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文檔簡介

選修一生物技術(shù)實(shí)踐

一、傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的應(yīng)用.,

1、果酒制作原理:酵母菌是兼性厭氧微生物。在缺氧、呈酸性

發(fā)酵液中,酵母菌可以生長繁殖,而絕大多數(shù)其他微生物生長受抑制。

酵母菌在無氧條件下進(jìn)行酒精發(fā)酵:C6H&6-2c2H5OH+2CO2+少量能

2、果醋制作原理:當(dāng)氧氣、糖源都充足時(shí),醋酸菌將葡萄汁中

的糖分解成醋酸;當(dāng)缺少糖源時(shí),醋酸菌將乙醇變?yōu)橐胰?,再將乙?/p>

變?yōu)榇姿帷?/p>

3、腐乳制作原理:多種微生物參與了豆腐的發(fā)酵,其中起主要

作用的是毛霉。毛霉是一種絲狀真菌。代謝類型是異養(yǎng)需氧型。毛霉

等微生物產(chǎn)生的蛋白酶能將豆腐中的蛋白質(zhì)分解成小分子的肽和氨

基酸;脂肪酶可將脂肪水解為甘油和脂肪酸。在多種微生物的協(xié)同作

用下,普通的豆腐轉(zhuǎn)變成風(fēng)味獨(dú)特的腐乳。

4、泡菜制作原理:制作泡菜所用微生物是乳酸菌,其代謝類型

是異養(yǎng)厭氧型。在無氧條件下,將葡萄糖分解為乳酸。

二、微生物的培養(yǎng)和應(yīng)用

(一)微生物的培養(yǎng)與利用

1.微生物的培養(yǎng)和分離技術(shù)

1)微生物生長需要一般都含有水、碳源、氮源、無機(jī)鹽

2)培養(yǎng)基的制作合格與否通過未接種的培養(yǎng)基表面是否有菌落

生長來驗(yàn)證

3)常用的無菌技術(shù)有1、對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和

手進(jìn)行清潔和消毒。2、將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)

基等進(jìn)行滅菌。3、為避免周圍環(huán)境中的微生物的污染,實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)

在酒精燈火焰附近進(jìn)行。4、實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料

用具與周圍物品相接觸。

考點(diǎn)細(xì)化:

①滅菌是指使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物,包

括芽他和狗子。消毒是指用較為溫和的理化方法僅殺死物體表面或內(nèi)

部一部分對(duì)人體有害的微生物,不包括芽他、他子。

②滅菌的方法有灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌,灼燒滅菌

用于接種用的金屬工具;干熱滅菌用于能耐高溫的,需要保持干燥的

玻璃器皿等;高壓蒸汽滅菌用于培養(yǎng)基等.

③消毒的方法有煮沸消毒法,用于液體消毒;巴氏消毒法,用于

不耐高溫的液體;化學(xué)藥劑或紫外線消毒,用于物體表面的消毒。

4)微生物的純培養(yǎng)指的是防止外來雜菌入侵。

5)配制固體培養(yǎng)基的步驟:計(jì)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板

6)微生物接種的方法最常用的是平板劃線法和稀釋涂布平板法。

平板劃線法用于細(xì)菌的純化培養(yǎng),是通過接種環(huán)在瓊脂固體9培養(yǎng)基

表面連續(xù)劃線的操作。將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。

在數(shù)次劃線后培養(yǎng),可以分離到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的子

細(xì)胞群體,這就是純化的菌落。稀釋涂布平板法用于細(xì)菌的計(jì)數(shù),是

將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋,然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到

瓊脂固體培養(yǎng)基的表面,進(jìn)行培養(yǎng)。分為系列稀釋操作和涂布平板操

作兩步。

考點(diǎn)細(xì)化:

①平板冷凝后,要是有水滴滴到培養(yǎng)基上,會(huì)導(dǎo)致菌蔓延,這樣

就不能計(jì)數(shù),分離了。為防止冷凝水滴到培養(yǎng)基上,所以培養(yǎng)時(shí)平板

一定要倒置。

②接種操作每次劃線之前都要灼燒接種環(huán),是因?yàn)槊看尾僮鞫家?/p>

及時(shí)滅菌,以防污染雜菌。操作結(jié)束時(shí),仍然需要灼燒接種環(huán)的原因

是防止雜菌污染環(huán)境。

2.特定微生物的數(shù)量的測定

6)測定微生物數(shù)量的方法有顯微鏡直接計(jì)數(shù)、統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目。

