TGDFDTAEC 08-2024 食品中禁用脂溶性合成色素的測(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

ICS67.050CCSC53TB廣東省食品藥品審評(píng)認(rèn)證技術(shù)協(xié)會(huì)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)Determinationofprohibitedfat-solublesyntheticcolourinfoodsbyliquidchromatography-tandemmassspectrometricmethodIT/GDFDTAEC08—2024前言 2規(guī)范性引用文件 3術(shù)語(yǔ)和定義 4方法原理 5試劑和材料 6儀器和設(shè)備 7分析步驟 8結(jié)果計(jì)算和表述 9精密度 附錄A（資料性）禁用脂溶性合成色素的定量離子、定性離子、去簇電壓、碰撞電壓和保留時(shí)間.5附錄B（資料性）禁用脂溶性合成色素的中英文名稱、CAS號(hào)和化學(xué)分子式 附錄C（資料性）禁用脂溶性合成色素定量離子提取流圖 7T/GDFDTAEC08—2024本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由廣州市食品檢驗(yàn)所、廣州匯標(biāo)檢測(cè)技術(shù)中心提出。本文件由廣東省食品藥品評(píng)審認(rèn)證技術(shù)協(xié)會(huì)歸口。本文件起草單位：廣州市食品檢驗(yàn)所、廣州匯標(biāo)檢測(cè)技術(shù)中心、華測(cè)檢測(cè)認(rèn)證集團(tuán)股份有限公司、廣州檢驗(yàn)檢測(cè)認(rèn)證集團(tuán)有限公司。本文件主要起草人：毛新武、周慶瓊、楊群華、梁友、陳若璇、戚平、林子豪、何婉琪、邱險(xiǎn)輝、吳滋靈、葉丹、許匯成、徐政慧、張競(jìng)雯。1T/GDFDTAEC08—2024食品中禁用脂溶性合成色素的測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法本文件規(guī)定了食品中禁用脂溶性合成色素（見(jiàn)附錄A）的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定方法。本文件適用于辣椒粉、調(diào)味醬、豆制品、熟肉制品、鮮蛋等食品中32種禁用脂溶性合成色素的測(cè)定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB/T33087儀器分析用高純水規(guī)格及試驗(yàn)方法3術(shù)語(yǔ)和定義本文件沒(méi)有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。4原理試樣經(jīng)1%乙酸乙腈溶液提取，C18分散萃取小管凈化后，利用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定，內(nèi)標(biāo)法或外標(biāo)法定量。5試劑和材料除另有說(shuō)明，本實(shí)驗(yàn)使用試劑均為分析純，水為GB/T6682中規(guī)定的一級(jí)水或GB/T33087中規(guī)定的高純水。5.1試劑5.1.1甲醇（CH3OH）：色譜純。5.1.2乙腈（C2H3N）：色譜純。5.1.3乙酸（CH3COOH）：質(zhì)譜純。5.1.4三氯甲烷（CHCl3）。5.1.5十八烷基硅烷鍵合硅膠（C18材料）：粒徑40μm～60μm。5.1.61%乙酸乙腈溶液：移取1mL乙酸于100mL容量瓶中，用乙腈定容到刻度。5.2標(biāo)準(zhǔn)品32種脂溶性合成色素及4種蘇丹紅內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)品：參見(jiàn)附錄B，純度≥95%。5.3標(biāo)準(zhǔn)溶液配制5.3.1標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（1000mg/L）：分別準(zhǔn)確稱取經(jīng)折算相當(dāng)于50mg（精確到0.1mg）的色素標(biāo)準(zhǔn)品，用三氯甲烷或乙腈溶解后，轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶中，用甲醇定容到刻度。在—18℃下避光保存，保存期6個(gè)月。5.3.2混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液A組（1mg/L）：根據(jù)附錄A化合物的濃度分組，準(zhǔn)確移取0.1mL的A組色素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液于100mL容量瓶中，用甲醇定容到刻度。在—18℃下保存，保存期3個(gè)月。5.3.3混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液B組（10mg/L根據(jù)附錄A化合物的濃度分組，準(zhǔn)確移取1mL的B組2T/GDFDTAEC08—2024色素單標(biāo)儲(chǔ)備溶液于100mL容量瓶中，用甲醇定容到刻度。在—18℃下保存，保存期3個(gè)月。