抗原抗體反應(yīng)與非標(biāo)記免疫分析

抗原抗體反應(yīng)與非標(biāo)記免疫分析概念：是指抗原與相應(yīng)抗體之間所發(fā)生的特異性結(jié)合。體內(nèi)反應(yīng)：中和消除異物，維持正常。體外反應(yīng)：診斷、鑒別抗原或抗體。

血清學(xué)反應(yīng)：≠抗原抗體反應(yīng)第一節(jié)抗原抗體反應(yīng)抗原抗體反應(yīng)在體外，依相應(yīng)抗原物理性狀（顆粒狀或可溶性）以及反應(yīng)的條件（電解質(zhì)、補(bǔ)體等）不同，可出現(xiàn)凝集、沉淀、細(xì)胞溶解和補(bǔ)體結(jié)合等反應(yīng)。分為兩個(gè)階段第一階段：特異性結(jié)合——不可見第二階段：免疫復(fù)合物沉積——可見物質(zhì)基礎(chǔ):

抗原表位與抗體高變區(qū)間的互補(bǔ)結(jié)合抗原表位與抗體高變區(qū)的溝槽分子表面的結(jié)合抗原抗體之間的結(jié)合力親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體一、抗原抗體的結(jié)合力抗原和抗體的結(jié)合是互補(bǔ)性的特異性結(jié)合不形成牢固的共價(jià)鍵，通過(guò)非共價(jià)鍵結(jié)合這種弱的結(jié)合力涉及幾種分子間的作用力

*1．靜電引力：相反電荷的基團(tuán)之間。距離越近，作用力越強(qiáng)。

*2．范德華引力：電子云產(chǎn)生。*3．氫鍵結(jié)合力：氫原子間。

*4．疏水作用：疏水基團(tuán)排水積聚的力。

最強(qiáng)的抗原抗體反應(yīng)力。靜電引力（electrostaticforces）范德華引力:作用最小（vanderWaalsinteractions）氫鍵:最具特異性（hydrogenbond）疏水作用力:作用最大（hydrophobicinteractions）

抗原抗體結(jié)合力示意圖抗原抗體結(jié)合力二、抗原抗體的親和性和親和力親和性是抗體分子上一個(gè)抗原結(jié)合點(diǎn)與對(duì)應(yīng)的抗原決定簇之間的相適應(yīng)性而存在著的引力，這是抗原與抗體之間固有的結(jié)合力。抗體親合力是指反應(yīng)系統(tǒng)中復(fù)雜抗原與相應(yīng)抗體之間的結(jié)合能力。多價(jià)優(yōu)勢(shì)。

親和力與親和性、抗體的結(jié)合價(jià)和抗原的有效決定簇?cái)?shù)目相關(guān)。親和力越大，抗原抗體結(jié)合越牢固。

三、親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體血清學(xué)反應(yīng)條件下，抗原抗體均帶負(fù)電荷，使極化的水分子在其周圍形成水化層，成為親水膠體。當(dāng)抗原與抗體結(jié)合后，表面電荷減少，水化層變?。欢矣捎诳乖贵w復(fù)合物形成后，與水接觸的表面積減少，由親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體。在電解質(zhì)作用下，各疏水膠體之間靠攏，形成可見的抗原抗體復(fù)合物。返回親水膠體疏水膠體轉(zhuǎn)化NaCl可見反應(yīng)

可見反應(yīng)(沉淀)抗原抗體復(fù)合物

(疏水膠體)電解質(zhì)

抗原(親水膠體)

抗體(親水膠體)

+第二節(jié)抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)1.特異性2.比例性3.可逆性

特異性：抗原與抗體結(jié)合反應(yīng)的專一性抗原抗體反應(yīng)特異性示意圖分子基礎(chǔ)：抗原表位與抗體分子高變區(qū)之間空間構(gòu)型的互補(bǔ)性一、特異性*交叉反應(yīng)(crossreaction)兩種不同的抗原物質(zhì)具有部分相同或類似結(jié)構(gòu)的抗原決定簇，則可與彼此相應(yīng)的抗體反應(yīng)。

交叉反應(yīng)

特異性示意圖前帶：抗體過(guò)量后帶：抗原過(guò)量等價(jià)帶：抗原抗體比例合適

抗原抗體反應(yīng)比例性示意圖比例性：抗原與抗體發(fā)生可見反應(yīng)需遵循一定的量比關(guān)系二、比例性網(wǎng)格學(xué)說(shuō)（latticetheory）抗體過(guò)?？乖^(guò)剩抗體抗體比例合適

