中藥材雜質(zhì)測(cè)定

第四節(jié)中藥及其制劑的雜志檢查與一般質(zhì)量控制方法水分灰分酸不溶性灰分砷鹽和重金屬限量有機(jī)磷和有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量主要項(xiàng)目雜質(zhì)來(lái)源及檢查意義水分——結(jié)塊、霉變或有效成分水解灰分——控制藥物本身及泥土、沙石等無(wú)機(jī)雜質(zhì)砷鹽——?jiǎng)《?，常由除草劑、殺蟲(chóng)劑或化肥引入重金屬——環(huán)境污染和使用農(nóng)藥引入殘留農(nóng)藥——有毒烘干法（不含或少含揮發(fā)性成分）甲苯法（含揮發(fā)性成分）減壓干燥法（含揮發(fā)性成分貴重藥）

GC法（氣相色譜法）一、水分檢查法烘干法方法：取供試品2g~5g，置扁形稱(chēng)量瓶中，首先在100~105攝氏度干燥5h，置干燥器中放置30min，稱(chēng)重，在于以上溫度下干燥1h，至連續(xù)兩次稱(chēng)重的差異不超過(guò)5mg為止。根據(jù)減失的重量計(jì)算供試品中含有水分的百分率。適用范圍：不含或少含揮發(fā)性成分的藥品。甲苯法原理：利用水可與甲苯在69.3攝氏度共沸蒸出，收集餾出液，待分層后由刻度管測(cè)定出所含水的量方法：精密稱(chēng)取供試品適量置A瓶中，加甲苯200ml，并自冷凝管加入甲苯，至充滿(mǎn)B管的狹細(xì)部分，加熱A瓶，指甲本微沸，待水分完全餾出，即測(cè)定管內(nèi)的水分不再增加時(shí)，停止蒸餾，放置，使水與甲苯完全分離，檢測(cè)水量，即可計(jì)算出供試品含水百分率。注：A.圓底燒瓶B.水分測(cè)定管C.直形冷凝管適用范圍：含揮發(fā)性成分樣品的水分測(cè)定。不適用于微量水分的測(cè)定。減壓干燥法方法：減壓干燥器中，放入一直徑12cm左右的培養(yǎng)皿，加入新鮮五氧化二磷干燥劑適量，使鋪成0.5～1cm的厚度。取供試品2～4g，混合均勻。分取約0.5～1g，置已在供試品同樣條件下干燥并稱(chēng)重的稱(chēng)瓶中，精密稱(chēng)定，打開(kāi)瓶蓋，放入上述減壓干燥器中，減壓至2.67kPa(20mmHg)以下持續(xù)半小時(shí)，室溫放置24小時(shí)。在減壓干燥器出口連接新鮮無(wú)水氯化鈣干燥管，打開(kāi)活塞，待內(nèi)外壓一致，關(guān)閉活塞，打開(kāi)干燥器，蓋上瓶蓋，取出稱(chēng)瓶迅速精密稱(chēng)定重量，計(jì)算供試品中含有水分的百分?jǐn)?shù)。適用范圍：含有揮發(fā)性成分的貴重藥品氣相色譜法方法：用污水乙醇浸提供試品，抽提出樣品中的水分，以純化水作標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照，同法操作，在氣相色譜儀上進(jìn)行各5微升；用直徑為0.25~0.18mm二乙烯苯-乙基乙烯苯型高分子多孔小球?yàn)檩d體，柱溫140~150攝氏度；熱導(dǎo)檢測(cè)器檢測(cè)；用外標(biāo)法計(jì)算樣品中的含量。適用范圍：對(duì)于是否含揮發(fā)性成分，含水量從微量到常量，都不影響測(cè)定。普遍適用。二、總灰分和酸不溶性成分總灰分是指藥材或制劑經(jīng)加熱熾灼灰化遺留的無(wú)機(jī)物。除包含藥物本身所含無(wú)機(jī)鹽外，還包括泥土，砂石等藥材外表黏附的無(wú)機(jī)雜質(zhì)。測(cè)定惠芬的主要目的是控制藥材中泥土、砂土的量，同時(shí)還可以反映藥材生理灰分的量。

總灰分測(cè)定方法：精密稱(chēng)取供試品2~3g，置已熾灼至恒重的坩堝中，緩緩熾熱使完全碳化，再在500~600攝氏度熾灼至完全灰化并至恒重，根據(jù)殘?jiān)闹亓考?jí)算總灰分的含量百分率。有的中藥生理灰分差異較大，不能說(shuō)明外來(lái)雜質(zhì)的量，因此需要測(cè)定酸不溶性成分。

