高中生物實驗專項講義

基礎(chǔ)實驗專題

補(bǔ)初中實驗：顯微鏡的使用

一、光學(xué)顯微鏡的結(jié)構(gòu)、呈像原理、放大倍數(shù)計算方法

1.目鏡越長，放大倍數(shù)越??；物鏡越長，放大倍數(shù)越大。

2.呈像原理：映入眼球內(nèi)的是倒立放大的虛像。

3.放大倍數(shù)：目鏡和物鏡二者放大倍數(shù)的乘積。

注：顯微鏡放大倍數(shù)是指直徑倍數(shù)，即長度和寬度，而

不是面積。

鏡

物

物

我

二、顯微鏡的使用：臺

通

光

置鏡（裝鏡頭）一對光一置片一調(diào)焦一觀察孔

逵

光a

壓

片

1.安放:放于水平桌面，光線充足處。夾

2.對光：選低倍鏡一選較大的光圈一選反光鏡（左眼觀

察）

注：調(diào)節(jié)視野亮度只可用遮光器和反光鏡。

3.觀察側(cè)面觀察降鏡筒一左眼觀察找物像一細(xì)準(zhǔn)焦螺

旋調(diào)清晰顯微鏡的結(jié)構(gòu)

4.低倍轉(zhuǎn)高倍：順序：移裝片一轉(zhuǎn)動鏡頭轉(zhuǎn)換器一調(diào)反光鏡或光圈一調(diào)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋

注：換高倍物鏡時只能移動轉(zhuǎn)換器，換鏡后，只準(zhǔn)調(diào)節(jié)細(xì)準(zhǔn)焦和反光鏡（或光圈）。

5.裝片的制作和移動：制作：滴清水一放材料一蓋片

移動：物像在何方，就將載玻片向何處移。（原因：物像移動的方向和實際移動玻片的方向相

反）

6.污點判斷：

1）污點隨載玻片的移動而移動，則位于載玻片上；

2）污點不隨載玻片移動，換目鏡后消失，則位于目鏡；換物鏡后消失，則位于物鏡；

8.高倍鏡與低倍鏡的比較

物像大小看到細(xì)胞數(shù)目視野亮度物鏡與玻片距離視野范圍

高倍鏡大少暗近小

低倍鏡小多亮遠(yuǎn)大

實驗一觀察DNA、RNA在細(xì)胞中的分布

一、實驗原理：

1.甲基綠和口比羅紅（又名派洛寧）兩種染色劑（均為基性染液）對DNA和RNA的親和力不

同，甲基綠使DNA呈現(xiàn)綠色，毗羅紅使RNA呈現(xiàn)紅色。利用甲基綠、毗羅紅混合染色劑將細(xì)

胞染色，可以顯示DNA和RNA在細(xì)胞中的分布。

2.鹽酸能夠改變細(xì)胞膜的通透性，加速染色劑進(jìn)入細(xì)胞；同時使染色體中的DNA和蛋白質(zhì)

分離，有利于DNA與染色劑結(jié)合。

二、方法步驟：

操作步驟注意問題解釋

載玻片要潔凈；滴一滴質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.9%的防止污跡干擾觀察效果；保持細(xì)胞原有

取口腔上皮NaCl溶液，用消毒牙簽在自己漱凈的口腔內(nèi)形態(tài)。

細(xì)胞制片側(cè)壁上輕刮幾下取細(xì)胞，將載玻片在酒精燈消毒為防止感染，漱口避免取材失敗

下烘干固定裝片

改變細(xì)胞膜通透性，加速染色劑進(jìn)入細(xì)

將烘干的載玻片放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為8%的鹽酸

水解胞，促進(jìn)染色體的DNA與蛋白質(zhì)分離而

溶液中，用30°C水浴保溫5min

被染色

沖冼涂片用蒸儲水的緩水流沖洗載玻片10s洗去殘留在外的鹽酸，避免與染液反應(yīng)

滴2滴吐羅紅甲綠染色劑于載玻片上染色

染色

5min

先低倍鏡觀察，選擇染色均勻、色澤淺的區(qū)

觀察域，移至視野中央，調(diào)節(jié)清晰后才換用高倍使觀察效果最佳

物鏡觀察

實驗二檢測生物組織中的糖類、脂肪和蛋白質(zhì)

一、還原糖顯色反應(yīng)

1.實驗原理：可溶性還原糖（如葡萄糖、果糖、麥芽糖、乳糖）與斐林試劑或本尼迪特試

劑（班氏試劑）劑發(fā)生作用，可生成磚紅色的CU2。沉淀。如：

葡萄糖+Cu（OH）葡萄糖酸+Cu20I（磚紅色）+H20,即CU（OH）2被還原成

Cu20,葡萄糖被氧化成葡萄糖酸。

2.實驗試劑

斐林試劑：甲液：0.1g/mLNaOH溶液，乙液：0.05g/mLCuSO”溶液。

由于甲液與乙液反應(yīng)劇烈，不穩(wěn)定，故此試劑需要現(xiàn)用現(xiàn)配。

本尼迪特試劑：由檸檬酸鈉、無水碳酸鈉和硫酸銅混配而成，試劑化學(xué)性質(zhì)較為穩(wěn)定，可

存放備用并長久保存。

3.實驗材料：蘋果、梨、白色甘藍(lán)葉、白蘿卜（實驗材料無色或者近乎無色,避免對最終

實驗現(xiàn)象的干擾。）

4.方法步驟：

操作方法注意問題解釋

1.制備組織樣液。蘋果或梨組織液必須臨因蘋果多酚氧化酶含量高，組織液很

（去皮、切塊、研磨、過濾）時制備。易被氧化成褐色，將產(chǎn)生的顏色掩蓋。

2.取2支試管，分別向試管

區(qū)分實驗組及對照組

內(nèi)注入2mL組織樣液及清水。

3.向2支試管內(nèi)分別注入1mL應(yīng)將組成斐林試劑的斐林試劑很不穩(wěn)定，甲、乙液混合保

新制的斐林試劑，振蕩。甲液、乙液分別配制、儲存時，生成的Cu(OH)z在70?90℃下分

存，使用前才將甲、乙液解成黑色CuO和水；

等罩混勻成斐林試劑

用試管夾夾住試管上部；

4.試管放在盛有50-65°C溫

使試管底部不觸及燒杯使試管內(nèi)液體受熱均勻

水的大燒杯中，加熱約2分鐘，

底部并且燒杯內(nèi)熱水要防止試管內(nèi)的溶液沖出試管，造成燙

觀察到溶液顏色：淺藍(lán)色T

超過試管內(nèi)液面的高度；傷；

棕色T磚紅色(沉淀)