3.培養(yǎng)基對(duì)微生物的選擇作用

7)在微生物學(xué)中,將允許特定種類的微生物生長,同時(shí)抑制或

阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基,稱做選擇培養(yǎng)基。例如:在選擇

培養(yǎng)基的配方中,將尿素作為培養(yǎng)基中唯一的氮源,原則上只有能夠

利用尿素的微生物才能夠生長。

考點(diǎn)細(xì)化:

①選擇培養(yǎng)基配置的原理是增加或減去某種成分,使要選擇的微

生物能生長,其它微生物不能生長。

②培養(yǎng)基中加入壹賽蜜可以分離出酵母菌和霉菌

③培養(yǎng)基中不加氮源可以分離出固氮微生物

三、多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增DNA片段

1.PCR:多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的簡稱,是一種體外迅速擴(kuò)增DNA片段

的技術(shù),它能以極少量的DNA為模板,在幾小時(shí)內(nèi)復(fù)制出上百萬份的

DNA拷貝。

2.擴(kuò)增方向:總是從子鏈的5,端向3,端延伸。

3.需要引物的原因:DNA聚合酶不能從頭合成DNA,而只能從引

物3,端延伸DNA鏈,因此DNA復(fù)制需要引物。

4.原理:熱變性原理,

5.條件:DNA模板,分別與兩條模板鏈相結(jié)合的兩種引物,脫

氧核昔酸,耐熱的TaqDNA聚合酶,同時(shí)控制溫度。

6.過程:變性(高溫9.4℃)、復(fù)性(低溫55℃)、延伸(中溫

72℃)

7.結(jié)果:DNA聚合酶只能特異地復(fù)制處于兩引物之間的DNA序

列,使這段固定長度的序列呈指數(shù)擴(kuò)增。

四、血紅蛋白的分離

1、實(shí)驗(yàn)原理:利用蛋白質(zhì)各種特性的差異,如分子的形狀和大

小、所帶電荷的性質(zhì)和多少、溶解度、吸附性質(zhì)和對(duì)其他分子的親和

力,分離不同種類的蛋白質(zhì)。

2、凝膠色譜法原理:根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量的大小分離蛋白質(zhì)的有效方

法。相對(duì)分子質(zhì)量小的分子要穿過多孔凝膠顆粒的內(nèi)部通道,路程長,

流動(dòng)慢;相對(duì)分子質(zhì)量大的分子直接通過凝膠顆粒的間隙,路程短,

流動(dòng)快。因此,最先流出的是相對(duì)分子質(zhì)量大的蛋白質(zhì)。

選修三現(xiàn)代生物科技

一、基因工程

1.基因工程的誕生

1)基因工程:按照人們的意愿,進(jìn)行嚴(yán)格的設(shè)計(jì),并通過體外DNA

重組和轉(zhuǎn)基因等技術(shù),從而創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和

生物產(chǎn)品。

2)基因工程誕生的理論基礎(chǔ)是在生物化學(xué)、分子生物學(xué)和微生

物學(xué)科的基礎(chǔ)上發(fā)展起來,技術(shù)支持有基因轉(zhuǎn)移載體的發(fā)現(xiàn)、工具酶

的發(fā)現(xiàn),DNA合成和測序儀技術(shù)的發(fā)明等。

2.基因工程的原理及技術(shù)

3)基因工程操作中用到了限制酶、DNA連接酶、運(yùn)載體

考點(diǎn)細(xì)化:

限制酶主要從原核生物生物中分離純化出來,這種酶在原核生物

中的作用是識(shí)別DNA分子的特定核昔酸序列,并且使每條鏈中特定

部位的兩個(gè)核昔酸之間的磷酸二酯鍵斷開。

①限制酶的特性是識(shí)別特定核昔酸序列,切割特定切點(diǎn)。限制

酶產(chǎn)生的末端有兩種:粘性末端和平末端。

②DNA連接酶與DNA聚合酶的作用部位是磷酸二酯鍵,二者在

作用上的區(qū)別為前者是恢

復(fù)被限制性內(nèi)切酶切開的兩個(gè)片段末端核甘酸之間的磷酸二酯

鍵,后者單個(gè)的核甘酸連接到DNA分子上。

③作為基因工程的載體應(yīng)該具備標(biāo)記基因、多個(gè)限制性內(nèi)切酶

切點(diǎn)、能夠在宿主細(xì)胞內(nèi)復(fù)制和穩(wěn)定存在等特點(diǎn)。

④常見的載體種類有質(zhì)粒、動(dòng)植物病毒、噬菌體

4)基因工程四步驟:目的基因的獲取、基因表達(dá)載體的構(gòu)建、

將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞、目的基因的檢測和表達(dá)。

考點(diǎn)細(xì)化:

