梨白粉病抗性鑒定技術(shù)規(guī)程

3梨白粉病抗性鑒定技術(shù)規(guī)程本文件規(guī)定了梨白粉病抗性鑒定的技術(shù)方法和評價標(biāo)準(zhǔn)。本文件適用于梨樹白粉病抗性的鑒定評價。2術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。2.1抗病性diseaseresistance植物體所具有的能夠減輕或克服病原物致病作用的可遺傳性狀。2.2抗病性鑒定identificationofdiseaseresistance通過適宜技術(shù)方法鑒定植物對特定病害的抵抗水平。2.3抗病性評價evaluationofresistance根據(jù)采用的技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)判別寄主植物對特定病害反應(yīng)程度和抵抗水平的描述。2.4病情級別diseaseratingscale人為定量植物個體或群體發(fā)病程度的數(shù)值化描述。2.5病情指數(shù)diseaseindex（DI）通過對植物個體發(fā)病程度(病情級別)數(shù)值的計算所獲得群體發(fā)病程度的數(shù)值化描述。2.6接種體inoculum用于接種以引起寄主病害的病原物或病原物的一部分。2.7人工接種artificialinoculation在適宜條件下，通過人工操作將接種體置于植物體適當(dāng)部位并使之發(fā)病的過程。2.8接種懸浮液inoculumsuspension4用于接種的含有定量接種體的液體。2.9梨白粉病Pearpowderymildew由梨球針殼（Phyllactiniapyri）和白叉絲單囊殼（Podosphaeraleucotricha）所引起的梨樹葉背產(chǎn)生白色粉斑，嚴(yán)重時白粉可覆蓋樹梢、嫩芽、葉柄等部位且葉背布滿白粉癥狀的梨樹病害?其中梨球針殼（Phyllactiniapyri）為我國主要的梨白粉病病原物?3接種體制備3.1病原物的采集采集具有典型梨白粉病病斑，而無其它病斑，且?guī)в行迈r白粉孢子堆的梨樹病葉，用干凈毛刷將病斑上的分生孢子刷于無菌水中，獲得分離物，經(jīng)形態(tài)學(xué)鑒定(參見附錄A)確認(rèn)為梨白粉病病原物后，直接用于接種或擴(kuò)繁備用。3.2病原物的保存與繁殖采用活體植株保存法：采用毛刷接種法或分生孢子懸浮液噴霧接種法將病原物接種于盆栽感病品種葉片，接種后將其置于白天溫度25℃、夜晚20℃,12h光周期的培養(yǎng)室或溫室內(nèi)培養(yǎng)。保存并擴(kuò)繁病原物。3.3接種懸浮液配置待保存并擴(kuò)繁病原物的病葉上長出新鮮孢子后，用干凈毛刷將孢子刷取于無菌水中，按體積比為0.01‰的標(biāo)準(zhǔn)向無菌水中加入吐溫20，攪拌均勻后即得分生孢子懸浮液，用血球計數(shù)板計數(shù)分生孢子數(shù)稀釋至約1×105分生孢子/mL。病原物分生孢子懸浮液從制備到接種應(yīng)限制在3h以內(nèi)。4抗性鑒定4.1田間抗性鑒定4.1.1鑒定環(huán)境條件要求選擇梨白粉病自然發(fā)病環(huán)境適宜地區(qū)進(jìn)行田間鑒定，應(yīng)為平地或緩坡地，土壤肥沃，具備排灌條件，周邊設(shè)隔離區(qū)，無大規(guī)模梨樹生產(chǎn)園，防止病害傳播干擾鑒定結(jié)果。4.1.2鑒定材料要求根據(jù)當(dāng)?shù)刈匀粭l件，選擇適宜的砧木類型對梨種質(zhì)資源等鑒定材料進(jìn)行嫁接；每份待鑒定材料保存3株以上；株行距1m~3m×3m~4m，保證樹體通風(fēng)透光；按標(biāo)準(zhǔn)生產(chǎn)園要求進(jìn)行管理，鑒定前一年對植株進(jìn)行合理的修剪促發(fā)新梢，樹齡基本一致。4.1.3田間接種5鑒定材料樹體生長良好，且具有足夠數(shù)量鑒定枝條時進(jìn)行田間抗性鑒定，接種選擇田間生長1個月內(nèi)沒有病葉的枝條上的葉片。接種采用噴霧接種法，田間接種最好在陰天或傍晚進(jìn)行，把備好的分生孢子液噴霧接種到待鑒定枝條葉片正反面至淋濕程度，套硫酸紙袋，每袋放2個濕棉球保濕，48h后去袋并標(biāo)記，每份材料接10個~15個枝條，每株調(diào)查葉片數(shù)至少100片。鑒定材料在接種前后不能噴施任何殺菌劑。