酸不溶性灰分測(cè)定方法：取上項(xiàng)所得的灰分，在坩堝中加入稀鹽酸10ml，用表面皿覆蓋坩堝，置水浴上加熱10分鐘，表面皿用熱蒸餾水5ml沖洗，洗液并入坩堝中，用無(wú)灰濾紙濾過(guò)，坩堝內(nèi)的殘?jiān)谜麴s水洗于濾紙上，并洗滌至洗液不顯氯化物反應(yīng)為止，濾渣連同濾紙移至同一坩堝中，干燥，熾灼至恒重。根據(jù)殘?jiān)亓?，?jì)算供試品中含酸不溶性灰分的百分?jǐn)?shù)?？偦曳值臏y(cè)定酸不溶性灰分的測(cè)定三、重金屬重金屬鉛、汞、鎘、銅等對(duì)人體均有嚴(yán)重的毒害。藥材由于環(huán)境污染和使用農(nóng)藥等原因容易引入種金屬雜質(zhì)，所以中藥制劑中重金屬的量同樣需要控制。我國(guó)現(xiàn)行要求，重金屬限量應(yīng)控制在百萬(wàn)分之二十以下。世界衛(wèi)生組織要求將鉛的限量控制在百萬(wàn)分之十以下，鎘控制在百萬(wàn)分之零點(diǎn)三以下。（一）測(cè)定制劑中鉛的方法二硫腙比色法：利用鉛離子與二硫腙在Ph8.5~9.0時(shí)，生成紅色絡(luò)合物，用氯仿提取后于510nm處測(cè)定吸收度，用比色法測(cè)定。原子吸收分光光度法：使用鉛空心陰極燈，在283.3nm處進(jìn)行測(cè)定。WHO規(guī)定植物藥鉛≤10ppm鎘≤0.3ppm干法破壞濕法破壞硫代乙酰胺法干法破壞（ChP）濕法破壞（USP）四、砷鹽砷鹽為劇毒物質(zhì)?？刂粕辂}的量是控制制劑純度的很重要的方面。中國(guó)藥典收載的砷鹽檢查法有古蔡法和二乙基二硫代氨基甲酸銀法。由于中藥制劑組成復(fù)雜，在檢查前必須對(duì)樣品進(jìn)行有機(jī)破壞。中國(guó)藥典多采用堿融法破壞。例：阿膠中砷鹽的檢查方法：取供試品2g，加氫氧化鈣1g，混合，加少量水，攪勻。干燥后先用小火燒灼使碳化，再在500~600攝氏度熾灼使完全灰化，放冷，加鹽酸3ml與適量的水使溶解成30ml,分取溶液10ml，加鹽酸4ml與水14ml，依法檢查。加堿后熾灼破壞，砷成砷酸鹽，可避免砷的揮發(fā)損失。對(duì)含糖量高的制劑，采用濕法破壞較為有利。供試品加硝酸-高氯酸或硫酸，加熱使有機(jī)物破壞。砷鹽檢查還可采用原子吸收分光光度法：用砷空心陰極燈，在193.7nm處檢測(cè)，方法專(zhuān)屬，靈敏，定量限可達(dá)百萬(wàn)分之0.05。供試品有機(jī)破壞古蔡氏法Ag—DDC法五、殘留農(nóng)藥常用農(nóng)藥有有機(jī)氯類(lèi)如艾氏劑、六六六、氯丹等；有機(jī)磷類(lèi)如三硫磷、氯硫磷、蠅毒磷等；氨基甲酸酯類(lèi)如西維因；二硫代氨基甲酸酯類(lèi)如福鎂鐵、代森錳等，無(wú)機(jī)農(nóng)藥如磷化鋁，砷酸鈣等。此外還有苯氧羧酸類(lèi)除草劑。多數(shù)農(nóng)藥殘留期短，其中有機(jī)氯類(lèi)等以及少數(shù)有機(jī)磷農(nóng)藥能長(zhǎng)期殘留，所以需要控制。農(nóng)藥不明的樣品，一般可測(cè)定總有機(jī)氯量和總有機(jī)磷量。已知農(nóng)藥的樣品多采用氣相色譜法檢查有關(guān)的農(nóng)藥。中國(guó)藥典規(guī)定：甘草、黃芪的六六六和DDT殘留量不得高于百萬(wàn)分之零點(diǎn)二、五氯硝基苯殘留量不得高于百萬(wàn)分之零點(diǎn)一。殘留農(nóng)藥測(cè)定1、總氯量的測(cè)定2、總磷量的測(cè)定3、氣相色譜法（已知農(nóng)藥）總氯量的測(cè)定方法：取供試品細(xì)粉適量，加約10倍的乙腈-水（65：35），高速攪拌后過(guò)濾，取濾液用石油醚（30~60攝氏度）萃取出農(nóng)藥，濃縮萃取液后滴加于不含氯化物的濾紙上，待溶劑揮干后，照氧瓶燃燒法燃燒破壞。取吸收液，按硫氰酸銨成色法測(cè)定氯的量。供試品用乙腈-水提取，植物藥中的纖維、蛋白質(zhì)、糖、淀粉、脂肪等不能被提取。農(nóng)藥為脂溶性，再用石油醚萃取出農(nóng)藥，極性和中等極性的有機(jī)成分可進(jìn)一步除去。氧瓶燃燒破壞后，有機(jī)氯轉(zhuǎn)化為無(wú)機(jī)氯，并吸收入水中。取吸收液，加入硫氰酸汞試液，可定量生成難離解的氯化汞，并置換出相當(dāng)量的硫氰酸根離子，再加入硫酸鐵銨溶液，生成紅色硫氰酸鐵配位離子，于460nm波長(zhǎng)處有最大吸收，吸收度與氯離子量呈線(xiàn)性關(guān)系，故可用比色法測(cè)定含氯量。2Clˉ+Hg(SCN)2―→HgCl2+2SCNˉ

