糧油檢驗 糧谷中甲草胺、乙草胺、異丙甲草胺、丁草胺等八種酰胺類除草劑殘留的測定-氣相色譜法編制說明

PAGEPAGE13中華人民共和國國家標準“糧谷中甲草胺、乙草胺、異丙甲草胺、丁草胺等八種酰胺類除草劑殘留的測定--氣相色譜法”編制說明標準編制小組“糧谷中甲草胺、乙草胺、異丙甲草胺、丁草胺、丙草胺、敵稗、吡氟草胺、炔苯酰草胺等八種酰胺類除草劑殘留的測定方法”編制說明1.任務(wù)的來源本標準由遼寧省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局提出，由全國糧油標準化技術(shù)委員會歸口，國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局主管，沈陽農(nóng)業(yè)大學分析測試中心負責起草。項目計劃編號為：20030341-T-424。2.制標原則本標準是按照GB/T1.1-2000《標準化工作守則第1部分：標準的結(jié)構(gòu)和編寫規(guī)劃》和GB/T2001.4-2001《標準編寫規(guī)則第4部分：化學分析方法》的要求編寫的。3.研究背景酰胺類農(nóng)藥是一類多用于大豆、玉米、花生、稻米、十字花科等作物的除草劑。具有土壤處理和除禾本科雜草及小粒種子闊葉雜草的作用。酰胺類除草劑在近代農(nóng)田化學除草劑中占據(jù)重要地位，僅次于有機磷農(nóng)藥而居世界第二位。其應(yīng)用作物種類與使用面積均居除草劑的前列。大鼠內(nèi)試驗表明，酰胺類除草劑通過一系列酶促反應(yīng)會生成具有致癌作用的二烷基醌亞胺，所以它們的殘留受到廣泛的關(guān)注。國內(nèi)外有關(guān)這類除草劑，如甲草胺、乙草胺、異丙甲草胺、丙草胺等的單殘留測定已有報道，各國也有相關(guān)的檢測標準和限量要求，但目前我國尚未建立糧谷中酰胺類除草劑多殘留測定的標準。因此制定糧谷中甲草胺、乙草胺、丁草胺、異丙甲草胺等八種酰胺類除草劑殘留量的檢測方法標準，以控制和監(jiān)測上述除草劑在糧谷中的殘留是十分必要的。本標準根據(jù)發(fā)達國家中對糧谷中多種酰胺類除草劑的限量要求以及酰胺類除草劑的化學性質(zhì)，參考文獻的有關(guān)方法，提供了一種糧谷中甲草胺、乙草胺、異丙甲草胺、丁草胺、丙草胺、敵稗、吡氟草胺、炔苯酰草胺等八種酰胺類除草劑多殘留測定的氣相色譜方法。該方法簡便、快速、準確，其檢測限、回收率和精密度均能滿足殘留限量檢測的要求。酰胺類（acetanilides）除草劑化學結(jié)構(gòu)的通式為：其中Ar為芳香環(huán)，R為烷基或氯代烷基，形成特性各異的酰胺類除草劑品種。易溶于有機溶劑。八種酰胺類除草劑結(jié)構(gòu)如下：甲草胺（Alachlor）中文化學名稱：α-氯代-2',6'-二乙基-N-甲氧基甲基乙酰替苯胺英文化學名稱：2-chloro-N-(2,6-diethylphenyl)-N-(methoxymethyl)acetamide分子式：C14H20ClNO2分子量：269.8結(jié)構(gòu)式：理化性質(zhì)：原藥為乳白色晶體，熔點39.5－41.5℃，沸點100℃(0.02mmHg)，蒸氣壓2.9mPa(25℃)，比重1.133(25℃)，水中溶解度242mg/L(乙草胺（Acetochlor）中文化學名稱：2'-乙基-6'-甲基-N-(乙氧甲基)-2-氯代乙酰替苯胺英文化學名稱：2-chloro-N-(ethoxymethyl)-N-(2-ethyl-6-methylphenyl)acetamide分子式：C14H20ClNO2分子量：269.8結(jié)構(gòu)式：理化性質(zhì)：藍紫色油，熔點0℃，蒸氣壓4.53nPa(25℃)，沸點162℃/7mmHg，比重1.1358(20℃)，水中溶解度223mg/L(異丙甲草胺（Metolachlor）中文化學名稱：2-乙基-6-甲基-N-(1'-甲基-2'-甲氧乙基)氯代乙酰替苯胺英文化學名：2-chloro-N-(2-ethyl-6-methylphenyl)-N-(2-methoxy-1-methylethyl)acetamide分子式：C15H22ClNO2分子量：283.8結(jié)構(gòu)式：理化性質(zhì)：無色到淺褐色液體，沸點100℃/0.001mmHg，蒸氣壓4.2mPa(25℃)，密度1.12(20℃)，溶解度水488mg/L(25丁草胺（Butachlor）中文化學名稱：N-(丁氧甲基)-α-氯-α',6'-二乙基乙酰替苯胺英文化學名稱：N-(butoxymethyl)-2-chloro-N-(2,6-diethylphenyl)acetamide分子式：C17H26ClNO2分子量：311.9結(jié)構(gòu)式：理化性質(zhì)：理化性質(zhì)琥珀色液體，熔點<－5℃，沸點156℃/0.5mmHg，蒸氣壓0.6mPa(25℃)，密度1.070(25℃)，溶解度水20mg/L(20℃)，溶于大多有機溶劑，包括乙酸乙酯、丙酮、乙醇、苯丙草胺（Pretilachlor）中文化學名稱：2-氯-2,6'-二乙基-N-(2-丙氧乙基)乙酰替苯胺英文化學名稱：2-chloro-N-(2,6-diethylphenyl)-N-(2-propoxyethyl)acetamide分子式：C17H26ClNO2分子量：311.9結(jié)構(gòu)式：理化性質(zhì)：無色液體，沸點135℃/0.001mmHg；蒸氣壓0.133mPa(20℃)，密度1.076(20℃敵稗（Propanil）中文化學名稱：3',4'-二氯丙酰替苯胺英文化學名稱：N-(3,4-dichlorophenyl)propanamide;3',4'-dichloropropionanilide分子式：C9H9Cl2NO分子量：218.1結(jié)構(gòu)式：理化性質(zhì)：無色無味晶體，原藥為棕色晶體，熔點92－93℃，蒸氣壓0.026mPa(20℃)，0.062mPa(25℃)，密度1.41g/cm3(22℃)，溶解度水130mg/L(25℃)，異丙醇、二氯甲烷>200，甲苯50－100，己烷<1(g/L，20吡氟草胺（Diflufenican）中文化學名稱：N-(2,4-二氟苯基)-2-(3-三氟甲基苯氧基)-3-吡啶酰苯胺英文化學名稱：N-(2,4-difluorophenyl)-2-[3-(trifluoromethyl)phenoxy]-3-pyridinecarboxamide分子式：C19H11F5N2O2分子量：結(jié)構(gòu)式：理化性質(zhì)：本品原藥為無色結(jié)晶固體,熔點161~162℃。水中溶解度0.05mg/L，丙酮、二甲基酰胺100g/kg，苯乙酮、環(huán)乙酮50g/kg，環(huán)已浣、2－乙氧基乙醇、煤油<10g/kg，3,5,5－三甲基環(huán)已－2－烯酮35g/kg，二甲苯20g炔苯酰草胺（Propyzamide）中文化學名稱：N-(1,1-二甲基炔丙基)-3,5-二氯-苯甲酰胺英文化學名稱：3,5-dichloro-N-(1,1-dimethyl-2-propynyl)benzamide分子式：C12H11Cl2NO分子量：256.1結(jié)構(gòu)式：理化性質(zhì)：炔苯酰草胺原藥（質(zhì)量分數(shù)≥98.0%）外觀為無色結(jié)晶粉末；熔點155～156℃；蒸汽壓（25℃）：0.058mPa；溶解度（g/L,25℃）：甲醇、異丙醇中150，環(huán)乙烷中200，丁酮中300，二甲基亞砜中330，水中15mg/L，微溶于石油醚。正辛醇/水分配系數(shù)為3.1～3.2。遇光不穩(wěn)定，在自然光下半衰期為13～57d；在pH5～9，4.標準制定的過程4.1收集資料查閱了國內(nèi)外有關(guān)上述八種除草劑的檢測標準、分析方法、論文等資料文獻，查閱了美國食品藥品管理局、美國環(huán)保局、食品法典委員會（CAC）及農(nóng)藥殘留法典委員會（CCPR）、美國公職農(nóng)業(yè)化學家協(xié)會（AOAC）、及日本厚生省等有關(guān)資料和網(wǎng)站。