基于三種因子的無疤痕燒傷貼

基于三種因子的無疤痕燒傷貼項目背景疤痕是一種不具備正常皮膚組織結(jié)構(gòu)及生理功能的，異常的，不健全的組織，傷口愈合后一旦形成疤痕，不但影響美觀，而且有的疤痕會對人體機能造成一定的損傷。無疤痕愈合以及疤痕修復(fù)的研究十分熱門，但市面上有效的產(chǎn)品并不多見。因此，我們基于三種通路設(shè)計了無疤痕燒傷貼，抑制燒傷傷口的疤痕形成。疤痕形成的原理在受傷的器官中，趨化性刺激觸發(fā)了免疫細胞的快速募集。產(chǎn)生大量促炎性細胞因子和生長因子。從而觸發(fā)肌成纖維細胞（MFs）的激活，肌成纖維細胞是組織重塑的主要效應(yīng)細胞。在生理條件下，重塑導(dǎo)致組織幾乎完全再生，而沒有永久性的痕跡。血管收縮抑制劑血管損傷時，從膜磷脂所釋放的花生四烯酸是通過環(huán)氧合酶酶和血栓烷A2（TXA2）合酶，導(dǎo)致TXA2的形成。TXA2是一種不穩(wěn)定的脂質(zhì)介體，通過結(jié)合到其G蛋白偶聯(lián)受體（即TXA2受體[TPR]）作用。這種相互作用引起多種生物學(xué)效應(yīng)，包括血小板聚集。因此，TXA2途徑已成為藥理學(xué)干預(yù)的目標，以抑制其形成或調(diào)節(jié)與其受體的結(jié)合。鑒于這一事實，已經(jīng)出現(xiàn)了幾種實現(xiàn)該目標的可能性，其中環(huán)氧合酶抑制劑和血栓烷合酶抑制劑是主要的候選候選藥物。（1）缺乏選擇性TXA2，因為它也抑制前列腺素I2合成;（2）引起出血和胃潰瘍，某些情況下帶來嚴重不利影響而被要求停藥；（3）將花生四烯酸的代謝重新導(dǎo)向至異前列腺素，其自身調(diào)節(jié)血小板功能；（4）與敏感性相關(guān)；（5）世界范圍內(nèi)的抵抗力在增加。阿司匹林（環(huán)加氧酶抑制劑）局限性血栓素合成酶抑制劑與TXA的直接前體——前列腺素H2，結(jié)合相同受體，并且可以因此誘發(fā)血小板聚集。在此基礎(chǔ)上，可以開發(fā)更多選擇性的手段來阻斷TXA2介導(dǎo)的血小板凝集，而受體阻斷是目前最具有特異性的方法。文獻表明，血小板血栓烷A2受體（TPR）配體結(jié)合域的抗體C-EL2Ab表現(xiàn)出拮抗活性。抑制了TPR介導(dǎo)的血小板凝集。我們思考能否將C-EL2Ab序列導(dǎo)入大腸桿菌中，使其能夠產(chǎn)生此抗體，結(jié)合TPR，對TXA2的傳遞產(chǎn)生抑制作用。但目前由于文獻有限，并沒有寫出完整的C-EL2Ab序列。之后可以通過郵件的方式聯(lián)系作者。TGF-β是一種分泌型多肽，共六種亞型，人體中僅存在TGF-β1，TGF-β2，TGF-β3三種亞型TGF-β1、2促纖維瘢痕的產(chǎn)生TGF-β3抑制/拮抗瘢痕的緩解TGF-β1、2的含量抑制TGF-β3的含量提升解決方案TGF-β與瘢痕TGF-β1、2的含量抑制人骨成型蛋白7（BMP-7）抑制TGF-β1的成纖維誘導(dǎo)作用降低TGF-β1的表達選擇PET32a表達載體構(gòu)建PET32a-BMP-7重組質(zhì)粒BMP-7是一個糖蛋白質(zhì)，然而，研究表明非糖基化的BMP-7成熟蛋白同樣具有生物活性，所以，采用原核表達系統(tǒng)能夠獲得活性表達TGF-β3的含量提升1、采用PCR擴增法合成基因TGF-β3成熟肽基因2、分別用BamHI和NdeI雙酶切回收的PCR產(chǎn)物和表達載體pET3c，然后取PCR酶切產(chǎn)物和載體pET3c酶切產(chǎn)物,進行連接反應(yīng),連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化感受態(tài)的大腸桿菌BL21(DE3)3、進行TGF-β3的轉(zhuǎn)化與表達檢測合成方法不足：1、BMP-7的生物活性與真核表達產(chǎn)物的活性比較，仍需考證。2、TGF-β3是否能夠從大腸桿菌中分泌出來。3、對于TGF-β2沒有找到合適的細胞因子進行抑制。改進：1、采用融合蛋白的形式令BMP-7在原核生物中正常表達。2、找到合適的信號肽使TGF-β3正常分泌。3、繼續(xù)查找抑制TGF-β2的細胞因子。白細胞介素IL-10的作用生長因子（TGF）-β1刺激的成纖維細胞的組織重塑IL-10具有抗纖維化作用，抑制成纖維細胞的增殖和膠原合成，進而抑制疤痕的形成通過激活I(lǐng)L-10受體下游的AKT和STAT3磷酸化，以及促進PI3K/AKT和STAT3信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑之間的串擾來抑制纖維化。白細胞介素IL-10的合成通路設(shè)計應(yīng)用RT-PCR技術(shù)從ConA誘導(dǎo)的單核細胞中擴增出IL-10成熟肽cDNA片段。將其克隆到PGEM-T后載體測序,雙酶切回收目的片段構(gòu)建IL-10原核表達載體PET28a-IL10。PET28a-IL10轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3),經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達。IPTG誘導(dǎo)大腸桿菌表達目標蛋白的作用原理乳糖操縱子作為啟動子乳糖可以被細胞利用掉IPTG(異丙基-β-D-硫代半乳糖苷)結(jié)構(gòu)相似目的基因持續(xù)表達乳糖操縱子IL-10IPTG硬件設(shè)計水凝膠封裝系統(tǒng)

藻酸鹽芯預(yù)裝營養(yǎng)物質(zhì)以維持工程菌生長

水凝膠殼為珠子提供機械保護以及物理遏制機制因其孔徑約為5-50nm大小，大腸桿菌無法穿透。不足與改進1.三條通路雖已經(jīng)過大量研究，且在大鼠模型中相關(guān)通路已較為成熟，但臨床試驗仍需大量摸索與改進。2.由于能夠查閱的資料有限，并沒有找到完整的C-EL2Ab序列?？梢酝ㄟ^郵件聯(lián)系作者，獲取完整的序列。3.人骨成型蛋白7（BMP-7）是一個糖蛋白質(zhì)，分子量較大，可能難以通過水凝膠珠釋放到外界。改進方法是稍微擴大水凝膠孔徑，或刪去該條通路。4.生長因子（TGF-β3