5.3.4內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液（1000mg/L分別準(zhǔn)確稱取經(jīng)折算相當(dāng)于50mg（精確到0.1mg）的內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)品，置50mL容量瓶中，用三氯甲烷或乙腈溶解后，甲醇定容到刻度。在—18℃下避光保存，保存期6個(gè)月。5.3.5混合內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液（10mg/L分別準(zhǔn)確移取1mL的內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備溶液于100mL容量瓶中，用甲醇定容到刻度。在—18℃下保存，保存期3個(gè)月。5.3.6混合標(biāo)準(zhǔn)中間液A組（0.1mg/L）：準(zhǔn)確吸取1mL的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液A組于10mL容量瓶中，用甲醇定容到刻度。臨用現(xiàn)配。5.3.7混合標(biāo)準(zhǔn)中間液B組（1.0mg/L準(zhǔn)確吸取1mL的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液B組于10mL容量瓶中，用甲醇定容到刻度。臨用現(xiàn)配。5.3.8混合內(nèi)標(biāo)中間液（0.01mg/L）：準(zhǔn)確吸取一定量的混合內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備溶液，用甲醇稀釋、定容至刻度。臨用現(xiàn)配。5.3.9混合標(biāo)準(zhǔn)工作液：根據(jù)需要，用甲醇將混合標(biāo)準(zhǔn)中間液和混合內(nèi)標(biāo)中間稀釋成所需的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。5.4材料5.4.1十八烷基硅烷鍵合硅膠（C18材料）：粒徑40μm～60μm。5.4.2疏水聚四氟乙烯微孔濾膜：0.22μm。6儀器和設(shè)備6.1液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀（LC-MS/MS）：配有電噴霧電離源（ESI）。6.2分析天平：感量為0.1mg、0.01g。6.3離心機(jī)：轉(zhuǎn)速不低于8000r/min。6.4超聲波清洗器。6.5勻漿機(jī)。6.6食物粉碎機(jī)。7分析步驟7.1試樣制備辣椒粉、調(diào)味醬混合均勻，豆制品、熟肉制品用食物粉碎機(jī)攪碎混勻，鮮蛋煮熟后取蛋黃用食物粉碎機(jī)攪碎混勻，制備好的試樣密封冷藏避光保存，備用。7.2試樣提取稱取2g（準(zhǔn)確至0.01g）試樣于50mL離心管中，加入混合內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液0.05mL，加入10mL的1%乙酸乙腈溶液，超聲5min，在8000r/min下離心5min，重復(fù)提取一遍，合并上清液。取1mL上清液，用甲醇定容至5mL。準(zhǔn)確移取2mL提取液至含有50mgC18材料的凈化管中，渦旋1min，在8000r/min下離心5min，上清液過(guò)0.22μm濾膜，待測(cè)。每個(gè)樣品做2個(gè)平行測(cè)試，同時(shí)做空白測(cè)試。7.3儀器參考條件7.3.1液相色譜參考條件a)色譜柱：C18柱，100mm×2.1mm，1.7μm，或同等性能的色譜柱；b)流動(dòng)相：A為0.1%乙酸水溶液，B為0.1%乙酸甲醇溶液；梯度洗脫條件見(jiàn)表1；c)柱溫：40℃;d)進(jìn)樣量：2μL；e)流速：0.3mL/min。表1液相色譜梯度洗脫條件3T/GDFDTAEC08—2024557.3.2質(zhì)譜參考條件a)離子源類型：電噴霧電離源（ESI）；b)掃描方式：正離子電離模式；c)電噴霧電壓：2.5kV；d)離子源溫度：150℃;e)脫溶劑氣溫度：500℃;f)脫溶劑氣流速：1000L/h；g)錐孔氣流速：150L/h；h)定性離子對(duì)、定量離子對(duì)、去簇電壓和碰撞電壓參見(jiàn)附錄A。7.4試樣溶液的測(cè)定7.4.1定性分析在同樣測(cè)試條件下，試樣溶液中脂溶性合成色素的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)溶液相應(yīng)峰的保留時(shí)間相對(duì)偏差在±25%以內(nèi)，且檢測(cè)到的相對(duì)離子豐度，應(yīng)當(dāng)與濃度相當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)溶液相對(duì)離子豐度一致。其允許偏差應(yīng)符合表2的要求。表2定性確證時(shí)相對(duì)離子豐度的最大允許偏差>50±20±25±30±507.4.2定量測(cè)定取試樣溶液和相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液，作單點(diǎn)或多點(diǎn)校準(zhǔn)，以目標(biāo)化合物特征離子質(zhì)量色譜峰面積外標(biāo)法定量，或以目標(biāo)化合物與內(nèi)標(biāo)物特征離子峰面積比值內(nèi)標(biāo)法定量。