目前國內(nèi)外對上述除草劑的檢測主要還是單殘留分析方法或包含3~5個除草劑的農(nóng)藥多殘留分析方法，詳細情況及本標準在制定過程中主要參考的標準和文獻如下：4.1.1國外有關(guān)酰胺類除草劑殘留檢測方法4.1.1.1美國食品藥品管理局FDA標準：甲草胺alachlor、乙草胺acetochlor、丁草胺butachlor、異丙甲草胺metolachlor、吡唑草胺metazachlor、乙丙甲草胺diethatyl-ethyl、二甲草胺dimethachlor克草胺dimethachlor、二甲吩草胺dimethenamid單殘留檢測方法（分別參見FDA農(nóng)藥殘留分析手冊I：Sec.303C1C、302E2/E3+C1C、302C5C、302E2/E3+C1、302noCC.304C1-C44.1.1.2食品法典委員會（CAC）農(nóng)藥殘留專家委員會（CCPR）推薦的農(nóng)殘檢測標準未見有關(guān)上述除草劑的多殘留檢測方法。4.1.1.3日本厚生勞動省食品中殘留農(nóng)藥獸藥飼料添加劑檢測方法JAP-71：提供了“甲草胺、異丙威、亞胺菌、乙霉威、異丁草胺、吡螨胺、多效唑、雙苯三唑醇、蚊蠅醚、嘧草醚、氯苯嘧啶醇、丁草胺、氟酰胺、丙草胺、異丙甲草胺、苯噻草胺、咪路菌和環(huán)草啶“等18種農(nóng)藥的氣相色譜和氣相色譜-質(zhì)譜檢測方法”。其方法原理為：樣品中農(nóng)藥用乙腈提取，提取液經(jīng)石墨碳/酰胺丙基甲硅烷基化硅膠固相萃取柱凈化，氣相色譜-質(zhì)譜測定。最低檢出限為0.00012-0.02mg/kg4.1.2國內(nèi)有關(guān)酰胺類除草劑殘留檢測方法4.1.2.1GB/T5009.164-2003大米中丁草胺殘留量的測定。其方法原理試樣中丁草胺經(jīng)石油醚提取，中性氧化鋁凈化，經(jīng)具有電子捕獲器的氣相色譜儀測定。4.1.2.2SN0712-1997出口糧谷中戊草丹、二甲戊靈、丙草胺、氟酰胺、滅銹胺、苯噻酰草胺殘留量檢驗。其方法原理：試樣中的農(nóng)藥經(jīng)有機溶劑提取、凈化，用具有氮磷檢測器的氣相色譜儀測定。4.1.2.3GB/T5009.174-2003花生、大豆中異丙甲草胺的測定試樣中的異丙甲草胺經(jīng)有機溶劑提取、凈化，用具有電子捕獲器的氣相色譜儀測定。4.1.2.4GB/T5009.177-2003大米中敵稗殘留量的測定試樣中的敵稗用丙酮提取，經(jīng)液-液分配和弗羅里硅土凈化，用帶電子捕獲檢測器的氣相色譜儀測定。4.1.2.5GB/T19649-2006：糧谷中475種農(nóng)藥及相關(guān)化學品殘留量的測定。其方法原理：用乙腈加速溶劑萃取，經(jīng)Envi-18柱、Envi-Carb和Sep-PakNH2串聯(lián)柱凈化，氣相色譜-質(zhì)譜儀測定。最低檢出限為0.0125-0.0375mg/kg4.1.3其他參考文獻4.1.3.1李建中等，高效液相色譜法同時測定大豆中12種除草劑的殘留量[J].色譜,24,(6),585~588.4.1.3.2謝麗琪，藍芳等,毛細管氣相色譜法測定糧谷及油籽中酰胺類除草劑的殘留[J].食品科學,2008,29(2):310～314.1.3.3陸梅,丁長春.高效液相色譜法測定水中4種酰胺類除草劑[J].環(huán)境檢測管理與技術(shù),2007,19(3):35～36國內(nèi)外有關(guān)除草劑殘留的測定方法標準中，尚無上述八種酰胺類除草劑多殘留測定方法。本標準參考了FDA方法（4.1.1.1）和日本厚生勞動省的JAP-71方法（4.1.1.3）的樣品處理方法，檢測限和重現(xiàn)性均能滿足有關(guān)法規(guī)對糧谷中酰胺類除草劑的限量要求，適用于糧谷中酰胺類除草劑殘留量的測定。4.2收集典型樣品為確保標準的廣泛適用性，收集了具有代表性，且可能在生產(chǎn)中施用八種酰胺類除草劑的大米、小米、黃米、黑米、糯米、玉米、大麥、小麥、燕麥、蕎麥、大豆、綠豆、紅小豆、高粱米等14種糧谷樣品。