試管□不朝向?qū)嶒炚摺?/p>

特別注意：

(1)本實驗采用了水浴加熱進(jìn)行處理，目的是為了加快化學(xué)反應(yīng)，能夠在很短(2min)的

時間內(nèi)出現(xiàn)磚紅色沉淀的現(xiàn)象。

(2)本實驗也可以不采用加熱處理，在室溫(24℃)條件下進(jìn)行，但是最終出現(xiàn)磚紅色沉

淀所需時間大約為50mino

(3)對于此顯色實驗，隨著水浴加熱溫度的提高，磚紅色出現(xiàn)的時間會明顯縮短。以梨汁

為例，在溫度為75℃、90℃、100℃時，磚紅色出現(xiàn)的時間分別為Imin,38s,24s。

二、脂肪的顯色反應(yīng)

1.實驗原理

脂肪+蘇丹川—?橘黃色脂肪+蘇丹IV—＞紅色

注意：蘇丹燃料的特性

(1)蘇丹川、蘇丹IV為脂溶性染液，不溶于水。具有一定的毒性。

(2)脂肪和蘇丹染液有比較強(qiáng)的親和力，蘇丹川(IV)遇脂肪變橘黃(紅)色，即萃取原理。

(3)蘇丹(IV)與處于液態(tài)或半液態(tài)的脂肪染色效果最好，可以適當(dāng)提高溫度至37-60℃。

2.實驗材料：富含脂肪的種子，以花生種子為最好，實驗前一般要浸泡:T4小時，制成花生

切片。

3.也可用菌麻種子或花生直接制成勻漿，勻漿液的顯色反應(yīng)不需要用顯微鏡觀察。

4.操作步驟

(1)方法一:

操作方法注意問題解釋

時間過短，不易切片，時間過長，組

花生種子浸泡、制片浸泡3~4小時

織較軟，不易成形。切薄，便于觀察。

在子葉薄片上滴2?3滴蘇丹III蘇丹III-橘黃色

染色時間不宜過長。

或蘇丹IV染液，染色1分鐘。蘇丹IV染液一紅色

用吸水紙吸去薄片周圍染液，用

不去浮色，會影響對橘黃色脂肪滴的

50%酒精洗去浮色,吸去酒精。滴

觀察。同時，酒精是脂溶性溶劑，可

上1滴蒸儲水，蓋上蓋玻片，制成

將脂肪顆粒溶解成油滴。

臨時裝片。

低倍鏡下找薄片的最薄處，可看到

裝片不宜久放。時間一長，油滴會溶解在乙醇中。

有染成橘黃色或紅色圓形小顆粒

注意：花生切片要盡量的薄一些，否則光線將不能充分透過切片進(jìn)入視野中，觀察模糊不清。

(2)方法二：取2支試管，分別注入2ml組織樣液和清水；向2支試管中加入3滴蘇丹III

或蘇丹IV染液，震蕩混合均勻后，觀察兩支試管被染色的情況即可。

三、蛋白質(zhì)顯色反應(yīng)(定性及定量分析)

1.實驗原理:蛋白質(zhì)與雙縮JR試劑發(fā)生作用，產(chǎn)生紫色反應(yīng)。(蛋白質(zhì)分子中含有很多肽鍵，

在堿性NaOH溶液中能與雙縮胭試劑中的Cu"作用，產(chǎn)生紫色反應(yīng)。)至少三肽方可發(fā)生反

應(yīng)。

注意：

(1)在一定的蛋白質(zhì)濃度范圍內(nèi)，顏色深淺與蛋白質(zhì)含量呈線性關(guān)系(正相關(guān))，故可用

比色法來測定樣液中蛋白質(zhì)的濃度。

(2)由于雙縮版試劑不與氨基酸發(fā)生反應(yīng)，故也可以用來檢測蛋白質(zhì)是否徹底水解。

2.實驗材料：新鮮豆?jié){、牛奶、蛋清

3.實驗試劑

雙縮JR試劑：A液：質(zhì)量濃度為0.1g/mLNaOH溶液，B液：質(zhì)量濃度為0.01g/mLCuS04

溶液，現(xiàn)用現(xiàn)配。使用時先加A液，混合均勻后加入B液。

4.方法步驟：

操作方法注意問題解釋

制備組織樣液。容易研磨成漿，也可購新鮮豆?jié){以節(jié)

黃豆浸泡1至2天

(浸泡、去皮研磨、過濾。)約實驗時間。

鑒定：加樣液及清水約2ml

A液和B液要分開配先加NaOH溶液，為Cu"與蛋白質(zhì)反應(yīng)

于試管中，加入雙縮版試劑

制，儲存。鑒定時先加提供堿性的環(huán)境。A、B液同時加入，會導(dǎo)

A,搖勻；再加入雙縮JR試劑

A液后加B液。致Ci?’變成Cu(0H)2沉淀，而失效。否則

B液3?4滴，搖勻，溶液變紫

CuS0溶液不能多加。CuS0的藍(lán)色會遮蓋反應(yīng)的真實顏色。

色。44

若稀釋不夠，蛋清粘在試管壁，與雙縮胭

可用蛋清代替豆?jié){。蛋清要先攪勻稀釋。試劑反應(yīng)后會粘固在試管內(nèi)壁上，使反應(yīng)

不徹底，且試管也不易洗干凈。

實驗三用高倍鏡觀察線粒體和葉綠體

一、實驗原理：

1.葉綠體的辨認(rèn)依據(jù)：葉綠體是綠色的，呈扁平的橢圓球形或球形。植物細(xì)胞的綠色部位由

葉綠體內(nèi)的葉綠色決定。

2.線粒體辨認(rèn)依據(jù)：線粒體無色，且形態(tài)多樣，有短棒狀、圓球狀、線形、啞鈴形等。

健那綠染液是專一性染線粒體的活細(xì)胞染料，可以使活細(xì)胞中線粒體呈現(xiàn)藍(lán)綠色。

二、實驗材料

1.觀察葉綠體選材：辭類的葉、黑藻的葉。取這些材料的原因是：葉子薄而小，葉綠體清

楚，可取整個小葉直接制片，所以作為實驗的首選材料。

注意：若用菠菜葉作實驗材料，要取菠菜葉的下表皮并稍帶些葉肉。因為表皮細(xì)胞不含葉

綠體。

2.觀察線粒體選材：口腔上皮細(xì)胞。無色，易于取材。不能用植物細(xì)胞，因為植物根細(xì)胞不

易獲得，取材及實驗處理繁瑣；而葉肉細(xì)胞含有葉綠體，造成觀察上的障礙。

四、方法步驟：

步驟注意問題分析

1.制片。用鑲子取一片黑藻否則細(xì)胞或葉綠體失水收

制片和鏡檢時，臨時裝片要隨時

的小葉，放入載玻片的水滴縮，將影響對葉綠體形態(tài)和

保持有水狀態(tài)

中，蓋上蓋玻片。分布的觀察。

2.低倍鏡下找到葉片細(xì)胞

3.高倍鏡下觀察葉綠體的形

態(tài)和分布

4.制作人的口腔上皮細(xì)胞臨在潔凈載玻片中央滴一滴健那綠為確保觀察效果，需要用油

時裝片染液一用牙簽取碎屑一蓋蓋玻片鏡。

5.觀察線粒體線粒體藍(lán)綠色，細(xì)胞質(zhì)接近無色。

注意事項：

1.觀察線粒體時，顯微鏡下的藍(lán)綠色顆粒不能完全確定為線粒體，也可能是好氧細(xì)菌。

2.細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中的葉綠體在不同光照條件下可以運動，這種運動能隨時改變橢球體的方向，

使葉綠體既能接受較多光照，又不至于被強(qiáng)光灼傷。

3.葉綠體的形態(tài)和分布都有利于接受光照，完成光合作用。如葉綠體在不同光照條件下改變

方向。又如葉子上面的葉肉細(xì)胞中的葉綠體比下面的多，這可以接受更多的光照。

實驗四觀察植物細(xì)胞的質(zhì)壁分離和復(fù)原

一、實驗原理：

1.成熟的植物細(xì)胞的原生質(zhì)層（細(xì)胞膜、液泡膜、兩層膜之間細(xì)胞質(zhì)）相當(dāng)于一層半透膜;