標(biāo)準(zhǔn)工作液及試樣溶液中的脂溶性合成色素響應(yīng)值應(yīng)在儀器檢測(cè)的線性范圍內(nèi)。在上述色譜-質(zhì)譜條件下，標(biāo)準(zhǔn)溶液特征離子質(zhì)量色譜圖見(jiàn)附錄B。注：蘇丹紅I、蘇丹紅II、蘇丹紅III、蘇丹紅IV分別7.5空白試驗(yàn)除不加試樣外，采用完全相同的測(cè)定步驟進(jìn)行測(cè)定。4T/GDFDTAEC08—20248結(jié)果計(jì)算和表述8.1外標(biāo)法試樣中各色素含量按式（1）計(jì)算：式中：X——樣品中被測(cè)組分含量，單位為毫克每千克（mg/kg）；CS——標(biāo)準(zhǔn)溶液中被測(cè)組分質(zhì)量濃度，單位為納克每毫升（ng/mLA——樣品溶液中被測(cè)組分峰面積；V——樣品定容體積，單位為毫升（mL）；m——樣品質(zhì)量，單位為克（g）；AS——標(biāo)準(zhǔn)溶液中被測(cè)組分峰面積；1000——換算系數(shù)。8.2內(nèi)標(biāo)法試樣中各色素含量按式（2）計(jì)算：式中：X——樣品中被測(cè)組分含量，單位為毫克每千克（mg/kg）；CS——標(biāo)準(zhǔn)溶液中被測(cè)組分質(zhì)量濃度，單位為納克每毫升（ng/mLR——樣品溶液中被測(cè)組分與相應(yīng)內(nèi)標(biāo)物峰面積比值；V——樣品定容體積，單位為毫升（mL）；m——樣品質(zhì)量，單位為克（g）；RS——標(biāo)準(zhǔn)溶液中被測(cè)組分與相應(yīng)內(nèi)標(biāo)物峰面積比值；1000——換算系數(shù)。計(jì)算結(jié)果保留2位有效數(shù)字。注：蘇丹紅I、蘇丹紅II、蘇丹紅III、蘇丹紅IV分別9精密度其他在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的20%。本方法中，當(dāng)樣品取樣量為2g，定容體積為5mL時(shí)，32種禁用脂溶性合成色素的檢出限為0.05mg/kg（A組化合物）、0.50mg/kg（B組化合物）。5T/GDFDTAEC08—2024禁用脂溶性合成色素的定量離子、定性離子、去簇電壓、碰撞電壓和保留時(shí)間禁用脂溶性合成色素的定量離子、定性離子、去簇電壓、碰撞電壓和保留時(shí)間，見(jiàn)表A.1。表A.1禁用脂溶性合成色素的定量離子、定性離子、去簇電壓、碰撞電壓和保留時(shí)間1234567896T/GDFDTAEC08—2024禁用脂溶性合成色素的中英文名稱、CAS號(hào)和化學(xué)分子式禁用脂溶性合成色素的中英文名稱、CAS號(hào)和化學(xué)分子式，見(jiàn)表B.1。表B.1禁用脂溶性合成色素的中英文名稱、CAS號(hào)和化學(xué)分子式1auramineOC17H22ClN32C23H24Cl2N23basicblue41C20H26N4O6S24basicblue7C33H40N3Cl5C27H34N2O4S6C52H54N4O127C22H23ClN28C28H27ClN29basicred46C18H23BrN6C15H17ClN4C19H17N3.HClbasicviolet2C22H24ClN3C19H21N5O4S2C20H25N3O4SC25H30ClN3C16H19N3C16H19N5O4SC15H11NO2C15H12N2O3C15H11NO2C31H42ClN3pararedC16H11N3O3C28H31ClN2O3rhodamineBC28H31ClN2O3C17H15NO2C12H10N2O2C16H12N2OC18H16N2OC22H16N4OC24H20N4OC14H15N3C17H19ClN2SC16H7N2OD5C18H10D6N2OC22H10D6N4OC24H14D6N4O7T/GDFDTAEC08—2024（資料性）禁用脂溶性合成色素特征離子質(zhì)量色譜圖禁用脂溶性合成色素特征離子質(zhì)量色譜圖（A組：10ng/mL；B組：100ng/mL），見(jiàn)圖C.1。std10ppb20211112-326:MRMof22C44%%TimeTime1.堿性嫩黃Ostd10ppb20211112-326:MRMof22ChannelsES+4.68100363.4>347.3(B007)1.37e64.68100Time0Time-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.002.堿性藍(lán)1std10ppb20211112-325:M5.91478.3>434.5(B021)%% Time3.堿性藍(lán)7std10ppb20211112-327:M44.38e64%%Time4.堿性藍(lán)41T/GDFDTAEC08—2024std10ppb20211112-325.365.36%%Time5.堿性綠1std10ppb20211112-326:MRMof22C4.684.47e64.68%%TimeTime6.堿性綠4std10ppb20211112-326:MRMof22C44%% 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