比例性示意圖

抗體過(guò)量比例合適抗原的量抗原過(guò)量抗體沉淀的量前帶等價(jià)帶后帶三、可逆性概念：是指抗原與抗體復(fù)合物在一定條件下可解離為游離抗原與抗體的特性。解離后抗原抗體仍保持原有特性。

一定條件：低pH、高濃度鹽等。常用于解離抗原抗體復(fù)合物的物質(zhì)有：

3mol/L硫氰化鉀、pH2.40.1mol/L甘氨酸、

7mol/L尿素等?？贵w混有Ag抗體-Ag抗體-Ag分離劑一、抗原抗體結(jié)合二、分離抗體

可逆性示意圖抗體111可逆性K（親和常數(shù)）=Ag+AbAgAb四、影響抗原抗體反應(yīng)的因素（一）反應(yīng)物自身因素*抗原：

1.理化特性

2.Ag決定簇?cái)?shù)量

3.Ag決定簇種類例如，可溶性抗原與相應(yīng)抗體反應(yīng)出現(xiàn)沉淀，而顆粒性抗原與相應(yīng)抗體反應(yīng)則出現(xiàn)凝集;單價(jià)抗原與抗體結(jié)合不出現(xiàn)可見反應(yīng);粗糙型細(xì)菌在生理鹽水中易出現(xiàn)自凝；紅細(xì)胞與IgG類抗體結(jié)合不出現(xiàn)直接凝集等。*抗體：1.來(lái)源2.特異性與親合力3.濃度來(lái)源：來(lái)自不同動(dòng)物的免疫血清，其反應(yīng)性有差異。家兔等大多數(shù)動(dòng)物的免疫血清具有較寬的等價(jià)帶，通常在抗原過(guò)量時(shí)才易出現(xiàn)可溶性免疫復(fù)合物；馬等大動(dòng)物和人的免疫血清等價(jià)帶較窄，少量的抗原或抗體過(guò)剩，均可形成可溶性免疫復(fù)合物；家禽免疫血清不能結(jié)合哺乳動(dòng)物的補(bǔ)體，并且在高鹽濃度（80g/L）NaCl溶液中沉淀現(xiàn)象明顯。單克隆抗體一般不適用于沉淀反應(yīng)或凝集反應(yīng)。（二）環(huán)境條件：*電解質(zhì)：0.85%NaCl*酸堿度：pH6～9*溫度：15～40℃*酸凝集：當(dāng)pH為3左右時(shí)，接近細(xì)菌Ag的等電點(diǎn)，可出現(xiàn)非特異性凝集。酸堿度溫度作用時(shí)間

抗原抗體反應(yīng)應(yīng)有足夠的時(shí)間，不同反應(yīng)時(shí)間不同?？寡澹褐缚乖斯っ庖邔?shí)驗(yàn)動(dòng)物，獲得含特異性抗體的血清。多克隆抗體（PAb）：多個(gè)抗原決定簇免疫機(jī)體所產(chǎn)生的多種抗體的混合物。多個(gè)B淋巴細(xì)胞克隆所分泌的抗體單克隆抗體（monoclonalantibody，MAb）：只針對(duì)某一特定的抗原決定簇，純度高的抗體。單個(gè)B淋巴細(xì)胞克隆所分泌的抗體第三節(jié)抗血清的制備和抗體的純化抗原表位，抗原結(jié)合位點(diǎn)，抗原決定簇（epitope）Ag1234Ag

單克隆抗體

B1B2B3B4B3B3B3B32

多克隆抗體3411、單克隆抗體的特點(diǎn)特異性強(qiáng)，具有抗原結(jié)合位點(diǎn)的專一性。（不是抗原的專一性?。┮蚪Y(jié)合位點(diǎn)的單一性，有時(shí)不易捕捉抗原，一株單克隆抗體與抗原不易產(chǎn)生凝集反應(yīng)或沉淀反應(yīng)。

抗體的性質(zhì)相同，容易純化、標(biāo)記。2、多克隆抗體的特點(diǎn)

多抗是單抗的混合物，因此多抗的性質(zhì)是一個(gè)群體綜合的性質(zhì)。特異性一般比單抗差因?yàn)橛刹煌再|(zhì)的抗體組成，只要其中含交叉反應(yīng)的抗體，多抗就有交叉反應(yīng)，所以多抗更容易有交叉反應(yīng)。

