雜交瘤技術(shù)在成藥性抗體開(kāi)發(fā)中的應(yīng)用

雜交瘤技術(shù)在成藥性抗體開(kāi)發(fā)中的應(yīng)用北京義翹神州科技股份有限公司義翹神州CONTENT抗體類藥物概述1成藥性抗體制備主要平臺(tái)介紹2雜交瘤技術(shù)進(jìn)行成藥性抗體開(kāi)發(fā)3相關(guān)案例分享4抗體類藥物開(kāi)發(fā)概述01義翹神州抗體藥物——從0邁入爆發(fā)式增長(zhǎng)階段●抗體類藥物數(shù)量爆發(fā)式增長(zhǎng)●全球抗體藥市場(chǎng)節(jié)節(jié)攀升義翹神州抗體藥物——從0邁入爆發(fā)式增長(zhǎng)階段MurinepartGenericsuffix100%omab30%iximab10%zumab0%umabHighlowImmunogenicityreactionsMurineChimericHumanizedFullyhumanmousehuman●適應(yīng)癥范圍穩(wěn)步擴(kuò)大●藥物安全性有效提升義翹神州抗體藥物開(kāi)發(fā)流程靶點(diǎn)確認(rèn)抗體發(fā)現(xiàn)體內(nèi)/體外功能驗(yàn)證工藝開(kāi)發(fā)生產(chǎn)IIIIII期臨床申報(bào)審批上市后IV期臨床抗原制備及免疫抗體篩選制備抗體優(yōu)化成藥性評(píng)估動(dòng)物模型評(píng)估最終序列ADC\雙抗等結(jié)構(gòu)組合雜交瘤（傳統(tǒng)、轉(zhuǎn)基因小鼠）抗體庫(kù)（噬菌體展示）單B細(xì)胞克隆技術(shù)（流式、beacon）鼠、兔、羊羊駝、其他親和力成熟成藥性改造抗體人源化特異性、溶解度、構(gòu)象穩(wěn)定性、電荷異質(zhì)性、功能活性、片段化有效性初步評(píng)價(jià)（藥效學(xué)）安全性初步評(píng)價(jià)（毒理學(xué)、藥代動(dòng)力學(xué)）義翹神州成藥性抗體制備平臺(tái)介紹02義翹神州雜交瘤技術(shù)經(jīng)典單克隆抗體制備途徑噬菌體文庫(kù)展示技術(shù)大庫(kù)容量、小分子單鏈抗體單B細(xì)胞克隆技術(shù)流式細(xì)胞技術(shù)、微流控技術(shù)、光導(dǎo)流體技術(shù)單克隆抗體篩選技術(shù)抗原抗體義翹神州雜交瘤技術(shù)YYYYYYYYYYYYYYYYYSplenocytesMyelomaHybridomacellsScreeningAmplificationpurification技術(shù)路線成熟；可進(jìn)行多種功能性篩選；成本低、易操作義翹神州噬菌體展示技術(shù)tissueRNAcDNAscFvphagemidTransformationinfectionlibrary適用范圍廣；重組抗體；多樣性高義翹神州ImmunizationSplenocytes&PBMCSingleBCellSortingmRNAextractionRT-PCR&InsertVectorExpressionELISA單B細(xì)胞單克隆技術(shù)天然抗體；抗體多樣性高；開(kāi)發(fā)周期短；可進(jìn)行全人源抗體篩選義翹神州雜交瘤技術(shù)制備成藥性抗體03義翹神州差異化抗原設(shè)計(jì)表位差異性構(gòu)象正確性1多樣的免疫方案高滴度免疫效價(jià)多表位免疫反應(yīng)識(shí)別功能位點(diǎn)2高效組合篩選快速精準(zhǔn)篩選高效鑒別多功能抗體3高通量表達(dá)生產(chǎn)減少動(dòng)物源性污染高產(chǎn)能（mg級(jí)）4成藥性分析驗(yàn)證理化檢測(cè)體外功能驗(yàn)證體內(nèi)功能驗(yàn)證5雜交瘤平臺(tái)關(guān)鍵技術(shù)環(huán)節(jié)義翹神州1.差異化的抗原設(shè)計(jì)重組蛋白類免疫原膜蛋白膜蛋白的大部分表位需要雙層膜穩(wěn)定其結(jié)構(gòu)部分膜蛋白表位由小的、不連續(xù)的片段構(gòu)成膜蛋白表達(dá)量通常很低建議免疫形式：胞外結(jié)構(gòu)區(qū)、全長(zhǎng)蛋白、VLP蛋白、DNA/細(xì)胞義翹神州DNA/細(xì)胞類免疫——優(yōu)化方案質(zhì)粒1質(zhì)粒2質(zhì)粒3質(zhì)粒4質(zhì)粒5質(zhì)粒6載體質(zhì)粒的選擇免疫方案的比較佐劑，周期，給藥途徑等DI=1:100,OD-B義翹神州CD7KG1(CD34+)Jurkat(CD34-)RPMI8226(CD34-)同型對(duì)照DNA/細(xì)胞免疫生產(chǎn)的CD34抗體CD34DNA/細(xì)胞免疫-成功案例controlDNA/細(xì)胞免疫生產(chǎn)的CD7抗體商品化CD7抗體義翹神州2.多樣化的免疫方案佐劑弗氏佐劑、鋁佐劑、MF59、QS21

