THBIQA 0008-2024 人體血液中卡瑞利珠藥物含量的測(cè)定 高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

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T/HBIQA河北省檢驗(yàn)檢疫學(xué)會(huì)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)T/HBIQA0008—2024人體血液中卡瑞利珠藥物含量的測(cè)定高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法DeterminationofcamrelizumabinhumanbloodbyHPLC-MS/MS2024-08-15發(fā)布 2024-10-15實(shí)施河北省檢驗(yàn)檢疫學(xué)會(huì)發(fā)布T/HBIQA0008T/HBIQA0008—2024前 言本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由河北省檢驗(yàn)檢疫學(xué)會(huì)提出并歸口。本文件起草單位：河北省藥品醫(yī)療器械檢驗(yàn)研究院、河北大學(xué)。本文件主要起草人：李揮、宋莉、李怡霖、梁艷、劉亞楠。T/HBIQA0008T/HBIQA0008—2024PAGEPAGE1人體血液中卡瑞利珠藥物含量的測(cè)定高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法范圍本文件規(guī)定了人體血液中卡瑞利珠藥物含量的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)方法。本文件適用于人體血液中卡瑞利珠藥物含量的測(cè)定。規(guī)范性引用文件（包括所有的修改單適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法。術(shù)語(yǔ)和定義本文件沒(méi)有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。原理100mM100mMDTT200mMIAM后酶解過(guò)夜，進(jìn)行液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定，外標(biāo)法定量。試劑和材料試劑和材料除另有規(guī)定外，試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。甲醇：色譜純。乙腈：色譜純。甲酸：色譜純。100mM158.1mg（0.0120mL100mMDTT154.3）1540.0110mL100mM的碳酸氫銨溶液（5.1.4）定容至刻度。200mMIAM185.0）3700.0110mL100mM的碳酸氫銨溶液（5.1.4）定容至刻度。1mg/mL胰酶溶液。98%（CAS號(hào)：1798286-48-2）。1mg（0.01mg）1.5mL500μL100mM碳酸氫銨溶液（5.1.4），配制成卡瑞利珠的儲(chǔ)備溶液，于-20℃保存至分析。0.1%（體積分?jǐn)?shù)）1.0mL1L量瓶中，用水定容至刻度，混勻。儀器設(shè)備液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：配備電噴霧離子源（ESI）。恒溫水浴鍋。渦旋振蕩器。電子分析天平（0.01mg）。高速冷凍離心機(jī)（22000rpm）。試樣制備4℃3000r/min10min，取管內(nèi)上清液分裝，-80℃存待測(cè)。試驗(yàn)步驟試樣預(yù)處理取100μ7于1.5L100μ2mn，在17000的條件下冷凍離心20200μL100mM（5.1.4）100mMDTT556℃下孵育30200mMIAM溶液（5.1.6）適量，使終濃度為10mM，避光靜置15min。最后加入4μL胰酶溶液，在37℃下孵育過(guò)夜12h后加入1μL甲酸終止酶解反應(yīng)，經(jīng)17000r/min，4℃冷凍離心20min，將100μL上清轉(zhuǎn)移至潔凈干燥的液相小瓶，進(jìn)機(jī)分析。標(biāo)準(zhǔn)曲線取相應(yīng)的空白樣品，按照7步驟進(jìn)行處理，用得到的空白樣品提取液，將標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液逐級(jí)稀釋以制備一系列濃度為4、10、15、20、40、80、100和160μg/mL的卡瑞利珠藥物。得到的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，濃度由低到高進(jìn)行檢測(cè)，以定量離子峰面積對(duì)質(zhì)量濃度作圖，做出標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程。儀器參考條件液相色譜參考條件色譜柱：AgilentPoroshell120EC-C18（2.1×100mm，1.9μm），或相當(dāng)者。流動(dòng)相：A相為0.1%甲酸水溶液；B相為乙腈。柱溫：40℃。進(jìn)樣體積：5μL。流速：0.3mL/min。梯度洗脫程序見(jiàn)表1：1梯度程序洗脫表時(shí)間/min流動(dòng)相A/%流動(dòng)相B/%1955755459257511109014109014.195516955質(zhì)譜參考條件電離方式：電噴霧電離，正離子掃描模式。電噴霧電壓：5500V。離子源溫度：500℃。霧化氣：60psi。輔助氣：60psi。氣簾氣：30psi。其他質(zhì)譜條件見(jiàn)附錄A。測(cè)定測(cè)定步驟將試樣溶液注入液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀中，得到卡瑞利珠的質(zhì)譜響應(yīng)值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測(cè)定性判定2規(guī)定的范圍，則可判斷樣品中存在該組分?？ㄈ鹄闃?biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的色譜圖參見(jiàn)附錄B。表2定性確定時(shí)相對(duì)離子豐度的最大允許偏差相對(duì)離子豐度＞50%＞20%~50%＞10%~20%≤10%允許的相對(duì)偏差±20%±25%±30%±50%數(shù)據(jù)計(jì)算血液樣本中藥物濃度含量為：×1000式中:Xi——試樣中待測(cè)組分含量，單位為微克每升(μg/mL)；ρi——由標(biāo)準(zhǔn)曲線得出的測(cè)試液中某種組分的質(zhì)量濃度，單位為微克每升(μg/L)；V定容——定容體積，單位為毫升(mL)；K——稀釋倍數(shù)；V試樣——試樣體積，單位為毫升(mL)。計(jì)算結(jié)果保留三位有效數(shù)字?？瞻自囼?yàn)取空白血樣，均按8.1-8.4測(cè)定步驟進(jìn)行。定量限和重復(fù)性定量限本方法卡瑞利珠的定量限為4μg/mL。重復(fù)性在重復(fù)性實(shí)驗(yàn)條件下獲得兩次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算數(shù)平均值的15%。A（資料性附錄質(zhì)譜參數(shù)表A.1目標(biāo)物的質(zhì)譜參數(shù)及參