比單抗更容易捕捉抗原。因?yàn)楹锌共煌砦坏目贵w，多種抗體都可與抗原結(jié)合。

抗體的純化、標(biāo)記比單抗難，因?yàn)楹懈鞣N不同類型、亞類的抗體，提純、標(biāo)記的方法有所差別。同時(shí)，血清中含有的雜蛋白比較多。二、抗體的制備1、單克隆抗體的制備無(wú)法采用生物化學(xué)的方法從多抗中分離必須采用細(xì)胞雜交的方法來(lái)制備能否篩選到理想的單克隆抗體有技術(shù)問(wèn)題也有機(jī)遇問(wèn)題

制備單克隆抗體的基本原理：

致敏的B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞（myeloma）

（能夠分泌特異性的抗體，（不能分泌特異性的抗體，不能在體外長(zhǎng)期生存）但能在體外長(zhǎng)期生存）

陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞

(hybridoma)

（既能分泌特異性抗體，又能夠在體外長(zhǎng)期生存）克隆化培養(yǎng)

（產(chǎn)生單克隆的陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞）生產(chǎn)單克隆抗體

1222212脾臟細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞融合2、多抗的制備常用的免疫動(dòng)物免疫的基本步驟1）常用的免疫動(dòng)物兔子（rabbit）：最常用于自制抗體，抗體量較多。（新西蘭，大耳白）小鼠（mouse）：可用于自制抗體，但抗體量很少。（BALB/C，昆明鼠）大鼠（rat）：可用于自制抗體，免疫過(guò)程要麻醉動(dòng)物。（Wistar大鼠）羊（sheep、goat）：常用于較大批量地生產(chǎn)抗體（商品）。馬（horse）：常用于大批量生產(chǎn)治療用抗體（商品）。豚鼠（guineapig）：國(guó)外實(shí)驗(yàn)室常用。2）免疫的基本步驟基礎(chǔ)免疫：首次，抗原用量大，用弗式完全佐劑（ComplateFreund’adjuvand，含礦物油，卡介苗等）。加強(qiáng)免疫：第2次以后，抗原量減半，多次，間隔2-4周，用弗式不完全佐劑（IncomplateFreund’adjuvand，不含卡介苗）。取血測(cè)效價(jià)：加強(qiáng)免疫兩次或三次以后的第7天取血。放血制備血清：最后一次免疫后7-10天放血。（在三角瓶中加一些生理鹽水，放血放置一段時(shí)間，凝固，吸取血清，離心，分裝，凍存）3)如何免疫兔子2000g（雌雄均可），健康，無(wú)病原（小鼠20g，大鼠200g）基礎(chǔ)免疫0.5ml抗原(含0.25~0.5mg蛋白或108顆?？乖?0.5ml弗式完全佐劑(CFA)（小鼠0.2ml）制備抗原-佐劑乳化液背部、頸部皮下多點(diǎn)注射或腿部肌肉注射（注意：不要剪毛）加強(qiáng)免疫間隔2-4周,可進(jìn)行多次0.5ml抗原（蛋白量減半）0.5ml弗式不完全佐劑（IFA）制備抗原-佐劑乳化液背部、頸部皮下多點(diǎn)注射或腿部肌肉注射免疫3~4次以后從耳靜脈取血檢測(cè)效價(jià)酶聯(lián)法：1:104以上，能達(dá)到1:106。免疫雙擴(kuò)散：1:16以上，能達(dá)到1:64效價(jià)達(dá)到要求的可放血制備血清可一次放血（頸動(dòng)脈）也可多次取血（耳靜脈）

單抗與多抗的區(qū)別

單抗多抗抗體組成單一復(fù)雜

抗體性質(zhì)個(gè)體的屬性群體綜合的性質(zhì)純化標(biāo)記容易，效果好難度高一些種屬來(lái)源絕大多數(shù)是小鼠兔子、羊、豚鼠等制備周期長(zhǎng)（最短4個(gè)月）短（2個(gè)月）制備技術(shù)復(fù)雜簡(jiǎn)單經(jīng)費(fèi)多少什么情況需要制備單抗目的蛋白有結(jié)構(gòu)類似物抗原不純，無(wú)法分開多抗效果不好（已排除非特異性反應(yīng)）希望將抗體用于治療，研制成藥品希望將抗體用于診斷，研制成診斷試劑三、抗體的純化鹽析法（硫酸銨沉淀）辛酸-硫酸銨沉淀法離子交換法親和層析法凝膠過(guò)濾法1、鹽析法（硫酸銨沉淀）原理在高濃度中性鹽存在下，蛋白質(zhì)在水中的溶解度降低而產(chǎn)生沉淀不同蛋白質(zhì)的鹽析常數(shù)不同硫酸銨的加入量通常以飽和度表示（100%飽和度：767g/L）主要步驟在血清或腹水中加入硫酸銨使抗體沉淀；4℃高速離心，棄上清，溶解沉淀；