4.3試驗驗證在查閱了大量國內(nèi)外相關(guān)文獻資料和綜合調(diào)研結(jié)果的基礎(chǔ)上，擬定了“糧谷中甲草胺、乙草胺、異丙甲草胺、丁草胺、丙草胺、敵稗、吡氟草胺、炔苯酰草胺等八種酰胺類除草劑殘留的測定方法”試驗方案，包括試樣提取方法的優(yōu)化、凈化方法的優(yōu)化、色譜條件的優(yōu)化等條件試驗，并對方法的線性范圍、最低檢出限、最低定量限、精密度、準確度及方法的適用性等進行了研究和比對，經(jīng)過五家有資質(zhì)的實驗室進行驗證試驗。本項目所建立的方法前處理過程僅需提取、凈化、濃縮后即可測定。樣品前處理過程簡單，靈敏度高、成本低。且所用乙腈、正己烷、乙酸乙酯等溶劑均為實驗室常用藥品。方法易于推廣和普及應(yīng)用。5.標準的技術(shù)內(nèi)容及確定依據(jù)綜合以上標準及文獻，擬定了初步實驗方案，本標準的方法原理為：稱取粉碎（過40目篩）試樣于聚苯乙烯具塞離心管中，加入乙腈超聲提取，離心，取上清液濃縮至近干，殘渣用正己烷溶解；弗羅里硅土固相萃取柱凈化，正己烷-乙酸乙酯混合溶液洗脫，洗脫液蒸干后用正己烷溶解。氣相色譜-電子捕獲檢測器測定。保留時間定性，外標法定量。6.主要試驗的分析、綜合報告下面對整個實驗過程的主要影響因素及相關(guān)問題進行說明如下。6.1關(guān)于氣相色譜條件的選擇及優(yōu)化6.上述八種酰胺類除草劑均屬中、高極性的化合物，使用HP-1或HP-5色譜柱均可，本文選擇了HP-1毛細管柱（30m×0.32mm×0.25μm），經(jīng)試驗優(yōu)化，色譜分離良好，見圖3.。6.1.2根據(jù)待測組分的沸點初步確定進樣口溫度：230℃；檢測器溫度：320℃再進一步對程序升溫條件進行試驗優(yōu)化：程序升溫條件1：初始溫度80℃，保持1min，然后以8℃/min升溫至220℃，保持0min，再以15℃/min升溫至280℃，保持8min。色譜圖見圖1。程序升溫條件2：初始溫度80℃，保持1min，以15℃/min升溫至280℃，保持8min。色譜圖見圖2。程序升溫條件3：初始溫度120℃，保持0min；然后以15℃/min升溫至280℃，保持8min。色譜圖見圖3。炔苯酰草胺tr=14.721；敵稗+乙草胺tr=15.777；甲草胺tr=16.095；異丙甲草胺tr=17.623；丁草胺tr=18.815；丙草胺tr=19.218；吡氟草胺tr=20.960。圖1程序升溫條件1時八種標準樣品色譜圖炔苯酰草胺tr=9.748；敵稗tr=10.260；乙草胺tr=10.366；甲草胺tr=10.494；異丙甲草胺tr=10.996；丁草胺tr=11.975；丙草胺tr=12.222；吡氟草胺tr=13.370。圖2程序升溫條件2時八種標準樣品色譜圖炔苯酰草胺tr=7.696；敵稗，tr=8.593；乙草胺tr=8.776；甲草胺tr=8.986；異丙甲草胺tr=9.825；丁草胺tr=11.591；丙草胺tr=11.981；吡氟草胺tr=13.702。圖3程序升溫條件3時八種標準樣品色譜圖實驗表明，條件1中敵稗、乙草胺的保留時間完全重合，形成一個色譜峰（見圖1中tr15.777），而且同甲草胺的色譜峰部分重合，且色譜峰拖尾嚴重（tr16.095）；條件2雖分離度有所改善，但上述三個組分仍重合較多（見圖2tr10.260、10.366、10.494），未能完全分離；相比之下條件3時，八種除草劑不但能夠得到較好的分離，且保證出峰時間和峰形都較為適宜（見圖3），故選擇條件3的升溫程序。6.2關(guān)于提取劑及其用量的選擇6.2.1表1兩種溶劑的提取效率農(nóng)藥回收率（%）丙酮乙腈甲草胺94.795.4乙草胺89.291.3丙草胺96.394.9丁草胺94.196.7敵稗95.692.8炔苯酰草胺92.095.5異丙甲草胺95.294.4吡氟草胺96.795.8平均回收率94.294.6表1結(jié)果表明，兩種提取劑的提取效率接近，且均較高，但丙酮提取液提出的油脂、色素等雜質(zhì)較多(見圖4)，給后續(xù)的凈化步驟帶來問題，而乙腈提取干擾物較少（見圖5），所以選擇乙腈作為提取劑。