動(dòng)物種屬、品系小鼠（BALB/c，C57BL/6,SJL）【兔、羊駝、山羊等】動(dòng)物數(shù)量≥10只免疫途徑皮內(nèi)、皮下、腹腔、靜脈、淋巴結(jié)、脾內(nèi)免疫周期常規(guī)、快速免疫劑量小鼠10~100ug/只次；兔100~500ug/只次義翹神州3.高效抗體制備及組合篩選免疫血清檢測(cè)融合后主克隆篩選2~3輪有限稀釋穩(wěn)定單克隆細(xì)胞株ELISA結(jié)合親和力初篩（可選）ELISA競(jìng)爭(zhēng)活性FCM細(xì)胞活性（可選）義翹神州5只小鼠ELISA效價(jià)合格2只小鼠FCM檢測(cè)合格首篩>50株ELISA陽(yáng)性主克隆10株FCM陽(yáng)性主克隆8株ELISA陽(yáng)性克隆其中7株FCM陽(yáng)性高效電融合方式靶點(diǎn)PEG融合電融合靶點(diǎn)1<1008倍靶點(diǎn)2<1002倍靶點(diǎn)3<1503倍靶點(diǎn)4<100相當(dāng)靶點(diǎn)5040

相同脾細(xì)胞量義翹神州Elisa檢測(cè)親和力初篩多功能驗(yàn)證大通量快速精準(zhǔn)高效電融合電融合配合多平臺(tái)組合篩選，快速精準(zhǔn)淘選初級(jí)抗體克隆4.高通量表達(dá)生產(chǎn)義翹神州腹水制備操作簡(jiǎn)單，制備成本低；混有小鼠的各種雜蛋白；有引入動(dòng)物源性污染的風(fēng)險(xiǎn)；不適合放大生產(chǎn)；體外培養(yǎng)方便分離純化；可減少動(dòng)物源性污染的機(jī)會(huì)；可以進(jìn)行有效過(guò)程控制；有助于大規(guī)模生產(chǎn)；“01理化檢測(cè)分析“02體外結(jié)合活性驗(yàn)證03體外生物學(xué)活性測(cè)定聚集分子大小及純度電荷異構(gòu)體糖基化熱穩(wěn)定性可溶性宿主殘留

