2.2.2動物細胞工程（動物細胞融合單抗）高二下學期生物人教版選擇性必修3

第二章細胞工程動物細胞工程（動物細胞融合+單抗）P48原理：細胞膜的流動性優(yōu)點：克服遠緣雜交不親和的障礙形成單核細胞≠多核P48P49原理特點第一次篩選方法第二次篩選方法P49傳統(tǒng)抗體：P50：①②③應用①應用②應用③思1.下列各圖表示單克隆抗體制備過程的各階段圖解,請用箭頭把代表各圖解的字母按單克隆抗體制備過程的順序連接起來:

議2.抗PD–L1單克隆抗體能與癌細胞膜表面的PD–L1特異性結(jié)合，因而具有治療癌癥的作用。下圖是制備抗PD–L1單克隆抗體示意圖，分析：（1）①多孔玻璃板中的細胞是否是B細胞和鼠瘤細胞的融合細胞？（2）②過程用到的方法？目的是？圖中細胞集落a~d是否都是既能大量繁殖，又能產(chǎn)生抗體？能在該培養(yǎng)基上大量增殖的細胞產(chǎn)生的抗體（一定/不一定）能抗PD–L1。（3）圖中③獲得的雜交瘤細胞還需要經(jīng)過④克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，原因是？

（4）圖中細胞集落__________可用于擴大化培養(yǎng)生產(chǎn)抗PD–L1單克隆抗體。3.【選擇培養(yǎng)基的篩選機理】細胞合成DNA有D和S兩條途徑,D途徑能被氨基嘌呤阻斷,小鼠B細胞中有這兩種DNA合成途徑,但不分裂增殖。骨髓瘤細胞盡管沒有S途徑但能不斷分裂增殖【說明骨髓瘤細胞進行增殖存在______途徑】。將這兩種細胞混合加PEG促進細胞融合.篩選時，向培養(yǎng)液中添加____________________，則被淘汰的細胞有未融合的親本細胞、融合的具有同種核的細胞，原因是B細胞___________，骨髓瘤細胞________________。雜交瘤細胞由于可以進行_______________途徑。自由展

生產(chǎn)單克隆抗體時，Why不直接培養(yǎng)B細胞？2.抗PD–L1單克隆抗體能與癌細胞膜表面的PD–L1特異性結(jié)合，因而具有治療癌癥的作用。下圖是制備抗PD–L1單克隆抗體的示意圖，分析：展1（1）①多孔玻璃板中的細胞是否是B細胞和鼠瘤細胞的融合細胞？

不一定B骨B-B骨-骨B-骨共5種（2）②過程用到的方法？選擇培養(yǎng)基

目的是？篩選出雜交瘤細胞圖中細胞集落a~d是否都是既能大量繁殖，又能產(chǎn)生抗體？是

能在該培養(yǎng)基上大量增殖的細胞產(chǎn)生的抗體（不一定）能抗PD–L1。（3）圖中③獲得的雜交瘤細胞還需要經(jīng)過④克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，原因是？

和骨髓瘤細胞融合的B細胞有多種，獲得的雜交瘤不一定能產(chǎn)生所需抗體。

（4）圖中細胞集落_a可用于擴大化培養(yǎng)生產(chǎn)抗PD–L1單克隆抗體。3.【選擇培養(yǎng)基的篩選機理】細胞合成DNA有D和S兩條途徑,其D途徑能被氨基嘌呤阻斷,小鼠的B細胞中有這兩種DNA的合成途徑,但一般不分裂增殖。骨髓瘤細胞中盡管沒有S途徑但能不斷分裂增殖【說明骨髓瘤細胞進行增殖存在

D途徑】。

將這兩種細胞混合加PEG促進細胞融合.進行篩選時，向混合培養(yǎng)液中添加氨基嘌呤，則被淘汰的細胞有未融合的親本細胞、融合的具有同種核的細胞，原因是B細胞不能增殖，骨髓瘤細胞D途徑被氨基嘌呤阻斷。雜交瘤細胞由于可以進行S途徑。展2一、單克隆抗體制備：技術(shù)：動物細胞融合、動物細胞培養(yǎng)——原理：2個評12.（1）以HPV衣殼蛋白為抗原制備單克隆抗體，應向小鼠體內(nèi)注射HPV衣殼蛋白

①注射抗原的目的：獲得產(chǎn)生特定抗體的B細胞

②反復注射：獲得大量B細胞。

若只考慮兩兩融合,融合的細胞類型有(a/aa/ab/bb/b).體系中出現(xiàn)多種細胞原因是:①融合是隨機的②融合率達不到100%.

評2【常考點2】抗體檢測：取上清液檢測。技術(shù)：抗原-抗體雜交

原理：抗原、抗體特異性結(jié)合【?？键c3】（1）雜交瘤細胞特點：既能無限增殖，又能產(chǎn)生抗體。（2）單克隆抗體優(yōu)點：①能準確識別抗原的細微差異②與特定抗原特異性結(jié)合

③可以大量制備（3）傳統(tǒng)抗體缺點：①產(chǎn)量低

②純度低

③特異性差【考點4】單克隆抗體用途:①作為診斷試劑（最廣泛的用途）②治療疾病

③運載藥物.【常考點1】克隆化培養(yǎng)：（5）②目的是獲得由單個雜交瘤細胞增殖形成的細胞群。常用稀釋法，即稀釋到3～l0個細胞/mL,每孔加入細胞懸液0.1mL？目的：使每個孔內(nèi)不多于一個細胞,達到單克隆培養(yǎng)的目的。

評31.抗體作用特異性識別癌細胞。

藥物作用促使靶細胞凋亡【藥物對靶細胞沒有選擇性】2.ADC治療疾病，副作用更小原因單克隆抗體把藥定向帶到癌細胞所在位置,在原位殺死癌細胞。利用尿液診斷早孕的機理是孕婦尿液中的人絨毛膜促性腺激素（HCG）與試紙上的抗HCG的單克隆抗體特異性結(jié)合胞吞溶酶體裂解細胞凋亡1.雜交瘤細胞特點是既能無限增殖又能產(chǎn)生特異性抗體。2.單克隆抗體優(yōu)點①能準確識別抗原的細微差異

②與特定抗原特異性結(jié)合

③可以大量制備3.在選擇性培養(yǎng)基上，未融合的親本細胞和融合的具有同種核的細胞都會死亡，只有融合的雜交瘤細胞才能生長。4.單克隆抗體第一次篩選的方法是選擇性培養(yǎng)基。目的：篩選出雜交瘤細胞。5.第二次篩選的方法：克隆化培養(yǎng)、抗體檢測。目的;篩選出產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細胞6.單克隆抗體應用的技術(shù)：動物細胞培養(yǎng)、動物細胞融合

原理：細胞膜的流動性、細胞增殖7.若要使能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細胞大量增殖，可采用的方法有將獲得的細胞在體外條件下做大規(guī)模培養(yǎng)，或注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖。8.單克隆抗體擴大培養(yǎng)在體外從培養(yǎng)液中提取和在體內(nèi)從腹水中提取。9.單克隆抗體的用途:①作為診斷試劑

②治療疾病

③運載藥物.10.克隆化培養(yǎng)的目的是獲得由單個雜交瘤細胞增殖形成的細胞群。11.制備H7N9病毒單克隆抗體的過程,B細胞取自感染過H7N9動物的脾臟。12.動物細胞融合原理：細胞膜的流動性

優(yōu)點:克服遠緣雜交不親和的障礙。13.與植物相比特有的誘導融合的生物誘導劑是滅活的病毒。

化學試劑是：