1.炔苯酰草胺、2.敵稗、3.乙草胺、4.甲草胺、5.異丙甲草胺、6.丁草胺、7.丙草胺、8.吡氟草胺圖4丙酮作為提取劑的樣品色譜圖1.炔苯酰草胺、2.敵稗、3.乙草胺、4.甲草胺、5.異丙甲草胺、6.丁草胺、7.丙草胺、8.吡氟草胺圖5乙腈作為提取劑的樣品色譜圖6.2.2提取劑的用量提取劑的體積應(yīng)保證完全浸泡樣品，如果體積過少，會影響提取效果，但用量太多不僅浪費，還會污染環(huán)境，且在后續(xù)的濃縮過程中造成較大的麻煩。根據(jù)試樣的性質(zhì)和取樣量本試驗選取了五組實驗值：10mL、15mL、20mL、25mL和30mL。當取樣量為5g時，不同提取劑用量的表2不同提取劑用量對回收率的影響。農(nóng)藥回收率%10mL15mL20mL25mL30mL甲草胺81.683.792.692.894.7乙草胺78.782.193.592.295.4丁草胺70.581.785.886.589.5丙草胺76.583.290.792.191.3敵稗75.280.589.488.292.1炔苯酰草胺69.175.489.890.592.5異丙甲草胺67.379.293.591.794.2吡氟草胺75.178.787.189.490.6由表2可知，提取劑大于20mL時，樣品中的殘留農(nóng)藥提取較完全，當提取劑用量繼續(xù)增加時，提取率增加不明顯，故選擇20mL提取劑用量。4.3關(guān)于超聲提取時間為使提取完全，又不浪費時間，本試驗設(shè)定了四組實驗值，分別測定其添加回收率，結(jié)果見表6。表3超聲時間與回收率的關(guān)系超聲提取時間（min）添加回收率（%）5101520甲草胺83.090.593.090.1乙草胺79.290.794.492.5敵稗81.886.196.294.7丙草胺75.289.691.590.6炔苯酰草胺77.382.594.392.4異丙甲草胺74.591.792.793.3吡氟草胺78.285.392.294.8丁草胺80.789.693.592.8平均回收率78.0188.2593.47592.65試驗結(jié)果表明：超聲提取15min即達到理想的提取效率。6.4關(guān)于凈化條件的選擇6.4.1層析柱試驗：在試樣中添加一定濃度的混合標準溶液，分別以中性氧化鋁和弗羅里硅土凈化，結(jié)果見圖6圖6：兩種凈化材料效果的比較由圖6可見，中性氧化鋁對糧谷中主要干擾物質(zhì)油脂、色素的去除效果較好，但是農(nóng)藥的添加回收率較低，所以不適用于酰胺類除草劑的凈化。而弗羅里硅土在除油脂、色素的效果上稍遜于中性氧化鋁，但其樣品添加回收率較高，所以選擇其為凈化材料。6.4.2根據(jù)待測組分的極性和凈化柱的性質(zhì)，選擇了正己烷+乙酸乙酯的混合溶液作為洗脫液，分別試驗了不同配比的洗脫液。結(jié)果見表4農(nóng)藥添加回收率（%）正己烷-乙酸乙酯90+10正己烷-乙酸乙酯85+15正己烷-乙酸乙酯80+20正己烷-乙酸乙酯75+25炔苯酰草胺46.975.292.397.4敵稗26.467.490.296.3乙草胺76.284.594.795.5甲草胺79.586.796.096.1異丙甲草胺64.583.695.395.3丁草胺94.593.297.498.9丙草胺91.092.596.597.6吡氟草胺81.790.494.296.8結(jié)果顯示，若乙酸乙酯的比例試驗結(jié)果？越高，則待測組分的回收率越高，但樣品中的油脂和色素同時也被洗脫下來。綜合比較添加回收率及凈化效果，最終確定正己烷+乙酸乙酯洗脫液的比例為80+20。以正己烷+乙酸乙酯（80+20）為洗脫劑，本文又對弗羅里硅土層析柱和弗羅里硅土固相萃取柱（SPE）分別進行了不同用量洗脫劑的對比試驗，結(jié)果見圖7和圖8。