①目的基因的獲取方法為根據(jù)基因的核甘酸序列、基因的功能、

基因在載體上的位置、基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物、以及基因的表達(dá)產(chǎn)物蛋白質(zhì)

等特性來獲取目的基因。

②基因文庫、基因組文庫、cDNA文庫的區(qū)別:含有某種生物不

同基因的許多DNA片段,導(dǎo)入受體菌的群體中儲(chǔ)存,各個(gè)受體菌體分

別含有這種生物的不同基因,稱之為基因文庫。如果含有一種生物所

有基因,叫做基因組文庫。只包含一種生物的一部分基因,這種基因

文庫叫做部分基因文庫,如cDNA文庫。

③基因重組操作中構(gòu)建基因表達(dá)載體的目的是將目的基因在受

體細(xì)胞中穩(wěn)定存在,并且遺傳給下一代,同時(shí)目的基因能夠表達(dá)和發(fā)

揮作用。

④一個(gè)完整的基因表達(dá)載體包括:目的基因、啟動(dòng)子、終止子、

標(biāo)記基因、復(fù)制原點(diǎn)。

⑤將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞、動(dòng)物細(xì)胞和微生物細(xì)胞的常用方

法分別是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、顯微注射法、Ga?*處理法。

⑥基因工程的受體細(xì)胞選擇,植物可以采用體細(xì)胞,動(dòng)物不能

用體細(xì)胞,一般采用受精卵細(xì)胞。因?yàn)槭芫丫哂腥苄浴?/p>

⑦當(dāng)受體細(xì)胞是大腸桿菌時(shí)常用Ca?+處理細(xì)胞,這樣做的目的是

使細(xì)胞處于一種能夠吸收周圍環(huán)境中的DNA分子的感受態(tài)細(xì)胞。

⑧目的基因的檢測:在分子水平上,利用放射性同位素等標(biāo)記

的含目的基因的DNA片段作為探針,檢測轉(zhuǎn)基因生物的DNA是否插入

了目的基因(DNA分子雜交技術(shù));同樣用標(biāo)記的目的基因作探針是否

轉(zhuǎn)錄出了mRNA(分子雜交技術(shù));目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)(抗原

-抗體雜交);

個(gè)體生物學(xué)水平鑒定(接種實(shí)驗(yàn))。

⑨目的基因的獲取、基因表達(dá)載體的構(gòu)建、目的基因的檢測和

表達(dá)一般需要堿基互補(bǔ)配對(duì)。將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞不需要堿基互

補(bǔ)配對(duì)

3.基因工程的應(yīng)用

5)在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上:主要用于提高農(nóng)作物的抗逆能力(如:抗除

草劑、抗蟲、抗病、抗干旱和抗鹽堿等),以及改良農(nóng)作物的品質(zhì)和

利用植物生產(chǎn)藥物等方面。[

6)基因治療不是對(duì)患病基因的修復(fù),基因檢測所用的DNA分子

只有處理為單鏈才能與被檢測的樣品,按堿基配對(duì)原則進(jìn)行雜交。

二、克隆技術(shù)

1.植物的組織培養(yǎng)

細(xì)胞全能性:具有某種生物全部遺傳信息的任何一個(gè)細(xì)胞,都具

有發(fā)育成完整生物體的潛能。

考點(diǎn)細(xì)化:

①都具有該生物全部遺傳信息,因此從理論上講,生物體的每一

個(gè)活細(xì)胞都應(yīng)該具有全能性

②細(xì)胞在生物體內(nèi)沒有表現(xiàn)出全能性的原因是基因選擇性表

達(dá)。

③植物細(xì)胞的全能性得以實(shí)現(xiàn)的條件是離體,合適的營養(yǎng)和激

素,無菌操作。

④在生物的所有的細(xì)胞中,受精卵細(xì)胞的全能性最高。

3)植物組織培養(yǎng):在無菌和人工控制的條件下,將離體的植物

器官、組織、細(xì)胞,培養(yǎng)在人工配置的培養(yǎng)基上,給予適宜的培養(yǎng)條

件,誘導(dǎo)其產(chǎn)生愈傷組織、叢芽,最終形成完整的植株。

考點(diǎn)細(xì)化:

①已分化的細(xì)胞經(jīng)過誘導(dǎo)后,失去其特有的結(jié)構(gòu)和功能而轉(zhuǎn)變

成未分化細(xì)胞的過程叫脫分化。

②揖分化是愈傷組織繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng),重新分化出根或芽等器官。

③愈傷組織細(xì)胞排列疏松而無規(guī)則,高度液泡化的呈不定型狀

態(tài)的薄壁細(xì)胞。

④植物組織培養(yǎng)時(shí)培養(yǎng)基的成分有礦質(zhì)元素、蔗糖、維生素、

植物激素、有機(jī)添加物,與動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)相比需要蔗糖、植物激素,