細(xì)胞液具有一定的濃度，能夠滲透失水和吸水；原生質(zhì)層的伸縮性大于細(xì)胞壁的伸縮性。

2.材料用具：紫色洋蔥外表皮，0.3g/ml蔗糖溶液，清水，載玻片，鑲子，滴管，顯微鏡等

實驗材料：紫色洋蔥鱗片葉外表皮細(xì)胞、黑藻葉片、大蒜鱗葉

3.選材需滿足的條件：①活細(xì)胞②成熟的植物細(xì)胞（有大液泡）③易于撕取獲得

單層細(xì)胞④顯微鏡下易于區(qū)分原生質(zhì)層和細(xì)胞壁

（1）關(guān)于實驗材料選擇的事項：

在光學(xué)顯微鏡下，細(xì)胞中有顏色的位置更容易觀察，因此，含有色素的植物細(xì)胞成為該實

驗的首選材料。通常情況已植物組膻所含有的色素主要存在于葉綠體和液泡中。

（2）具體分析兩類可供選擇的實驗材料：

①洋蔥鱗片葉外表皮：具有比較明顯的紫色大液泡，原生質(zhì)層無色，可以清晰的觀察到液泡

大小的變化。

②黑藻葉片：有液泡，但是細(xì)胞液無色；葉綠體分布在原生質(zhì)層中，使原生質(zhì)層呈現(xiàn)綠色。

有色的原生質(zhì)層與外界的無色溶液及內(nèi)側(cè)液泡中無色的細(xì)胞液形成鮮明對比，容易觀察到壁

紙分離現(xiàn)象，并且可以觀察到液泡體積的變化。

總結(jié)：實驗材料選擇的原則是細(xì)胞液中含有可溶性色素或原生質(zhì)層中含有有色物質(zhì)（兩種情

況滿足其中一種即可）。若細(xì)胞液和原生質(zhì)層均無色，還需在外界溶液中添加大分子染料,

日紅墨水或藍(lán)墨水等，形成顏色反差。

①一般不選擇細(xì)菌細(xì)胞，它能發(fā)生質(zhì)壁分離，但現(xiàn)象不明顯。

e木臺.匕;生盅辦枷如1曲正不如JBMJR主木臺g省/1-山儂八面小1卷1

4.實驗試劑使用

選用的蔗糖溶液濃度要適宜。本實驗用30%（0.3g/ml）的蔗糖溶液（既明顯出現(xiàn)質(zhì)壁分離,

又不會殺死細(xì)胞）。

選用不同的實驗材料，所用的的溶液濃度不同。陽生植物和水生植物的細(xì)胞液濃度不同，

故發(fā)生質(zhì)壁分離時需要的外界溶液濃度也不同。

①濃度過低，不足以引起質(zhì)壁分離或質(zhì)壁分離所需時間過長；

②濃度過高，植物細(xì)胞失水過多、過快而死亡；

③使用濃度過高的蔗糖溶液（質(zhì)量濃度為0.5g/mL）,質(zhì)壁分離現(xiàn)象明顯，但不能復(fù)原，因

為溶液濃度過高，細(xì)胞過度失水而死亡。

④原生質(zhì)層的選擇透過性是發(fā)生質(zhì)壁分離和復(fù)原的內(nèi)在前提，死亡的細(xì)胞既不會發(fā)生質(zhì)壁

分離，也不會發(fā)生質(zhì)壁分離復(fù)原。

【注意事項】

（1）只有成熟的植物細(xì)胞原生質(zhì)層和細(xì)胞壁可以分離，而未成熟的植物細(xì)胞細(xì)胞膜和細(xì)胞

壁是緊貼在一起的，無法正常分離。

（2）質(zhì)壁分離時，在細(xì)胞壁和細(xì)胞膜間充滿了降低濃度的外界溶液，原因是細(xì)胞壁具有全

透性。

（3）以可吸收的物質(zhì)作溶質(zhì)時（如甘油、尿素、KN03、乙二醇等），可出現(xiàn)質(zhì)壁分離及自動

復(fù)原現(xiàn)象。

（4）用蔗糖作為質(zhì)壁分離的外界溶液時，因洋蔥鱗片葉細(xì)胞對蔗糖吸收速度較慢，吸收量

較少，同時實驗時間較短，在短時間內(nèi)不會影響細(xì)胞液的滲透壓。

（5）使用質(zhì)量濃度為1mol?LT的KN03溶液，因為C和NO「可被細(xì)胞吸收，使細(xì)胞液濃度

增大，所以細(xì)胞先發(fā)生質(zhì)壁分離后又自動復(fù)原。（尿素、甘油、乙二醇等現(xiàn)象同上，但原理

不同）。制作洋蔥鱗片葉表皮臨時裝片

,①有一個紫色的中央大液泡

5.實驗流程用低倍顯微鏡觀察

②原生質(zhì)層緊貼細(xì)胞壁

蓋玻片|

吸水紙吸引

中中央液泡逐漸變小，顏色變深

用低倍顯微鏡觀察，

蓋玻片②原生質(zhì)層與細(xì)胞壁逐漸分離

吸水紙吸引清水

①中央液泡逐漸脹大,顏色變淺

低倍顯微鏡觀察

②原生質(zhì)層逐漸貼近細(xì)胞壁

（1）本實驗沒有設(shè)置對照實驗，實驗前后自身對照。

（2）本實驗用顯微鏡觀察了三次，第一次與第二次形成對照，第三次與第二次形成對照,

該對照方法為自身對照。

二、實驗步驟:

步驟注意問題分析

1.制作洋蔥表皮的臨時裝片：在載蓋蓋玻片應(yīng)讓一

玻片上滴一滴水，撕取洋蔥鱗片葉外側(cè)先觸及載玻片，防止裝片產(chǎn)生氣泡。

表皮放在水滴中展平，蓋上蓋玻片。然后輕輕放平。

2.觀察洋蔥細(xì)胞液泡含花青素，所以液泡呈紫色。

可看到：液泡大，呈紫色，原生質(zhì)層先觀察正常細(xì)胞與后面的“質(zhì)壁分離”

緊貼著細(xì)胞壁。起對照作用。

3.觀察質(zhì)壁分離現(xiàn)象。蔗糖溶液濃度大于細(xì)胞液濃度，細(xì)

從蓋玻片的一側(cè)滴入0.3g/ml的蔗胞通過滲透作用失水，細(xì)胞壁伸縮性小

糖溶液，在另一側(cè)用吸水紙吸引，重原生質(zhì)層的伸縮性大，液泡和原生質(zhì)層

復(fù)幾次。鏡檢。觀察到：液泡由大變不斷收縮，所以發(fā)生質(zhì)壁分離。

小，顏色由淺變深，原生質(zhì)層與細(xì)胞重復(fù)幾次為了使細(xì)胞完全浸入蔗糖溶液中。

壁分離。原生質(zhì)層與細(xì)胞壁之間充滿否則，細(xì)胞嚴(yán)重失水死亡，看不到質(zhì)壁

蔗糖溶液。糖濃度不能過高分離的復(fù)原。

4.觀察細(xì)胞質(zhì)壁分離的復(fù)原現(xiàn)象。發(fā)生質(zhì)壁分離的細(xì)胞液的濃度高于外界溶液，細(xì)胞通過

從蓋玻片的一側(cè)滴入清水，在另一側(cè)裝片，不能久置，滲透作用吸水，所以發(fā)生質(zhì)壁分離復(fù)原

用吸水紙吸引，重復(fù)幾次。鏡檢。觀要馬上滴加清水，現(xiàn)象。

察到：液泡由小變大,顏色由深變淺，使其復(fù)原。因為細(xì)胞失水過久，也會死亡。

原生質(zhì)層恢復(fù)原狀。重復(fù)幾次為了使細(xì)胞完全浸入清水中。

【典例解析】

1.進(jìn)行質(zhì)壁分離實驗，需要使用較高的外界溶液濃度的實驗材料的是

A.藍(lán)藻B.黑藻C.洋蔥鱗片葉D.葫蘆薛

2.下列關(guān)于植物細(xì)胞質(zhì)壁分離實驗的敘述，錯誤的是

A.與白色花瓣相比，采用紅色花瓣有利于實驗現(xiàn)象的觀察

B.用黑藻葉片進(jìn)行實驗時，葉綠體的存在會干擾實驗現(xiàn)象的觀察

C.用紫色洋蔥鱗片葉外表皮不同部位觀察到的質(zhì)壁分離程度可能不同

D.紫色洋蔥鱗片葉外表皮細(xì)胞的液泡中有色素，有利于實驗現(xiàn)象的觀察

3.將洋蔥鱗片葉外表皮放入一定濃度的物質(zhì)A溶液中，其原生質(zhì)體的體積隨時間的變化趨勢

如右圖所示。下列敘述正確的是

A.0~1h內(nèi)物質(zhì)A沒有通過細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)