4.2室內(nèi)抗性鑒定4.2.1鑒定室條件要求人工接種鑒定室應(yīng)具備人工調(diào)節(jié)溫度、濕度及光照的條件，使人工接種后具備良好的發(fā)病環(huán)境。4.2.2室內(nèi)盆栽接種選擇適宜的砧木類型對梨種質(zhì)資源鑒定材料進(jìn)行嫁接，嫁接苗木定植于盆中，定植后將盆栽移至人工接種鑒定室，接種室環(huán)境為白天溫度25℃、夜晚20℃,12h光周期，50%濕度。待新梢接近停長后，采用噴霧接種法，進(jìn)行接種，接種后無需套袋處理。每種材料調(diào)查葉片數(shù)至少30片。接種后繼續(xù)在鑒定室中80%濕度培養(yǎng)，48h后濕度調(diào)至50%。4.2.3室內(nèi)離體接種剪取鑒定材料的越冬后休眠枝，將下端剪除1cm，露出新茬，插在3cm深的清水中進(jìn)行水培，3d~5d更換一次清水。待新葉展開后，采用噴霧接種法進(jìn)行接種，接種后無需套袋處理。每個重復(fù)調(diào)查葉片數(shù)至少30片。置于白天溫度25℃、夜晚20℃、12h光周期、90%濕度的人工鑒定室培養(yǎng)，48h后濕度調(diào)至50%。剪取鑒定材料健康即將停長的枝條，去除下部10cm葉片，剪除下部莖段0.5cm，露出新茬，插在3cm深的清水中進(jìn)行水培，3d~5d更換一次清水。采用噴霧接種法進(jìn)行接種，接種后無需套袋處理。每種材料調(diào)查葉片數(shù)至少30片。置于白天溫度25℃、夜晚20℃、12h光周期、90%濕度的人工鑒定室培養(yǎng)，48h后濕度調(diào)至50%。4.3感病對照品種的選擇鑒定所用感病對照品種采用蘋果梨、早酥梨等高感品種。5病情調(diào)查5.1調(diào)查時間病情調(diào)查于接種后30d~40d病情基本穩(wěn)定后進(jìn)行。5.2調(diào)查方法6調(diào)查每份材料所有接種葉片發(fā)病情況，根據(jù)病害癥狀描述，記載葉片病情級別，計算出病情指數(shù)(DI）。重復(fù)3次，計算平均值。病情指數(shù)（DI）計算公式如下：病情指數(shù)（DI）=[Σ（各級病葉數(shù)×相應(yīng)級別）÷（調(diào)查總?cè)~數(shù)×發(fā)病最高級別代表）］5.3病情分級每片葉的發(fā)病情況按病斑占葉面積的百分率分級記錄。分級標(biāo)準(zhǔn)見表1。表1梨白粉病病情分級標(biāo)準(zhǔn)012345676抗性評價6.1鑒定有效性判別當(dāng)感病對照品種表現(xiàn)高感時（DI≥50），該批次鑒定結(jié)果視為有效。6.2抗病評價標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)病情指數(shù)確定待鑒定材料對白粉病的抗性，劃分標(biāo)準(zhǔn)見表2。表2梨白粉病抗性評價標(biāo)準(zhǔn)DI=07抗性鑒定評價的記載按照鑒定樣品編號，對樣品名稱、樣品來源、調(diào)查的病情級別、病情指數(shù)和抗性評價結(jié)果分別進(jìn)行登記，梨白粉病抗性鑒定記載表格見表3。7表3梨白粉病抗性評價記載表格3.病原菌制備時間：5.調(diào)查時間：鑒定技術(shù)負(fù)責(zé)人（簽字）：附錄A（資料性附錄）梨白粉病病原菌及危害癥狀A(yù).1學(xué)名梨球針殼Phyllactiniapyri(Cast.)HommaA.2田間癥狀梨樹白粉病可為害梨樹葉片、樹梢、嫩芽、花蕾、花柄和花瓣，甚至果實(shí)等，主要為害葉片。葉部白粉病的癥狀比較常見，初期在葉片背面產(chǎn)生圓形或不規(guī)則形、大小不一、數(shù)量不等的白色粉狀斑，白粉層稀疏；隨著病情加重，病斑連接成片，并逐漸擴(kuò)大至全葉，使葉片背面布滿了白色粉狀物，白粉層逐漸變厚；后期病斑上逐漸形成很多黃褐色小顆粒（閉囊殼最后小顆粒變?yōu)楹谏０追鄄?yán)重時，病葉失綠甚至萎縮、變褐枯死或脫落，造成過早落葉，降低樹勢。A.3形態(tài)描述菌絲體多葉背生，常存留或稍有消失，有時形成斑塊；子囊果聚生間或散生，扁球形至凸透鏡形，直徑124mm~250mm(平均184.5mm)，多為165μm~209μm；附屬絲5根~18根，多為6根~9根，長135μm~375μm，為子囊果直徑的0.8倍~2.3倍，多為1.0倍~1.6倍，無隔膜，透明