不需要?jiǎng)游镅濉?/p>

⑤在植物組織培養(yǎng)脫分化過程中,需要植物激素。

⑥植物組織培養(yǎng)全過程中都需要無菌,愈傷組織之前不需要光

八、、

4)植物組織培養(yǎng)技術(shù)的用途:微型繁殖、作物脫毒、制造人工

種子、單倍體育種、細(xì)胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)。

考點(diǎn)細(xì)化:

①用植物體的莖尖、根尖來獲得無病毒植物

②人工種子中人工胚乳相當(dāng)于大豆種子的子葉,人工種子與正常

種子相比發(fā)芽率高。

③轉(zhuǎn)基因植物的培育需要植物組織培養(yǎng)

5)將不同種植物的體細(xì)胞,在一定條件下融合成雜種細(xì)胞,并

把雜種細(xì)胞培育成新的植物體叫做植物體細(xì)胞雜交。

考點(diǎn)細(xì)化:

①用纖維素酶、果膠酶去除細(xì)胞壁獲得原生質(zhì)體

②物理方法:電刺激、振蕩、離心;化學(xué)方法:聚乙二醇(PEG)

③植物體細(xì)胞雜交完成的標(biāo)志是新細(xì)胞壁的形成

④融合后的雜種細(xì)胞通過植物組織培養(yǎng)才能發(fā)育成完整的植物

6)植物體細(xì)胞雜交這一育種方法的最大優(yōu)點(diǎn)是克服遠(yuǎn)緣雜交不

親和障礙

2.動(dòng)物的細(xì)胞培養(yǎng)與體細(xì)胞克隆

7)動(dòng)物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段有動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、動(dòng)物細(xì)胞核

移植、動(dòng)物細(xì)胞融合、生產(chǎn)單克隆抗體、胚胎移植等

8)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)過原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)

考點(diǎn)細(xì)化:

①動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液的成分有糖、氨基酸、促生長因子、無機(jī)鹽、

微量元素等

②動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)用液體培養(yǎng)基,植物細(xì)胞培養(yǎng)用固體培養(yǎng)基,

培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞通常取自胚胎、幼齡動(dòng)物的組織器官

②動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)的氣體環(huán)境是95%的空氣+5%二氧化碳的混合

氣體,C02起到調(diào)節(jié)PH值作用

③使用胰蛋白醛處理使動(dòng)物組織分散成單個(gè)細(xì)胞

④動(dòng)物組織處理使細(xì)胞分散后的初次培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)

⑤貼滿瓶壁的細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象,需要重新用胰蛋白酶

等處理,然后分瓶繼續(xù)培養(yǎng),讓細(xì)胞繼續(xù)增殖。這樣的培養(yǎng)過程通常

被稱為傳代培養(yǎng)。

3.細(xì)胞融合與單克隆抗體

9)動(dòng)物細(xì)胞融合與植物原生質(zhì)體融合的區(qū)別:操作步驟不同:

植物原生質(zhì)體融合需要先去除細(xì)胞壁,動(dòng)物細(xì)胞無細(xì)胞壁.;誘導(dǎo)方法

不同:動(dòng)物細(xì)胞融合可以用物理、化學(xué)和生物(滅活的病毒)三種方

法,植物原生質(zhì)體融合只能用物理、化學(xué)方法;最終目的不同:植物

原生質(zhì)體融合最終是為了獲得雜種植株,動(dòng)物細(xì)胞融合最主要目的是

獲得單克隆抗體。

10)單克隆抗體與血清抗體相比特異性強(qiáng)、靈敏度高并可大量制

11)熟悉單克隆抗體制備過程。

考點(diǎn)細(xì)化

①生產(chǎn)雜交瘤細(xì)胞要用B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合

②注射相應(yīng)抗原后,從小鼠脾臟中提取出B淋巴細(xì)胞

③雜交瘤細(xì)胞既能大量增殖,又能產(chǎn)生專一抗體。

④制備單克隆抗體過程中需要兩次篩選

⑤體外條件下做大規(guī)模培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞或者注射到小鼠腹腔內(nèi)

增殖,從細(xì)胞培養(yǎng)液或者小鼠腹水內(nèi)就可以提取出大量的里克隆抗

體。

聯(lián)想拓展:

①雜交瘤細(xì)胞融合時(shí)的B淋巴細(xì)胞為經(jīng)相應(yīng)抗原免疫過的B淋

巴細(xì)胞

②一種B細(xì)胞只能產(chǎn)生一種抗體

③A和B兩種細(xì)胞融合,只考慮兩兩融合,融合方式有只、BB、

AB融合三種

④制備單克隆抗體過程中需要經(jīng)過兩次篩選?