可反復(fù)操作，逐級(jí)降低硫酸銨的濃度:50%飽和度：0.313g/ml45%飽和度：0.277g/ml40%飽和度：0.243g/ml最后一次離心后，用少量PBS溶解沉淀，透析，測(cè)定濃度。2、正辛酸-硫酸銨沉淀法原理兩步沉淀：先加正辛酸去雜蛋白。正辛酸是一種有機(jī)酸，在酸性條件下（pH4.5）可使大分子的雜蛋白沉淀。后加硫酸銨使抗體沉淀。主要步驟：調(diào)節(jié)樣品的pH值，加入正辛酸（25μl/ml），攪拌30分；室溫高速離心（10000g，30分鐘），收集上清液；再加入硫酸銨（40%飽和度）；4℃高速離心（10000g，15分鐘），棄上清；溶解沉淀，透析，測(cè)定濃度。3、離子交換法原理利用溶液中各種帶電粒子與離子交換劑之間結(jié)合力的差異進(jìn)行物質(zhì)分離。DEAE是一種陰離子交換劑，自身帶正電荷（Diethylaminoethyl，二乙氨基乙基）將樣品的pH值調(diào)至等電點(diǎn)以上，使樣品帶負(fù)電荷。采用鹽溶液洗脫，通過(guò)高濃度的帶同種電荷的離子(Cl-)置換被分離的組分.+++++--------

帶負(fù)電荷的被吸附上帶負(fù)電荷少的先被置換帶負(fù)電荷多的后被置換主要步驟

先用硫酸銨沉淀抗體，粗提；將樣品過(guò)柱；洗去沒(méi)有結(jié)合的物質(zhì)；用梯度NaCl溶液洗脫，等量收集洗脫液；紫外分光光度計(jì)測(cè)量，保留A280值明顯升高的樣品；匯集樣品，濃縮，測(cè)定濃度。4、親和層析法原理利用蛋白質(zhì)之間的特異性結(jié)合（抗體-抗原，受體-配體）將一種配基與凝膠顆粒結(jié)合，捕捉與它相配的物質(zhì)。洗脫一般采用改變pH值的方法使用前樣品結(jié)合(Binding)洗脫(Elution)5、凝膠過(guò)濾法（分子篩）原理將樣品混合物通過(guò)一定孔徑的凝膠介質(zhì)，由于流經(jīng)路徑的差異，使不同分子質(zhì)量的組分分離。大分子物質(zhì)直接從凝膠顆粒外通過(guò)，走得快；小分子物質(zhì)進(jìn)入凝膠顆粒的內(nèi)部再出來(lái)，走得慢。適合于IgM類抗體的純化（五聚體，分子量約800KD）主要步驟將腹水或血清處理后上柱，樣品要濃；

(可用G-200，柱子要長(zhǎng)，80-100cm)待樣品入柱后，用緩沖液過(guò)柱；等量收集洗脫液，測(cè)定洗脫液的A280值。收集第一峰。第四節(jié)抗原與抗體反應(yīng)-免疫檢測(cè)法

抗原與抗體結(jié)合后，只有出現(xiàn)可見的反應(yīng)，如凝集、溶血、沉淀試驗(yàn)等，或用熒光素、酶、放射性同位素等標(biāo)記方法提高可測(cè)性，才便于在免疫檢測(cè)中運(yùn)用?？梢娦苑磻?yīng)的出現(xiàn)，對(duì)抗原抗體分子合適比例的要求遠(yuǎn)比對(duì)彼此絕對(duì)量方面要高得多。這就是說(shuō)，一方面在進(jìn)行免疫檢測(cè)時(shí)要注意抗原、抗體的用量；另一方面只要提高可見度或可測(cè)性，便可大大提高免疫檢測(cè)方法的靈敏度。反應(yīng)類型實(shí)驗(yàn)技術(shù)結(jié)果判斷凝集反應(yīng)直接凝集試驗(yàn)觀察凝集現(xiàn)象間接凝集試驗(yàn)同上抗球蛋白試驗(yàn)同上沉淀反應(yīng)液相沉淀試驗(yàn)觀察沉淀，檢測(cè)濁度免疫電泳技術(shù)觀察掃描沉淀峰、沉淀弧補(bǔ)體參與的反應(yīng)補(bǔ)體溶血試驗(yàn)觀察測(cè)定溶血現(xiàn)象補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)同上一、凝集反應(yīng)