6SCNˉ+2Fe3+―→[Fe(SCN)63ˉ總磷量的測(cè)定方法：供試品按總氯量測(cè)定法用石油醚萃取后，為進(jìn)一步除去干擾，過(guò)佛羅里硅土柱，用乙醚-石油醚（30~60攝氏度）混合溶液洗脫，收集洗脫液，濃縮后，用氧瓶燃燒法破壞處理，使有機(jī)磷轉(zhuǎn)化為無(wú)機(jī)磷酸鹽，再用磷鉬酸比色法測(cè)定。磷酸鹽與鉬酸銨試液、硫酸試液反應(yīng)生成磷鉬酸，再與氨基萘磺酸試液反應(yīng)，被還原為鉬藍(lán)，在820nm處測(cè)定吸收度，同法制備標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，按標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)法測(cè)定含量。通常未污染的植物含磷約0.000005~0.000001，如果測(cè)定結(jié)果在此范圍內(nèi)，可認(rèn)為樣品不含有機(jī)磷農(nóng)藥。氣相色譜法氣相色譜法分離效能高，具有高靈敏度的專(zhuān)屬檢測(cè)器，是對(duì)殘留農(nóng)藥進(jìn)行定性或定量分析的最常用方法。先用非極性有機(jī)溶劑萃取出殘留農(nóng)藥，一般需再過(guò)硅藻土或佛羅里硅土柱進(jìn)一步純化。分析十多以硅氧烷類(lèi)為固定液，如OV-17，OV-21，SE-30等，氮?dú)鉃檩d氣。測(cè)定有機(jī)氯時(shí)，使用電子捕獲檢測(cè)器（ECD）；測(cè)定有機(jī)磷時(shí)，使用火焰廣度檢測(cè)器（FPD）?；鹧婀舛葯z測(cè)器是測(cè)定硫、磷化合物的專(zhuān)用檢測(cè)器。當(dāng)含磷化合物在富氫火焰中燃燒時(shí)，產(chǎn)生的HPO將發(fā)射526nm的特征光，可專(zhuān)屬性檢測(cè)磷。氣相色譜條件：柱長(zhǎng)2m，內(nèi)徑3mm，擔(dān)體為ChromosorbW/AW-DWCS，涂布2.5%SE-30和3%QE-1混合固定液，火焰光度檢測(cè)器檢測(cè)，進(jìn)樣口溫度220攝氏度，柱溫180攝氏度，載氣為氮?dú)?。?duì)照品溶液的制備：精密稱(chēng)取待測(cè)農(nóng)藥對(duì)照品適量，加本或氯仿定量稀釋成每1ml含1mg的溶液，作為貯備液。臨用前取貯備液適量，加二氯甲烷稀釋成每1ml含1μg的溶液，作為對(duì)照品溶液。供試品溶液的制備：精密稱(chēng)取中藥細(xì)粉10g，置具塞錐