B.0~4h內(nèi)細(xì)胞的吸水能力變化與原生質(zhì)體體積的變化呈負(fù)相關(guān)

C.2?3h內(nèi)物質(zhì)A溶液的滲透壓大于細(xì)胞液的滲透壓

D.0~1h內(nèi)細(xì)胞液的滲透壓大于細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)的滲透壓

時間/h

實驗五探究影響酶活性的因素

一、比較過氧化氫酶和Fe"的催化效率

（一）驗原理：

鮮肝提取液中含有過氧化氫酶，過氧化氫酶和Fe”都能催化上。2分解放出經(jīng)計算，質(zhì)量

分?jǐn)?shù)為3.5%的FeCA溶液和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為20%的肝臟研磨液相比，每滴FeCL溶液中的Fe"數(shù),

大約是每滴肝臟研磨液中過氧化氫酶分子數(shù)的25萬倍。

（二）方法步驟：

步驟注意問題解釋

取4支潔凈試管，編號，分別不讓H2O2接觸

H2O2有一*定的腐蝕性

加入2mLH2O2溶液皮膚

將2號試管放在90°C左右的水

浴中加熱，觀察氣泡冒出情況，預(yù)實驗，初步觀察過氧化氫的反應(yīng)變化情況

與1號（室溫條件）對照

不可用同一支由于酶具有高效性，若滴入的FeCL溶液

向3號、4號試管內(nèi)分別滴入2滴管中混有少量的過氧化氫酶，會影響實驗準(zhǔn)確性

滴FeCL溶液和2滴肝臟研磨因為過氧化氫酶是蛋白質(zhì)，放置過久，可

液，觀察氣泡產(chǎn)生情況肝臟研磨液必受細(xì)菌作用而分解，使肝臟組織中酶分子數(shù)減

須是新鮮的肝少，活性降低

臟在制成研磨研磨可破壞肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)，使細(xì)胞內(nèi)的酶釋

液放出來，增加酶與底物的接觸面積

放衛(wèi)生香時，

現(xiàn)象：3號試管產(chǎn)生氣泡多，冒泡時間短，衛(wèi)

2-3min后，將點燃的衛(wèi)生香分動作要快，不要

生香猛烈復(fù)燃，4號試管產(chǎn)生氣泡少，冒泡時

別放入3號和4號試管內(nèi)液面插到氣泡中，避

間長，衛(wèi)生香幾乎無變化

的上方，觀察復(fù)燃情況免衛(wèi)生香因潮

濕而熄滅

二、溫度對酶活性的影響

（一）實驗原理：

1.淀粉遇碘后，形成紫藍(lán)色的復(fù)合物。

2.淀粉酶可以使淀粉逐步水解成麥芽糖和葡萄糖（淀粉水解過程中，不同階段的中間產(chǎn)