凝集反應(yīng)是指顆?？乖c相應(yīng)抗體結(jié)合反應(yīng)出現(xiàn)的可見性現(xiàn)象。顆?？乖缤暾募?xì)菌、紅細(xì)胞等與相應(yīng)抗體相混合，在一定條件下出現(xiàn)凝集。凝集反應(yīng)中抗原稱為凝集原，抗體稱為凝集素。顆粒性抗原（或可溶性抗原吸附在與免疫無(wú)關(guān)的載體上）與相應(yīng)抗體在適當(dāng)條件下形成肉眼可見的凝集小塊。1、直接凝集反應(yīng)：

天然顆粒性抗原（細(xì)菌或細(xì)胞）與相應(yīng)抗體直接結(jié)合所出現(xiàn)的凝集現(xiàn)象：（1）玻片法—定性試驗(yàn)：已知Ab

未知Ag(?)ABO血型鑒定，細(xì)菌種屬抗原型別的鑒定+（2）試管法—半定量試驗(yàn)：診斷傷寒副傷寒的“肥達(dá)氏反應(yīng)”病人血清倍比稀釋傷寒細(xì)菌懸液1:21:41:81:161:321:64對(duì)照+很小的凝集顆?；鞚?無(wú)凝集現(xiàn)象與對(duì)照相同++小、部分凝集塊中等混濁+++大多凝集管底輕度混濁++++大的凝集塊清亮凝集程度沉淀上清管底沉淀凝集程度最高稀釋比例待測(cè)血清的滴度一般當(dāng)H≥1：160，O≥1：80，副傷寒凝集價(jià)≥1：80時(shí)，才有診斷意義。2、間接凝集反應(yīng)++—載體：紅血球：間接血凝試驗(yàn)乳膠顆粒：間接乳膠凝集試驗(yàn)

載體可溶性抗原致敏致敏顆粒NS凝集顆粒常用的載體顆粒有人O型紅細(xì)胞、綿羊紅細(xì)胞、乳膠顆粒等。如載體顆粒是紅細(xì)胞，稱間接血凝試驗(yàn)；若為乳膠顆粒，則稱為乳膠凝集試驗(yàn)。如用乳膠凝集試驗(yàn)測(cè)定相關(guān)抗體，可用于輔助診斷鉤體病、血吸蟲病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等。3、間接凝集抑制試驗(yàn)++乳膠妊娠試驗(yàn)?zāi)蛞簶?biāo)本（HCG？）抗HCG抗體HCG致敏乳膠不凝集結(jié)果判定凝集陽(yáng)性陰性二、沉淀反應(yīng)可溶性抗原與相應(yīng)抗體發(fā)生特異性結(jié)合，在適當(dāng)條件下而出現(xiàn)的沉淀現(xiàn)象。（適當(dāng)條件）可溶性Ag相應(yīng)Ab★特點(diǎn)：

抗原分子量小，是可溶性抗原抗原抗體復(fù)合物中主要由抗體組成反應(yīng)時(shí)常稀釋抗原反應(yīng)結(jié)果以抗原的稀釋度來(lái)判定效價(jià)☆沉淀反應(yīng)的分類：?液體內(nèi)沉淀試驗(yàn)

