DB13-T 5977-2024 柴胡根腐病抗性鑒定技術(shù)規(guī)程

ICS65.020.0113DB13/T5977—2024I本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)本文件由河北省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出。本文件起草單位：河北工程大學(xué)、邯鄲市農(nóng)業(yè)綜合行政執(zhí)法支隊(duì)、河北農(nóng)業(yè)大學(xué)、河北省農(nóng)林本文件主要起草人：李朋朋、魏學(xué)軍、劉會(huì)芬、李浩然、劉極一、李生輝、李倩、金池、劉蕾、董金皋、李耀發(fā)。DB13/T5977—20241本文件規(guī)定了柴胡根腐病抗性鑒定的接種體制備、抗性鑒定圃設(shè)置、接種、病情調(diào)查、抗性評(píng)本文件適用于柴胡根腐病的抗性鑒定。2規(guī)范性引用文件本文件沒有規(guī)范性引用文件。3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4接種體制備4.1病原物分離、鑒定4.1.1利用組織分離法和單胞分離技術(shù)，從患病植株根部典型病斑上分離、純化根腐病病原菌。4.1.2分離物進(jìn)行形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)鑒定、柯赫氏法則驗(yàn)證及致病性測定。4.1.3純化菌株4℃低溫保存?zhèn)溆谩?.2接種體繁殖4.2.1將PDA平板培養(yǎng)的病原菌接種于經(jīng)高壓滅菌的高粱粒培養(yǎng)基，25℃黑暗培養(yǎng)5d～7d后，菌絲布滿高粱粒。4.2.2用滅菌水淘洗高粱粒過濾后制成孢子懸浮液。4.2.3懸浮液中分生孢子濃度調(diào)至每毫升1×106個(gè)。5抗性鑒定圃設(shè)置5.1鑒定圃鑒定圃應(yīng)具備良好的自然發(fā)病條件，周邊設(shè)置保護(hù)行。5.2鑒定設(shè)計(jì)鑒定材料隨機(jī)排列或順序排列，重復(fù)3次，每重復(fù)種植兩行，設(shè)1組已知感病對(duì)照材料。5.3種植要求鑒定小區(qū)行長3m，行距15cm～20cm，株距7cm～10cm。土壤肥力水平和耕作管理與大田生產(chǎn)相6接種6.1接種時(shí)期選擇二年生柴胡，6月上旬接種。6.2接種方法DB13/T5977—20242選用2mL注射器分4次，距植株周圍2cm土壤注射濃度為每毫升1×106個(gè)的分生孢子懸浮液，每株6.3接種前后的田間管理接種前3d應(yīng)進(jìn)行田間澆灌，或有效降雨后接種，接種后每周澆灌一次。期間不使用殺菌劑。施肥和除草同大田管理。7病情調(diào)查7.1調(diào)查時(shí)間接種40d開始調(diào)查，2d內(nèi)完成。7.2調(diào)查方法每個(gè)重復(fù)隨機(jī)調(diào)查30株柴胡植株的根部進(jìn)行發(fā)病情況調(diào)查，記錄病級(jí)，病級(jí)的劃分按表1進(jìn)行。表1柴胡抗根腐病鑒定病情級(jí)別劃分病情級(jí)別癥狀描述0根部正常、無病斑1根部病斑面積1/4以下234根部病斑面積3/4以上7.3病情指數(shù)計(jì)算按式（1）進(jìn)行病情指數(shù)計(jì)算。DI病情指數(shù)；s各病情級(jí)別的代表數(shù)值；n各病情級(jí)別的植株數(shù)，單位為株；N調(diào)查總株數(shù)，單位為株；S最高病情級(jí)別的代表數(shù)值。8抗性評(píng)價(jià)8.1鑒定有效性判別若感病對(duì)照品種達(dá)到感病級(jí)別（病情指數(shù)≥20.01），該批次鑒定有效。DB13/T5977—202438.2