圖7弗羅里硅土層析柱不同用量的己烷+乙酸乙酯（80+20）洗脫劑對八種酰胺類除草劑的洗脫效果由圖7可知，在層析柱上，八種酰胺類除草劑的回收率隨著洗脫溶液體積的增加而提高，當30mL時，回收率已接近100%，繼續(xù)增加洗脫劑，回收率沒有顯著提高，故對層析柱，選擇30mL的洗脫液用量。圖8固相萃取析柱不同用量的己烷+乙酸乙酯（80+20）洗脫劑對八種酰胺類除草劑的洗脫效果由圖8可知，在固相萃取柱上，八種酰胺類除草劑的回收率隨著洗脫溶液體積的增加而提高，當15mL時，回收率已接近100%，繼續(xù)增加洗脫劑，回收率沒有顯著提高，故對固相萃取柱選擇15mL的洗脫液用量。比較圖7和圖8可見，兩種萃取柱可獲得同樣的萃取效果，均可采用，各實驗室可根據(jù)本室情況選擇。6.5濃縮方法首先將30mL洗脫液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器蒸約5mL左右，再用氮氣吹干。6.6標準樣品本標準所使用的標準樣品均由Sigma-Aldrich公司提供，純度均大于96.0%。7.方法技術(shù)參數(shù)7.1靈敏度方法靈敏度用最低檢出限來衡量。最低檢出限根據(jù)“GB/T5009.1-2003食品衛(wèi)生檢驗方法理化部分總則”附錄A中A.2.1計算：空白樣品和標準溶液添加濃度均為0.01μg/g的樣品的色譜圖本別見圖9、10圖9空白樣品的色譜圖1.炔苯酰草胺，tr=7.754；2.敵稗，tr=8.554；3.乙草胺，tr=8.818；4.甲草胺，tr=9.025；5.異丙甲草胺，tr=9.869；6.丁草胺，tr=11.629；7.丙草胺tr=12.052；8.吡氟草胺tr=13.742。圖10標準溶液添加濃度為0.01mg/kg的樣品的色譜圖用公式（2）來計算最低定量限：CL=……………….……..（1）式中：c為樣品添加濃度均為0.01mg/kg；信噪比S/N分別為：炔苯酰草胺12.6、敵稗13.2、乙草胺10.2、甲草胺14.1、異丙甲草胺4.6、丁草胺7.2、丙草胺4.2、吡氟草胺14.3。由公式（1）計算得八種酰胺類除草劑的最低檢出限分別為：炔苯酰草胺0.003mg/kg敵稗0.003mg/kg甲草胺0.002mg/kg乙草胺0.003mg/kg異丙甲草胺0.007mg/kg吡氟草胺0.003mg/kg丁草胺0.005mg/kg丙草胺0.01mg/kg。用公式（2）來計算最低定量限：S=（μg/g）……..（2）式中：c為樣品添加濃度0.01mg/kg；信噪比S/N分別為：炔苯酰草胺12.6、敵稗13.2、乙草胺10.2、甲草胺14.1、異丙甲草胺4.6、丁草胺7.2、丙草胺4.2、吡氟草胺14.3。由公式計算得本方法八種酰胺類除草劑的定量限分別為：炔苯酰草胺0.01mg/kg敵稗0.01mg/kg甲草胺0.01mg/kg乙草胺0.01mg/kg異丙甲草胺0.02mg/kg吡氟草胺0.01mg/kg丁草胺0.02mg/kg丙草胺0.05mg/kg。檢測限和定量限的結(jié)果均滿足某些發(fā)達國家和我國對糧谷中上述除草劑最高殘留限量的要求。各國及我國糧谷上述除草劑最高殘留限量見表5表5部分國家糧谷中酰胺類除草劑最高允許殘留限量（單位：mg/kg）名稱Name本方法定量限中國China日本Japan美國USA歐盟EU其他Other甲草胺Alachlor0.010.020.20.05-0.02（加拿大）乙草胺Acetochlor0.01-0.020.02-0.02（韓國）丁草胺Butachlor0.020.50.1--0.1（韓國）丙草胺Pretilachlor0.050.10.1--0.1（韓國）敵稗Propanil0.012.02.010.0-0.2（韓國）炔苯酰草胺Propyzamide0.01-0.02-0.020.02（英國）異丙甲草胺Metolachlor0.020.50.10.10.10.1（韓國）吡氟草胺Diflufenican0.01-0.05--0.05（澳大利亞）注：以所有糧谷中最高殘留限量的最低值計由表5可見，各國糧谷中最高殘留限量要求最嚴格的指標是分別是甲草胺0.02mg/kg，乙草胺0.02mg/kg，丙草胺0.1mg/kg，丁草胺0.1mg/kg，敵稗0.2mg/kg，炔苯酰草胺0.02mg/kg，異丙甲草胺0.1mg/kg，吡氟草胺0.05mg/kg。