環(huán)狀沉淀試驗(yàn)絮狀沉淀試驗(yàn)免疫濁度沉淀?凝膠內(nèi)沉淀試驗(yàn)單向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)雙向擴(kuò)散試驗(yàn)?凝膠免疫電泳技術(shù)對(duì)流免疫電泳免疫電泳火箭免疫電泳免疫固定電泳1、絮狀沉淀反應(yīng)一系列試管中加入等量的抗體和遞增量的抗原，在中性條件下37℃保溫1-2h，便可見到絮狀的蛋白質(zhì)沉淀?？捎糜趯ふ铱乖贵w反應(yīng)的合適比例，檢測(cè)抗原抗體的分子比。在Ab濃度不變的情況下隨著Ag濃度不斷上升免疫沉淀反應(yīng)變化如圖所示AbAgAg各管Ag倍比稀釋加入抗血清各管Ab量不變振搖混勻、37℃孵育沉淀量不同輕搖2.環(huán)狀沉淀試驗(yàn)【原理】：將Ag溶液疊加在細(xì)玻璃管內(nèi)的Ab液面上，37℃保溫10-20min二者在兩液面交界處形成白色沉淀環(huán)?！驹u(píng)價(jià)】：簡(jiǎn)便快速只能定性敏感性低目前多被其他方法替代3、雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)：是利用瓊脂凝膠作介質(zhì)的一種沉淀反應(yīng)。瓊脂是多孔的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，可使大分子物質(zhì)通過(guò)，分子的擴(kuò)散作用使分別兩處的抗原抗體相遇，比例合適時(shí)形成沉淀?？捎^測(cè)到沉淀弧。沉淀弧的特征與位置取決于抗原分子的大小、結(jié)構(gòu)、擴(kuò)散系數(shù)和濃度等。當(dāng)抗原、抗體存在多種體系時(shí)，會(huì)出現(xiàn)多條沉淀弧。雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)的應(yīng)用1.檢測(cè)未知抗原或抗體2.抗原性質(zhì)分析3.抗體效價(jià)滴定4.抗原或抗體純度鑒定生理鹽水配制1%-5%的瓊脂，取4mL倒在顯微鏡用的載玻片上，凝固后打孔，中心孔滴入抗原，外周孔滴入抗體用于測(cè)定抗體效價(jià)；中心孔滴入抗體，外周孔滴入抗原，用于檢測(cè)抗原的存在和定性抗原。染色標(biāo)本圖1.抗原抗體雙向自由擴(kuò)散2.24h出結(jié)果3.呈現(xiàn)沉淀線或弧AgAb擴(kuò)散AgAb擴(kuò)散1:21:41:81:161:321:64A:濃度Ag、Ab及擴(kuò)散率近似B：濃度Ag、Ab近似，擴(kuò)散率Ag＞AbC：濃度Ag、Ab近似，擴(kuò)散率Ag＜AbD：濃度Ag＞Ab，擴(kuò)散率近似E：濃度Ag＞Ab，擴(kuò)散率Ag＞AbF：濃度Ag＜Ab，擴(kuò)散率Ag＜Ab檢測(cè)未知抗原或抗體4、單向免疫擴(kuò)散：又稱單向瓊脂擴(kuò)散，是定量抗原的一種檢測(cè)方法。與雙向擴(kuò)散不同的是在瓊脂中含有一定量的抗體，孔內(nèi)加入未知量的相應(yīng)抗原。在37℃保溫過(guò)程中，孔內(nèi)的抗原向周圍擴(kuò)散，與抗體形成沉淀圈。沉淀環(huán)大小與Ag濃度呈正相關(guān)?？贵w+瓊脂沉淀環(huán)抗原傾注平板打孔加樣放置37℃

24～48h觀察沉淀環(huán)單向擴(kuò)散試驗(yàn)（平板法）含抗人IgG瓊脂制成平板待測(cè)血樣(IgG濃度?)標(biāo)準(zhǔn)人IgG不同濃度制作標(biāo)準(zhǔn)曲線待測(cè)樣品結(jié)果1.測(cè)定沉淀環(huán)直徑2.在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查找相應(yīng)抗原濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線免疫電泳是一種將區(qū)帶電泳和雙向免疫擴(kuò)散相結(jié)合的免疫化學(xué)分析技術(shù)。5.免疫電泳試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)原理先將抗原樣品在瓊脂平板上進(jìn)行電泳，使其中的各種成分因電泳遷移率的不同而被分離成肉眼不可見的區(qū)帶。停止電泳后，在與電泳方向平行的槽內(nèi)加入相應(yīng)抗血清，使抗原和抗體呈雙向擴(kuò)散，已分離的各抗原與相應(yīng)抗體在瓊脂中擴(kuò)散而相遇，在二者比例合適處形成肉眼可見的沉淀弧。根據(jù)沉淀弧的數(shù)量、位置和形狀與已知標(biāo)準(zhǔn)抗原進(jìn)行比較，可分析、鑒定樣品中所含的抗原成分及其性質(zhì)。應(yīng)用粗略分析純化抗原或抗體的純度。正常及異常體液中蛋白質(zhì)分析。免疫后抗體組分的動(dòng)態(tài)變化研究。6.火箭電泳是單向免疫擴(kuò)散和電泳相結(jié)合的一種定量檢測(cè)Ag的技術(shù)。在含已知