物遇碘后，會呈現(xiàn)紅褐色或紅棕色。）麥芽糖和葡萄糖遇碘后不顯色。

注：市售a-淀粉酶的最適溫度約60°C

（二）方法步驟：

操作注意問題解釋

取3支試管，編上號，然后

分別注入2mL可溶性淀粉溶液

另取3支試管，編上號，然

后分別注入1mL新鮮淀粉酶溶液

將裝有淀粉溶液和酶溶液的防止混合時，由于兩種溶液的

不能只用不同

試管分成3組，分別放入熱水（約溫度不同而使混合后溫度發(fā)生變

溫度處理淀粉溶液

60°C）、沸水和冰塊中，維持各自化，反應(yīng)溫度不是操作者所要控制

或酶溶液

的溫度5min的溫度，影響實驗結(jié)果。

分別將淀粉酶溶液注入相同

保持各自溫度

溫度下的淀粉溶液中，搖勻后，淀粉酶催化淀粉水解需要一定時間

時間不能太短

維持各自的溫度5min

在3支試管中各滴入1-2滴

碘液，搖勻后觀察這3支試管中碘液不能滴加太多防止影響實驗現(xiàn)象的觀察

溶液顏色變化并記錄

用表格的形式顯示實驗之拄驟

試管

序號加入試劑或處理方法

ABcabc

可溶性淀粉溶液2mL2mL2mL///

1

新鮮淀粉酶溶液///1mL1mL1mL

2保溫5min60°C100°Co°c60°C100°Co°c

將a液加入到A試管，b液加入到B

3

試管，c液加入到C試管中，搖勻

4保溫5min60°C100°Co°c

5滴入碘液，搖勻2滴2滴2滴

6觀察現(xiàn)象并記錄

三、PH值對酶活性的影響

操作步驟：用表格開式顯示實驗步驟：（操作順序不能錯）

序號~加入試劑或處理方法試試管管

123

1注入新鮮的淀粉酶溶液1mL1mL1mL

2注入蒸儲水1mL//

3注入氫氧化鈉溶液/1mL/

4注入鹽酸//1mL

5注入可溶性淀粉溶液2mL2mL2mL

660°C水浴保溫5min

7加入斐林試劑，邊加邊振蕩2mL2mL2mL

8水浴加熱煮沸Imin

9觀察3支試管中溶液顏色變化變記錄

注意：

（1）探究pH對酶活性的影響實驗，需要用過氧化氫酶進(jìn)行實驗，不能選擇唾液淀粉酶。

在酸性條件下，淀粉遇酸會水解，會與唾液淀粉酶的實驗結(jié)果產(chǎn)生重疊。

（2）探究溫度對酶活性的影響實驗，不能使用過氧化氫酶。過氧化氫在高溫下會快速分解。

實驗六葉綠體色素的提取和分離

一、實驗原理：

1.葉綠體中的色素是有機(jī)物，不溶于水，易溶于無水乙醇等有機(jī)溶劑中,所以用無水乙醇、

丙酮等能提取色素。-----------提取方法：研磨過濾法（有機(jī)溶劑溶解法）。

2.層析液是一種脂溶性很強(qiáng)的有機(jī)溶劑。葉綠體色素在層析液中的溶解度不同，分子量小

的溶解度高，隨層析液在濾紙上擴(kuò)散得快，反之亦然。---------分離方法：紙層析法。

二、實驗材料：鮮綠的菠菜葉（不用幼嫩葉，幼葉顏色泛黃綠色，葉綠素含量相對較少）

喬木葉片葉脈較硬，葉片表面有角質(zhì)或釉質(zhì)，研磨時很難做到充分進(jìn)行，一般也不用。

三、實驗步驟：

步驟注意問題分析

1.提取色素力口Si02加Si02為了研磨得更充分。

5克綠葉剪碎，放入研缽，加加CaC03加CaCO3可中和研磨時液泡破壞釋放的有機(jī)酸，

SiOz、CaCOs和5mL無水乙醇（或防止色素被破壞。

丙酮）迅速、充分研磨。（若沒

有也可用95%的乙醇，但要加入適加無水乙醇葉綠體色素易溶于無水乙醇等有機(jī)溶劑。

量的無水碳酸鈉，除去水分）迅速減少研磨過程色素分解，減少無水乙醇揮發(fā)

2.收集濾液

漏斗基部放一單層尼龍布,研磨不能用濾紙，濾

尼龍布起過濾作用。

液倒入漏斗內(nèi)擠壓，將濾液收集紙對色素的吸附

試管□用棉花塞塞緊是為了防止無水乙醇揮

到小試管中，用棉花塞塞住試管力很強(qiáng)

發(fā)

口。

3.制備濾紙條干燥可吸收更多的濾液。

將干燥的濾紙，剪成長10cm,順著紙紋剪成層析時，色素分離效果好。

寬1cm的紙條，一端剪去二個角，并長條

在距這一端1cm處劃一鉛筆線。一端剪去二個角可使層析液同時到達(dá)濾液細(xì)線。

4.劃濾液細(xì)線

用毛細(xì)吸管吸取少量濾液，沿濾液細(xì)線越防止色素帶之間部分重疊。

鉛筆線劃出細(xì)、齊、直的一條濾液細(xì)、越齊越好。

細(xì)線，干后重復(fù)三次。重復(fù)三次。增加色素量，實驗結(jié)果更明顯。

5.紙層析法分離色素層析液不能沒及

將3mL層析液倒入燒杯中，濾紙條。防止色素溶解在層析液中，

將濾紙條(劃線一端朝下)插入燒杯要蓋培養(yǎng)皿

層析液中，用培養(yǎng)皿蓋蓋上燒杯。蓋。層析液中的苯、丙酮、石油酸有毒且易揮發(fā)。

6.觀察實驗結(jié)果

擴(kuò)散最快是四種色素之所以能被分離，是因為四種色素隨

胡蘿卜素(橙黃色)胡蘿卜素，擴(kuò)散層析液在濾紙上的擴(kuò)散速度不同。

葉黃素(黃色)最慢是葉綠素b,

葉綠素a(藍(lán)綠色)含量最多的是葉

葉綠素b(黃綠色)綠素a?

\/

注意：

(1)在實驗材料的處理上，可以直接選用新鮮的綠葉研磨，也可以將綠葉晾曬或烘干研磨

成干粉進(jìn)行實驗。干粉中的色素含量相對更多。

(2)層析液的顏色一般呈現(xiàn)無色。

(3)過濾濾液時可以選用脫脂棉或尼龍布，減少對濾液中色素分子的吸附性。

(4)色素中的類胡蘿卜素耐酸，加入的碳酸鈣主要是對葉綠素進(jìn)行保護(hù)。

四、實驗易錯點、難點及理論解讀

1.色素提取液呈淡黃綠色的原因分析：

(1)研磨不充分，色素未能充分提取出來。

(2)稱取綠葉過少或加入無水乙醇過多，色素溶液濃度小。

(3)未加碳酸鈣或加入過少，色素分子部分被破壞。

(4)使用放置數(shù)天的菠菜葉。

2.濾紙條上色素條帶出現(xiàn)波浪狀或者交疊的原因

(1)畫濾液線時沒有做到細(xì)且直

(2)每次劃線后沒有干燥，色素在紙面上有擴(kuò)散

(3)濾紙條沒有預(yù)先干燥處理，導(dǎo)致色素在紙條上有擴(kuò)散

3.色素條帶上各個條帶顏色較淺的原因

(1)研磨時加入提取液過多，導(dǎo)致溶液顏色變淡，劃線時存在于起始擴(kuò)散處的色素量變少

(2)研磨時沒有加入二氧化硅

(3)畫濾液線的次數(shù)太少，導(dǎo)致起始擴(kuò)散處的濃度不夠，條帶顏色變淺

4.不添加CaCOs可能會導(dǎo)致色素條帶上最下面兩條色素條帶缺失，注意，不是色素條帶顏色變

淺。

實驗七探究酵母菌的呼吸方式

一、實驗原理:

1.酵母菌是一種單細(xì)胞真菌，在有氧和無氧的條件下都能生存，屬于兼性厭氧菌，因此便

于用來研究細(xì)胞呼吸的不同方式。

2.CO?可使澄清石灰水變混濁，也可使溟麝香草酚藍(lán)水溶液由藍(lán)變綠再變黃。根據(jù)石灰水混

濁程度或澳麝香草酚藍(lán)水溶液變成黃色的時間長短，可以檢測酵母菌培養(yǎng)CO?產(chǎn)量的多少。

用■麝香草酚藍(lán)檢測的結(jié)果更加可靠，可以排除二氧化硫的影響。

3.橙色的重鋁酸鉀溶液，在酸性條件下與乙醇(酒精)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，變成灰綠色。