按照國家有關(guān)標準，其檢測方法的最低定量限應(yīng)分別小于其響應(yīng)的最高殘留限量。本方法8種酰胺類除草劑的最低定量限分別是甲草胺0.01mg/kg，乙草胺0.01mg/kg，丙草胺0.05mg/kg，丁草胺0.02mg/kg，敵稗0.01mg/kg，炔苯酰草胺0.01mg/kg，異丙甲草胺0.02mg/kg，吡氟草胺0.01mg/kg。均低于最高殘留限量的1/2~1/10，符合國家標準的要求，也適用于以上各國限量標準。7.2方法的選擇性本方法的檢測序號僅與被檢組分有關(guān)，于其他化合物無關(guān)。7.3檢測線性范圍為測定檢測線性范圍，配制了0.005μg/g、0.02μg/g、0.05μg/g、0.2μg/g、0.5μg/g系列濃度的標準溶液，按樣品測定步驟測定檢測范圍，證明試樣濃度在0.005μg/g~0.5μg/g之間，濃度與其色譜響應(yīng)間成線性，其線性方程和相關(guān)系數(shù)見表6?？纱_定本標準方法檢測范圍為0.005μg/g~0.5μg/g，含量較高的樣品應(yīng)稀釋到線性范圍內(nèi)后進行測定。表6八種酰胺類除草劑的線性范圍、線性方程及相關(guān)系數(shù)農(nóng)藥線性范圍（μg/g）線性方程相關(guān)系數(shù)r甲草胺0.005~0.5y=739549x+4775.51.0000乙草胺0.005~0.5y=621596x+19980.9997敵稗0.005~0.5y=616423x+2412.41.0000丙草胺0.005~0.5y=355585x+2186.70.9997炔苯酰草胺0.005~0.5y=2×106x+7325.40.9999異丙甲草胺0.005~0.5y=395577x+2829.41.0000吡氟草胺0.005~0.5y=1×106x+4975.60.9997丁草胺0.005~0.5y=592555x+1769.80.99987.2準確度準確度是衡量可靠性的另一個指標，準確度是在一定條件下多次測定的平均值與真值相符合的程度。色譜法的準確度用添加回收率表示，回收率應(yīng)滿足表5的要求。添加回收率方法是在樣品中加入已知量的待測物的標準品，然后按照相同的樣品處理及檢測方法進行檢測，根據(jù)下式計算回收率，本實驗回收率結(jié)果見表7?；厥章?…………..……….（3）式中Xl——空白試樣的測定值，單位為微克每克（μg/g）；X2——試樣中標準物質(zhì)的測定值，單位為微克每克（μg/g）；S——試樣中標準物質(zhì)的加入量，單位為微克每克（μg/g）。表7農(nóng)殘分析實驗方法驗證標準定量檢出限(mg/kg)變異系數(shù)CV(%)平均回收率(%)≤0.0013650～120＞0.001~≤0.013260～120＞0.01~≤0.12270～120＞0.1~≤11870～110＞11470～11014種糧谷的添加量與回收率（單位：%）（見表8~12）炔苯酰草胺0.01mg/kg、敵稗0.01mg/kg、甲草胺0.01mg/kg、乙草胺0.01mg/kg、異丙甲草胺0.02mg/kg、吡氟草胺0.01mg/kg、丁草胺0.02mg/kg、丙草胺0.05mg/kg。表8大米中八種除草劑3水平添加量（每個水平5個平行樣）檢測回收率及變異系數(shù)添加量1（mg/kg）回收率（%）添加量2（mg/kg）回收率（%）添加量3（mg/kg）回收率（%）平均值變異系數(shù)平均值變異系數(shù)平均值變異系數(shù)甲草胺0.0193.764.020.180.866.020.589.113.05乙草胺0.0197.422.730.176.335.690.591.235.17敵稗0.01103.178.76281.364.17287.522.78丙草胺0.0593.759.630.189.756.720.595.422.96炔苯酰