第一次:特定的選擇性培養(yǎng)基。第二次:抗體檢測

13)單克隆抗體在多種人類疾病及動(dòng)植物病害的診斷和病原鑒定

中發(fā)揮重要作用。主要用于癌癥治療,也有少量用于其它疾病治療。

拓展:生物導(dǎo)彈中,單抗的作用是導(dǎo)向作用,能將藥物定向帶到

癌細(xì)胞所在位置,在原位殺死癌細(xì)胞。既不損傷正常細(xì)胞,又減少了

用藥量。

14)體細(xì)胞核移植技術(shù)中的去核卵母細(xì)胞能夠激發(fā)核的全能性,

選用的卵母細(xì)胞應(yīng)該是培養(yǎng)到減數(shù)第二次分裂中期的卵母細(xì)胞

15)核移植技術(shù)獲得的動(dòng)物因?yàn)橛屑?xì)胞質(zhì)基因的影響、生活環(huán)境

的差異、可能發(fā)生基因突變?cè)斐珊艘浦矂?dòng)物與供核動(dòng)物性狀不完全相

同。

三、胚胎工程

1.動(dòng)物胚胎發(fā)育的基本過程與胚胎工程的理論基礎(chǔ)

動(dòng)物胚胎發(fā)育的基本過程:受精卵一2細(xì)胞一4細(xì)胞一8細(xì)胞;桑

意胚一囊胚一原腸胚

胚胎工程的理論基礎(chǔ):哺乳動(dòng)物受精和早期胚胎發(fā)育規(guī)律

1)精子和卵子的產(chǎn)生過程中精子變形,卵子沒有。卵泡的形成

和在卵巢內(nèi)的儲(chǔ)備,是在出生前完成的。

考點(diǎn)細(xì)化:

①精細(xì)胞產(chǎn)生后要經(jīng)過頂體形成、尾部發(fā)育、細(xì)胞質(zhì)濃縮最終精

子形成

②卵子的發(fā)生在胎兒時(shí)期就完成了卵泡的形成和在卵巢內(nèi)的儲(chǔ)

備,排卵前后進(jìn)行了減數(shù)第一次分裂,減n分裂在精子和卵細(xì)胞結(jié)合

過程中完成。

2)精、卵細(xì)胞結(jié)合前各自要發(fā)生哪些生理過程?(提示:在受

精前精子要在雌性動(dòng)物生殖道內(nèi)獲能;排出的卵子要在輸卵管中進(jìn)一

步成熟到減n中期才具備受精能力)-

3)受精過程:精子獲能一卵子準(zhǔn)備階段一受精。卵子防止多精

入卵的屏障:透明帶反應(yīng)和卵黃膜封閉作用

拓展:

①桑柩胚一般指32個(gè)左右的細(xì)胞數(shù)目的胚胎。

②胚胎分割選用的胚胎最好處于桑根胚或者囊胚時(shí)期,因?yàn)槿?/p>

能性較高

6)胚胎工程包含的技術(shù):體外受精技術(shù)、胚胎早期培養(yǎng)技術(shù)、

胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)、胚胎分割技術(shù)、胚胎移植技術(shù)

7)獲得精子必須經(jīng)獲能處理后才能進(jìn)行體外受精

8)采集卵子前一般要對(duì)雌體進(jìn)行促性腺激素處理,從較大體型

動(dòng)物卵巢中采集卵母細(xì)胞都要經(jīng)過體外人工培養(yǎng)成熟后,才能與獲能

精子受精。

9)胚胎的早期培養(yǎng)培養(yǎng)液還需要添加激素和血清

10)獲得的早期胚胎有向受體移植、冷凍保存兩種去向

2.胚胎干細(xì)胞的移植

H)早期胚胎或原始性腺中分離出來的一類細(xì)胞可以稱為胚胎干

細(xì)胞

12)胚胎干細(xì)胞在形態(tài)上:體積小、細(xì)胞核大、核仁明顯;在功

能上,具有發(fā)育的全能性。另外在體外培養(yǎng)的條件下,胚胎干細(xì)胞可

以增殖而不發(fā)生分化。對(duì)它可以進(jìn)行冷凍保存,也可進(jìn)行遺傳改造

13)干

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