二、方法步驟：

1.酵母菌培養(yǎng)液的配制

取20g新鮮的食用酵母菌，分成兩等份，分別放入錐形瓶A(500mL)和錐形瓶B(500mL)

中，再分別向瓶中注入240mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的葡萄糖溶液

2.檢測CO2的產(chǎn)生

用錐形瓶和其他材料用具組裝好實驗裝置(如圖)，并連通橡皮球(或氣泵)，讓空氣間歇

性地依次通過3個錐形瓶(約50min)。然后將實驗裝置放到25-35°C的環(huán)境中培養(yǎng)8T0h。

3.檢測酒精的產(chǎn)生

各取2mL酵母菌培養(yǎng)液的濾液，分別注入2支干凈的試管中。向試管中分別滴加0.5mL溶有

0.1g重銘酸鉀的濃硫酸溶液(體積分?jǐn)?shù)為95%-97%)并輕輕振蕩，使它們混合均勻，觀察試

管中溶液的顏色變化。

(1)提出問題：酵母菌使葡萄糖發(fā)酵產(chǎn)生酒精的條件是有氧還是無氧；酵母菌在有氧和無

氧條件下細(xì)胞的呼吸產(chǎn)物是什么

(2)作出假設(shè)：針對上述問題，根據(jù)已有的知識和生活經(jīng)驗(如酵母菌可以用于釀酒、發(fā)

面等)作出合理的假設(shè)

(3)設(shè)計并進(jìn)行實驗

①配置酵母菌培養(yǎng)液

②檢測CO?的產(chǎn)生，裝置如圖所示

接植皮球

(或氣泵)

質(zhì)量分質(zhì)為15%獻(xiàn)醇麗曲麻麗?麗隔

的NaOH常液培*液石從水培養(yǎng)液萩水

③檢測酒精的產(chǎn)生：自I、H錐形瓶中各取2ml濾液分別注入編號為1、2的兩支試管中,

分別滴加0.5ml溶有0.1g重銘酸鉀的濃硫酸溶液中，振蕩并觀察溶液的顏色變化。

(4)實驗現(xiàn)象：甲、乙兩裝置中石灰水都變渾濁，且甲中渾濁程度高且快

2號試管中溶液由橙色變成灰綠色，1號試管不變色

(1)通入甲組第一只錐形瓶的空氣中不能含有COz的原因：通入的空氣中不能含有CO?,以

保證使第三個錐形瓶中的澄清石灰水變混濁完全是由酵母菌有氧呼吸產(chǎn)生的C02所致。

（2）乙組第一只錐形瓶應(yīng)封口放置一段時間后再連通盛有澄清石灰水錐形瓶的原因：封口

放置一段時間，待酵母菌將瓶中的氧氣消耗完，再連通盛有澄清石灰水的錐形瓶，確保通入

澄清石灰水中的CO?是由酵母菌無氧呼吸產(chǎn)生的。

實驗八觀察細(xì)胞的有絲分裂

一、實驗原理：

1.在高等植物體內(nèi)，有絲分裂常見于根尖、芽尖等分生區(qū)細(xì)胞。

（1）根尖生長點屬于分生組織，細(xì)胞分裂能力強(qiáng)，易觀察到有絲分裂各個時期的細(xì)胞。另

外，染色體數(shù)較少，便于染色體觀察計數(shù)。

（2）各個細(xì)胞的分裂是獨立進(jìn)行的，因此在同一分生組織中可以看到處于不同分裂時期的

細(xì)胞。

2.染色體容易被堿性染料（如龍膽紫溶液）著色,通過在高倍顯微鏡下觀察各個時期細(xì)

胞內(nèi)染色體（或染色質(zhì)）的存在狀態(tài)，就可判斷這些細(xì)胞處于有絲分裂的哪個時期。

二、實驗材料：洋蔥（可用蔥、蒜代替）。

1.實驗材料選擇的依據(jù)：

①材料易于獲得②細(xì)胞內(nèi)染色體數(shù)目少，染色體大，便于觀察③取材組織部位細(xì)胞

分裂能力強(qiáng)

2.實驗材料的處理時間

一般在上午10點至下午14點之間進(jìn)行實驗，此時組織細(xì)胞分裂比較旺盛

三、實驗試劑：95%乙醇、15%鹽酸、醋酸洋紅或龍膽紫、清水

各種試劑作用：

（1）95%乙醇：作為固定液，固定細(xì)胞分裂相。固定液的重要特性是能迅速穿透細(xì)胞，將

其固定并維持染色體結(jié)構(gòu)的完整性，還要能夠增強(qiáng)染色體的嗜堿性，達(dá)到優(yōu)良染色效果。

（2）15%鹽酸：解離并殺死細(xì)胞，使組織細(xì)胞相互分離開。解離的作用主要由鹽酸發(fā)揮。

（3）龍膽紫或醋酸洋紅：堿性染液，使染色體著色，便于鏡檢觀察

（4）清水：漂洗解離的實驗材料，洗掉多余解離液，防止解離過度及影響后續(xù)染色

四、實驗步驟:

步驟（方法一）注意問題分析

一、根尖的培養(yǎng)（水培法）

實驗前3?4天，讓洋蔥放在廣口置于溫暖處，常換水。因為細(xì)胞分裂和生長需要水

瓶上，底部接觸清水。根長約5cm時分、適宜的溫度和氧氣。

可用。

二、裝片的制作

目的：溶解細(xì)胞間質(zhì)，

（解離T漂洗-?染色T制片）此時間的分裂區(qū)細(xì)胞分裂旺

使組織中的細(xì)胞相互分離開

1.解離：上午10時至下午2時，剪盛，便于觀察到分裂期的圖像

來。此時，細(xì)胞已被鹽酸殺

取洋蔥根尖2?3m,立即放入盛有質(zhì)

m死。

量分?jǐn)?shù)為15%的鹽酸和體積分?jǐn)?shù)為解離時間要保證，細(xì)胞才能分

否則，根尖過于酥軟，

95%的酒精溶液的混合液（1：1）的散開來。

無法取出。

玻璃皿中，室溫下解離3?5min。解離時間也不宜過長。

2.漂洗：待根尖酥軟后，用鑲子取

目的：洗去解離液，便于染

出，放入盛有清水的玻璃皿中漂洗約漂洗要充分，可換水1~2次。

色。

10min。

3.染色：把洋蔥根尖放進(jìn)盛有質(zhì)量龍膽紫等為堿性染料，可使

染色時間不宜過長，否則

濃度為0.01g/mL或0.02g/mL的龍膽染色體著色。

顯微鏡下一片紫色，無法觀

紫溶液的玻璃皿中染色3~5min。醋酸洋紅溶液也能使染色體

察。

著色

4.制片：用鑲子將這段洋蔥根尖取

出來，放在載玻片上，加一滴清水，目的：使細(xì)胞分散，避免細(xì)

要弄碎根尖，再垂直向下

并用鑲子尖把洋蔥根尖弄碎，蓋上蓋胞重疊，便于觀察。做得成

均勻用力壓片，不可移動蓋玻

玻片，在蓋玻片上再加一片載玻片。功的裝片，標(biāo)本被壓成云霧

片，

然后，用拇指輕輕地壓載玻片，使細(xì)狀。

胞分散開來。

三、觀察

1.低倍鏡觀察：把裝片放在低倍鏡一定要找到分生區(qū)。

下，慢慢移動裝片，找到分生區(qū)細(xì)胞。在一個視野里，往往不容易找分生區(qū)細(xì)胞特點是：細(xì)胞呈

2.高倍鏡觀察：移走低倍鏡，換上全有絲分裂過程中各個時期正方形，排列緊密，有的細(xì)

高倍鏡，用細(xì)準(zhǔn)焦螺旋和反光鏡把視的細(xì)胞。如果是這樣，可以慢胞正處于分裂期。

野調(diào)整清晰，仔細(xì)觀察，找出處于細(xì)慢地移動裝片，從鄰近的分生

胞分裂期中期的細(xì)胞，再找出前期、區(qū)細(xì)胞中尋找。

后期、末期的細(xì)胞。

實驗九探究植物生長調(diào)節(jié)劑對桿插枝條生根的作用

一、實驗原理：

植物插條經(jīng)植物生長調(diào)節(jié)劑處理后，對植物插條的生根情況有很大的影響，而且用不同

濃度、不同時間處理其影響程度亦不同。其影響存在一個最適濃度，在此濃度下植物插條的

生根數(shù)量最多，生長最快。

二、方法步驟：

1.選擇生長素類似物：2,4-D或a-蔡乙酸（NAA）、IBA等。

2.配制生長素類似物的濃度梯度：用容量瓶分別配成0.2、0.4、0.6、0.8、1、2、3、4、5

mg/mL的溶液，分別放入小磨口瓶，及時貼上相應(yīng)標(biāo)簽。

NAA有毒，配制時最好戴手套和口罩。

3.剩余的母液應(yīng)放在4℃保存，如果瓶底部長有綠色毛狀物，則不能繼續(xù)使用。

4.選擇插條：以1年生苗木為最好（1年或2年生枝條形成層細(xì)胞分裂能力強(qiáng)、發(fā)育快、

易成活）。

5.處理插條：枝條的形態(tài)學(xué)上端為平面，下端要削成斜面，這樣在托插后可增加吸收水分

的面積，促進(jìn)成活。每一枝條留3-4個芽，所選枝條的芽數(shù)盡量一樣多。

處理方法注意事項

浸泡法插條的基部浸泡在配制好的溶液中，深約3cm,處理幾小時至一天。（要求

溶液濃度較低，并且最好是在遮陰和空氣濕度較高的地方進(jìn)行處理）

沾蘸法把插條基部在濃度較高的藥液中蘸一下（約5s）,深約1.5cm

6.探究活動：提出問題一作出假設(shè)一設(shè)計實驗一（包括選擇實驗材料、選擇實驗器具、確

定實驗步驟、設(shè)計實驗記錄表格）一實施實驗一分析與結(jié)論一表達(dá)與交流。

注：

（1）可先設(shè)計一組梯度比較大的預(yù)實驗進(jìn)行摸索，再在預(yù)實驗的基礎(chǔ)上設(shè)計細(xì)致的實驗。

（2）實驗材料：可以用楊、加拿大楊、月季等的枝條。

三、實例如下：

1.提出問題

不同濃度的生長素類似物，如2,4-D或NAA,促進(jìn)楊插條生根的最適濃度是多少？

2.作出假設(shè)

適宜濃度的2,4-D或NAA可以使楊或月季插條基部的薄壁細(xì)胞恢復(fù)分裂能力，產(chǎn)生愈傷組

織，長出大量不定根。

3.預(yù)測實驗結(jié)果

經(jīng)過一段時間后（約3?5d）,用適宜濃度的2,4-D或NAA處理過的插條基部和樹皮皮孔

處（插條下1/3處）出現(xiàn)白色根原體，此后逐漸長出大量不定根；而用較低濃度、較高濃度

或清水處理的枝條長出極少量的不定根或不生根。

4.實驗步驟

（1）制作插條。

（2）分組處理：將插條分別用不同的方法處理（藥物濃度、浸泡時間等可多組。如可分別

在NAA中浸泡1、2、4、8、12、24h等）。

（3）進(jìn)行實驗：將處理過的插條下端浸在清水中,注意保持溫度（25?