草胺0.0189.806.420.0289.314.310.594.253.08異丙甲草胺0.0292.157.180.197.266.150.594.784.17吡氟草胺0.05103.725.840.0295.6210.360.5101.236.05丁草胺0.0294.328.680.5104.288.770.595.615.74表9玉米中八種除草劑3水平添加量（每個水平5個平行樣）檢測回收率及變異系數(shù)添加量1（mg/kg）回收率（%）添加量2（mg/kg）回收率（%）添加量3（mg/kg）回收率（%）平均值變異系數(shù)平均值變異系數(shù)平均值平均值甲草胺0.01106.8511.320.193.698.260.582.764.38乙草胺0.0195.169.830.1101.755.970.591.4212.64敵稗0.01109.168.45282.879.03278.214.06丙草胺0.05106.286.270.186.439.310.576.534.15炔苯酰草胺0.0180.2610.220.0298.317.470.597.4210.19異丙甲草胺0.02102.416.360.1103.6710.250.579.104.96吡氟草胺0.0599.6611.030.1102.4512.070.592.167.18丁草胺0.02102.489.680.578.564.780.577.072.36表10大麥中八種除草劑3水平添加量（每個水平5個平行樣）檢測回收率及變異系數(shù)添加量1（mg/kg）回收率（%）添加量2（mg/kg）回收率（%）添加量3（mg/kg）回收率（%）平均值變異系數(shù)平均值變異系數(shù)平均值平均值甲草胺0.01111.3510.320.173.425.130.575.894.35乙草胺0.0195.067.890.172.8311.350.573.644.73敵稗0.01112.5111.230.273.195.26271.273.72丙草胺0.0575.265..350.171.665.620.572.393.25炔苯酰草胺0.0176.477.720.0297.866.870.584.769.39異丙甲草胺0.0279.3212.510.196.7212.090.570.496.09吡氟草胺0.0595.7810.850.195.2012.650.584.189.27丁草胺0.0288.195.680.196.4813.750.599.7612.25表11大豆中八種除草劑3水平添加量（每個水平5個平行樣）檢測回收率及變異系數(shù)添加量1（mg/kg）回收率（%）添加量2（mg/kg）回收率（%）添加量3（mg/kg）回收率（%）平均值變異系數(shù)平均值變異系數(shù)平均值平均值甲草胺0.0196.537.630.175.878.090.582.075.09乙草胺0.01103.7810.070.179.328.270.571.592.17敵稗0.01110.2111.250.0576.876.910.594.288.97丙草胺0.0588.219.870.174.566.350.576.874.72炔苯酰草胺0.0196.358.750.0590.758.220.584.848.02異丙甲草胺0.02100.298.150.274.696.750.581.175.84吡氟草胺0.05105.1512.730.0582.3911.270.590.268.27丁草胺0.0286.4211.270.2593.656.940.579.375.03表12紅豆中八種除草劑3水平添加量（每個水平5個平行樣）檢測回收率及變異系數(shù)添加量1（mg/kg）回收率（%）添加量2（mg/kg）回收率（%）添加量3（mg/kg）回收率（%）平均值變異系數(shù)平均值變異系數(shù)平均值平均值甲草胺0.0193.269.050.176.423.640.5110.279.02乙草胺0.01103.145.220.175.496.610.597.01