根尖細胞有絲分裂制片與觀察

根尖細胞有絲分裂制片與觀察植物根尖得分生細胞得有絲分裂,每天都有分裂高峰時間,此時經(jīng)過適當取材處理,加以固定、離析、染色、壓片等步驟,可以迅速地將細胞分散附著于載玻片和蓋玻片之間,再置于顯微鏡下觀察,可以看到大量處于有絲分裂各個時期得細胞和染色體。細胞由第一次有絲分裂結束到第二次有絲分裂結束所經(jīng)歷得過程為一個細胞分裂周期,包括間期、前期、中期、后期和末期。間期:一般持續(xù)時間比較長,就是核內染色體DNA合成得過程,能看到核得變化,如核和其內得核仁體積增大,核內存在染色質,一般情況看不到染色體。二、實驗原理前期:細胞核內染色體呈細絲狀,在核內互相纏繞成團。核仁開始消失,核膜隨之破裂。此時染色體已由兩條染色單體所組成,只在著絲點處連結。中期:各染色體得著絲點排列在赤道面上,兩臂伸向赤道面得兩旁。紡錘體完全形成,其一端與染色體得著絲點相連結,另一端集中于細胞得極處。中期染色體高度濃縮,具有各物種染色體得典型形態(tài),就是染色體計數(shù)得最好時期。后期:每一染色體得著絲點分裂,兩條染色單體彼此分開成兩個子染色體,子染色體在紡錘絲得牽引下,分別移向兩極。末期:移向兩極得染色體,逐漸松散成染色質,紡錘絲逐漸消失,在赤道面上開始出現(xiàn)細胞板,把一個細胞分隔成兩個子細胞,核膜重新形成,核仁出現(xiàn),逐漸進入間期狀態(tài)。三、儀器與材料1、材料:小麥得根尖。2、用具及藥品:顯微鏡、恒溫箱、載玻片、蓋玻片、染色缸、試劑瓶、酒精燈、鑷子、剪刀、紗布、吸水紙;無水乙醇、45%醋酸、卡諾固定液(無水乙醇∶冰醋酸=3∶1)、1N鹽酸、蒸餾水、1%醋酸洋紅、改良品紅。四、實驗程序(1)取材:選取小麥種子浸泡于溫水中,使種子吸脹,再置于墊有濕濾紙得培養(yǎng)皿中,于25℃條件下發(fā)芽,待根長約1-2cm在大量細胞進行分裂時剪根。(2)預處理:剪取得根尖放入盛有蒸餾水得小瓶,置于冰水溶液中,0-3℃處理24小時。(3)固定:主要就是殺死細胞,盡可能保持生活時得真實狀態(tài)并便于染色。將經(jīng)過預處理得根尖沖洗干凈后,用濾紙吸去沾著得水滴,以卡諾固定液固定24小時。(4)解離:將固定好得根尖移入鹽酸酒精離析液中,在35℃下離析8分鐘,或在1N鹽酸中,60℃下離析15分鐘。(5)染色:將離解好得根尖用蒸餾水沖洗幾次,在1%醋酸洋紅中染色2-4小時;或置于染色缸里,加改良品紅溶液,靜置染色10-15分鐘。(6)壓片:取已染色得根尖,置于載玻片上,在分生組織處切取一小塊,加45%醋酸(或改良品紅)一滴,蓋上蓋玻片,用刀片架起蓋玻片一角,用鑷子尖輕敲幾下,使材料分散,移去架起得刀片,再輕敲幾下,在酒精燈上微微加熱,吸去多余得染液,用手指垂直壓片(切勿移動蓋玻片),即可鏡檢。(7)觀察:在顯微鏡下觀察上述制片,先用低倍