TCAICC 05-2023 中藥材中甲拌磷的快速檢測(cè) 膠體金免疫層析法

全聯(lián)農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)商會(huì)發(fā)布備案號(hào)：送審稿2023-12-31發(fā)布I 2規(guī)范性引用文件 3術(shù)語(yǔ)和定義 4原理 5試劑與材料 6儀器與設(shè)備 7分析步驟 8結(jié)果判定 9結(jié)果確認(rèn) 10性能指標(biāo) 附錄A（規(guī)范性）快速檢測(cè)方法性能指標(biāo)計(jì)算 本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由全聯(lián)農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)商會(huì)提出。本文件起草單位：全聯(lián)農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)商會(huì)、北京勤邦科技股份有限公司、西北農(nóng)林科技大學(xué)、寶雞市婦幼保健院本文件主要起草人：郭樹(shù)、王兆芹、萬(wàn)宇平、朱亮亮、呂欣、王欣、趙帆、魏力杰、劉飄雪、杜玲本文件為首次發(fā)布。1中藥材中甲拌磷的快速檢測(cè)膠體金免疫層析法本文件規(guī)定了中藥材中甲拌磷的膠體金免疫層析快速檢測(cè)方法。本文件適用于黨參、黃芪、麥芽、薏苡仁等中藥材中甲拌磷的快速定性測(cè)定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。《中國(guó)藥典》2020年版第四部0211藥材和飲片取樣法GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法國(guó)市監(jiān)食檢規(guī)〔2023〕1號(hào)市場(chǎng)監(jiān)管總局關(guān)于規(guī)范食品快速檢測(cè)使用的意見(jiàn)3術(shù)語(yǔ)和定義本文件沒(méi)有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。4原理本方法采用競(jìng)爭(zhēng)抑制免疫層析原理。樣品中的甲拌磷經(jīng)提取后與膠體金標(biāo)記的特異性抗體結(jié)合，抑制了抗體和試紙條中檢測(cè)線（T線）上抗原的結(jié)合，從而導(dǎo)致檢測(cè)線顏色深淺的變化。通過(guò)檢測(cè)線與質(zhì)控線（C線）顏色深淺比較，對(duì)樣品中甲拌磷進(jìn)行定性判定。5試劑與材料除另有規(guī)定外，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的二級(jí)水。5.1試劑5.1.1甲醇（CH3OH）。5.1.2稀釋液：由膠體金免疫層析試紙條配套提供，或按照其說(shuō)明書配制。5.1.3參考物質(zhì)：甲拌磷參考物質(zhì)的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號(hào)、分子式、相對(duì)分子質(zhì)量見(jiàn)表1，純度≥98%。表1甲拌磷參考物質(zhì)的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號(hào)、分子式、相對(duì)分子質(zhì)量C7H17O2PS325.2溶液配制5.2.1甲拌磷標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（100μg/mL）：準(zhǔn)確稱取甲拌磷參考物質(zhì)（5.1.3）1mg（精確至0.01mg），置于小燒杯中，用甲醇（5.1.1）溶解，定量轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶中，再用甲醇（5.1.1）定容，搖勻，配制成濃度為100μg/mL的甲拌磷標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。-20℃避光保存，有效期6個(gè)月。5.2.2甲拌磷標(biāo)準(zhǔn)工作液（1μg/mL精密移取甲拌磷標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（100μg/mL5.2.1）0.1mL，置于10mL容量瓶中，用甲醇（5.1.1）定容，搖勻，配制成濃度為1μg/mL的甲拌磷標(biāo)準(zhǔn)工作液。臨用新配。5.3材料甲拌磷膠體金免疫層析試紙條，適用基質(zhì)為中藥材。需在陰涼、干燥、避光條件下保存。6儀器與設(shè)備6.1電子天平：感量為0.01g和0.01mg。6.2均質(zhì)器。6.3離心機(jī)。6.4氮吹儀。6.5渦旋儀。6.6移液器：10μL～200μL、100μL～1000μL。6.7迷你金屬浴。6.8膠體金讀數(shù)儀（可選）。7分析步驟7.1試樣制備取適量有代表性樣品，充分均質(zhì)混勻。7.2試樣提取稱取1g試樣（精確至0.01g）放入離心管中，加入3mL甲醇（5.1.1），上下振蕩30s，3000r/min以上離心3min；取1.0mL上清液至離心管中，50~60℃水浴氮?dú)饬飨麓蹈?；加?.5mL稀釋液（5.1.2），渦動(dòng)20s后即為待測(cè)液。7.3測(cè)定步驟測(cè)試前，將未開(kāi)封的試紙條恢復(fù)至室溫。吸取100μL樣品待測(cè)液于試紙條的加樣孔中，室溫反應(yīng)10min后，直接進(jìn)行結(jié)果判定。7.4質(zhì)控試驗(yàn)3通過(guò)對(duì)比質(zhì)控線(C線)和檢測(cè)線(T線)的顏色深淺進(jìn)行結(jié)果判定。目視判定示質(zhì)控線(C線)顯色，檢測(cè)線(T線)顏色深于質(zhì)控線(C線)或與質(zhì)控線(C線)顏色質(zhì)控線(C線)顯色，檢測(cè)線(T線)顏色淺于質(zhì)控線(C線)或不顯色，表明樣品中甲無(wú)效陰性陽(yáng)性4空白試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果應(yīng)為陰性，加標(biāo)質(zhì)控試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果應(yīng)為陽(yáng)性。9結(jié)果確認(rèn)當(dāng)檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性時(shí)，采用參比方法進(jìn)行確證。10性能指標(biāo)10.1檢出限：0.02mg/kg。10.2靈敏度：≥95%。10.3特異性：≥90%。10.4假陰性率：≤5%。10.5假陽(yáng)性率：≤10%。10.6交叉反應(yīng)率：與甲拌磷砜和甲拌磷亞砜交叉反應(yīng)率為100%，與三唑磷交叉反應(yīng)率≤本方法所述試劑、試紙條信息及操作步驟是為給方法使用者提供方便，在使用本方法時(shí)不做限定。方法使用者應(yīng)使用經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的滿足本方法規(guī)定的各項(xiàng)性能指標(biāo)的試劑、試紙條。本方法參比方法為《中國(guó)藥典》2020年版第四部2341農(nóng)藥殘留量測(cè)定法。5（規(guī)范性）快速檢測(cè)方法性能指標(biāo)計(jì)算快速檢測(cè)方法各個(gè)性能指標(biāo)計(jì)算方法見(jiàn)表A.1。表A.1快速檢測(cè)方法性能指標(biāo)計(jì)算方法N11N12N1.＝N11＋N12N21N22N2.＝N21＋N22N.1＝N11＋N21N.2＝N12＋N22N＝N1.＋N2.或N.1＋N.2＋＝pfN12/N1.×100＝100－靈敏度pf