ELISA法結(jié)合活性、競(jìng)爭(zhēng)活性

流式細(xì)胞學(xué)法

生物分子相互作用分析抗原抗體動(dòng)力學(xué)親和力測(cè)定表位競(jìng)爭(zhēng)實(shí)驗(yàn)補(bǔ)體依賴細(xì)胞毒（CDC）

ADCC及ADCP殺傷活性中和實(shí)驗(yàn)細(xì)胞增殖、遷移、分泌實(shí)驗(yàn)熒光素酶報(bào)告基因酶活性抑制實(shí)驗(yàn)血凝活性抑制實(shí)驗(yàn)“04體內(nèi)生物活性檢測(cè)藥效研究藥物代謝免疫原性分析“5.成藥性分析驗(yàn)證義翹神州案例分享04義翹神州13株亞克隆細(xì)胞定株15株亞克隆ELISA競(jìng)爭(zhēng)陽(yáng)性40株細(xì)胞2~3輪有限稀釋102株主克隆ELISA競(jìng)爭(zhēng)抑制陽(yáng)性(抽檢20株，6株細(xì)胞活性陽(yáng)性）835孔主克隆ELISA結(jié)合陽(yáng)性融合后細(xì)胞接種42塊96孔細(xì)胞培養(yǎng)板10只小鼠高效價(jià)，挑選1只進(jìn)行融合Balb/c、C57BL/6小鼠各免疫5只重組蛋白（細(xì)胞生物活性檢測(cè)EC502~8ng/mL）活性蛋白免疫抗體親和力達(dá)到nM級(jí)細(xì)胞活性等多功能介入篩選案例1.anti-IL15成藥性抗體篩選義翹神州抗體功能驗(yàn)證KD(M)Kon(1/Ms)Kdis(1/s)8.78E-114.15E+053.64E-05KD(M)Kon(1/Ms)Kdis(1/s)2.47E-101.97E+054.88E-05KD(M)Kon(1/Ms)Kdis(1/s)2.29E-103.91E+058.94E-0513株抗體均可抑制細(xì)胞，其中11株優(yōu)于對(duì)照抗體抗體親和E-10~E-11M義翹神州18株具有競(jìng)爭(zhēng)活性獲得26株陽(yáng)性克隆29株細(xì)胞2~3輪有限稀釋29株主克隆ELISA競(jìng)爭(zhēng)抑制陽(yáng)性且FCM檢測(cè)陽(yáng)性，其中23株高親和164孔主克隆ELISA結(jié)合陽(yáng)性融合后細(xì)胞接種30塊96孔細(xì)胞培養(yǎng)板10只小鼠高效價(jià)，挑選1只進(jìn)行融合Balb/c、C57BL/6小鼠各免疫5只重組蛋白（ELISA活性檢測(cè)EC505~25ng/mL）活性蛋白免疫FCM等多功能介入篩選案例2.anti-CD47成藥性抗體篩選義翹神州抗體功能驗(yàn)證KD(M)Kon(1/Ms)Kdis(1/s)8.78E-114.15E+053.64E-05KD(M)Kon(1/Ms)Kdis(1/s)2.47E-101.97E+054.88E-05KD(M)Kon(1/Ms)Kdis(1/s)2.29E-103.91E+058.94E-0518株抗體具有ELISA競(jìng)爭(zhēng)活性達(dá)ng/ml級(jí)別抗體MM39抗體MM52陽(yáng)性對(duì)照抗體陰性對(duì)照抗體26株抗體FCM檢測(cè)陽(yáng)性抗體親和力達(dá)到nM級(jí)別2株抗體不引起紅細(xì)胞凝集義翹神州關(guān)于“北京義翹神州”堅(jiān)持自主研發(fā)生產(chǎn)打造中國(guó)生命科學(xué)研究“一站式”試劑與服務(wù)支撐平臺(tái)人才與設(shè)施榮譽(yù)資質(zhì)設(shè)施：---26,000+平米研發(fā)中心

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