254nm下的紫外吸收進(jìn)行定量計(jì)算；酸性黃1、酸性黃11、顏料紅49、溶劑黃33、酸性黃121、溶劑紅3、分散黃16、溶劑黃29(8種)根據(jù)416nm下的紫外吸收進(jìn)行定量計(jì)算；食品黃3、酸性橙7、酸性紫43、顏料紅4(4種)根據(jù)484nm下的紫外吸收進(jìn)行定量計(jì)算；食品紅9、食品紅7、食品紅10、食品紅17、酸性紅50、酸性紅52、酸性紅98、酸性紅88、溴甲酚綠、堿性紫2、顏料紅64(11種)根據(jù)514nm下的紫外吸收進(jìn)行定量計(jì)算；酸性黑1、酸性紫50(2種)根據(jù)590nm下的紫外吸收進(jìn)行定量計(jì)算；食品藍(lán)1、食品綠3、食品藍(lán)2、酸性藍(lán)1、食品藍(lán)5、酸性綠9、酸性藍(lán)62、酸性藍(lán)7、溶劑綠3、堿性藍(lán)26(10種)根據(jù)620nm下的紫外吸收進(jìn)行定量計(jì)算。為保證定量測(cè)試的準(zhǔn)確性，測(cè)試過程宜在10h內(nèi)完成。樣品溶液中目標(biāo)物的含量，用標(biāo)準(zhǔn)曲線外標(biāo)法確定?；瘖y品樣品中目標(biāo)物含量則按式(1)進(jìn)行計(jì)算。式中：X——樣品中目標(biāo)物的含量，單位為微克每克(μg/g);p——從標(biāo)準(zhǔn)曲線中計(jì)算出的樣品溶液中目標(biāo)物的質(zhì)量濃度，單位為微克每毫升(μg/mL);V——按稀釋倍數(shù)折算的被測(cè)樣液總體積，單位為毫升(mL);m——稱取樣品的質(zhì)量，單位為克(g)。計(jì)算結(jié)果至少保留3位有效數(shù)字。范圍內(nèi)，回收率為90%～110%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于10%。在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不大于其算術(shù)平均值的10%。7序號(hào)中文名稱檢出濃度pg/mL檢出限mg/g最低定量濃度定量限mg/g1食品紅912食品藍(lán)10.0153食品紅714酸性黃15酸性橙100.0076食品黃30.00770.0080.0258食品紅170.0059食品綠30.0020.005食品藍(lán)20.0020.005酸性紅500.004酸性黃110.005酸性藍(lán)10.005酸性橙70.003酸性紅520.005酸性綠220.015食品藍(lán)50.004酸性紅981酸性綠90.005酸性紅880.0080.025溴甲酚綠酸性紫430.015酸性藍(lán)620.015酸性藍(lán)70.025堿性紫20.0258序聯(lián)標(biāo)國(guó)妝稱的本濃連的本合最低品中濃連品中合酸化紫500.0080.025溶提黃330.025酸化黃1210.025顏準(zhǔn)紅64溶提紅30.0250.005溶提黃290.0080.025顏準(zhǔn)紅40.005溶提綠30.0080.025堿化藍(lán)260.0079GB/T37545—2019(測(cè)著用劑的)38引化妝品中種準(zhǔn)定高色指甲B.1。色B.138引化妝品中種準(zhǔn)定高色準(zhǔn)料測(cè)粉品單大類油質(zhì)提測(cè)CAS化日含量用精量所檢日含規(guī)中1的出Food915-67-3C?oH??N?Na?O??S?604.472的出Food860-22-0Na+Na+466.353的出FoodC?oH?AlNa?O?0S?562.494淀驗(yàn)見1AcidYellow1846-70-8C??H?N?Na?OgSNaONa+0358.195淀驗(yàn)AcidOrangeC?6H??N?Na?O?S?ONa+Na+0O0452.37NHOOGB/T37545—2019表B.1(續(xù))序號(hào)中文名稱著色劑索引通用名CI號(hào)CAS號(hào)分子式相對(duì)分子質(zhì)量6食品Yellow32783-94-0C??H??N?Na?O?S?7食品CgH??N?Na?OgS?十8食品25956-17-6C?H??N?Na?O?S?Na+Na+O00N09食品2353-45-9C?7H??N?Na?O?OS?O00Na+O食品2650-18-2C?H?NO.S00NH4S000NH400序號(hào)中文名稱著色劑索引通用名CAS號(hào)分子式相對(duì)分子質(zhì)量酸性AcidC??H??N?NaO?S?酸性AcidC?H?N?NaO?S酸性AcidC??H?N?Na?O?S酸性Acid00000酸性AcidCH??N?NaO?S0N酸性Acid0O000GB/T37545—2019藍(lán)名標(biāo)性名物著色劑離目通號(hào)名CAS名分稱式相對(duì)分稱量能子性AcidGreen22CI421705863-51-4C??H??ClN?NaO?S?食品FoodCI420513536-49-0C?4H??CaN?O?4S?00—0—N子性AcidCI454056441-77-6C??H?Br?Cl?K?O?BrBrBrBr792.96子性AcidCI421004857-81-2C?H?4CIN?NaO?S?00Na+0C725.25GB/T37545—2019表B.1(續(xù))序號(hào)中文名稱著色劑索引通用名分子式相對(duì)分子質(zhì)量酸性顏料C?0H??N?NaO?S溴甲酚綠C??H??Br?O?S酸性酸性C?H??N?NaO?S酸性00NH?O0GB/T37545—2019表B.1(續(xù))序號(hào)中文名稱著色劑索引通用名CAS號(hào)分子式相對(duì)分子質(zhì)量酸性AcidCI420803486-30-4690.8堿性BasicViolet2CI425203248-91-7C?2H??CIN?酸性Acid6837-46-3C?9Hz?N?O?S?Na624.62溶劑SolventYellowCI470008003-22-3CgHNO?273.29酸性黃AcidYellow5601-29-6C?4H??CrN?O?HH)693.62顏料Pigment6371-76-2C?4H?2CaN?O?0N00N622.64GB/T37545—2019表B.1(濃)綠的本給工見規(guī)則起表甲國(guó)照工CAS的業(yè)最輕中草業(yè)最準(zhǔn)按參起Solvent6535-42-8C?H??N?O?292.34業(yè)藍(lán)DisperseYellow4314-14-1C?H?N?O278.31參起SolventYellow6706-82-7C?4H?2N?O?668.91黃標(biāo)Pigment2814-77-9C,H,CIN?ON327.72參起SolventCz?H?2N?O?HN-NH418.49橙由BasicCI440452580-56-5CH?CINHNHNN506.09GB/T37545—2019(資料性附錄)38言引用著色劑的標(biāo)引物質(zhì)液相色譜分離譜圖38化標(biāo)合妝品大準(zhǔn)本標(biāo)物聯(lián)食市品檢驗(yàn)離檢圖見圖C.1～圖C.7。1——國(guó)中紅9;2——國(guó)中藍(lán)1;3——國(guó)中紅7;4——酸連黃1;5——酸連橙10;6——國(guó)中黃3;7——國(guó)中紅10;8——國(guó)中紅17;9——國(guó)中綠3;10——國(guó)中藍(lán)2;11——酸連紅50;12——酸連黃11;13——酸連黑1;14——酸連藍(lán)1;15——酸連橙7;16——酸連紅52;17——酸連綠22;18——國(guó)中藍(lán)5;19——酸連紅98;20——酸連綠9;21——酸