OLC1在喉鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及其臨床意義

OLC1在喉鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及其臨床意義目的檢測(cè)OLC1在喉鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及其臨床意義。方法應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)48例喉鱗狀細(xì)胞癌組織中OLC1的表達(dá)情況，并分析OLC1與喉鱗狀細(xì)胞癌臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果OLC1在喉鱗狀細(xì)胞癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于癌旁組織。OLC1蛋白在喉鱗狀細(xì)胞癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)與患者的年齡、性別、腫瘤分型無(wú)關(guān)，而與組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期正相關(guān)。結(jié)論OLC1高表達(dá)可能與喉鱗狀細(xì)胞癌發(fā)展的惡性進(jìn)程有關(guān)，提示喉鱗狀細(xì)胞癌患者預(yù)后不良。標(biāo)簽：喉鱗狀細(xì)胞癌；OLC1；臨床意義喉鱗狀細(xì)胞癌是頭頸部常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，近年來(lái)流行病學(xué)資料顯示喉鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)病率在我國(guó)呈上升趨勢(shì)，患者發(fā)病年齡呈年輕化趨勢(shì)。雖然外科手術(shù)治療及術(shù)后化療使病人的術(shù)后生存率有了較大提高，然而總體預(yù)后仍不容樂(lè)觀。喉鱗狀細(xì)胞癌具有高侵襲性，其發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)多基因多階段的演進(jìn)過(guò)程。OLC1（overexpressedinlungcancer）基因是我國(guó)學(xué)者在肺癌組織中通過(guò)高發(fā)量實(shí)驗(yàn)篩選出的一個(gè)肺癌相關(guān)新基因，研究發(fā)現(xiàn)OLC1具有癌基因的屬性，參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展。本研究采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)OLC1蛋白在喉鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)，探討OLC1在喉癌鱗狀細(xì)胞發(fā)生、發(fā)展中的作用及臨床意義。1資料與方法1.1臨床病例選取贛南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院2011年1月～2013年12月間行喉鱗狀細(xì)胞癌根治術(shù)且隨訪資料完整的48例病例，術(shù)前均未進(jìn)行放、化療及免疫治療，且術(shù)后均在本院根據(jù)NCCN指南進(jìn)行放療。其生存期從手術(shù)之日起開(kāi)始計(jì)算，終止日期為死亡期或末次隨訪日期2014年12月15日。男43例、女5例、年齡46～75歲、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移19例、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移29例。48例喉鱗狀細(xì)胞癌組織中組織學(xué)分級(jí)：高分化例9，中分化31例，低分化8例。根據(jù)國(guó)際抗癌協(xié)會(huì)TNM分期方案分為Ⅰ期10例、Ⅱ期8例、Ⅲ期20例、Ⅳ期8例。另外隨機(jī)選取遠(yuǎn)離腫瘤（﹥1cm）的腫瘤旁正常組織（鏡下無(wú)癌）20例作對(duì)照組。1.2方法1.2.1檢測(cè)方法所有患者的手術(shù)標(biāo)本離體后迅速投入10%中性甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋，4μm連續(xù)切片，分別行HE染色及免疫組化染色。所有病例均由兩位病理醫(yī)師確診。主要試劑OLC1兔抗人多克隆抗體，稀釋比例為1：2000，武漢三鷹生物技術(shù)有限公司；采用免疫組織化學(xué)法，實(shí)驗(yàn)步驟嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，每批實(shí)驗(yàn)均設(shè)對(duì)照組。1.2.2結(jié)果判定分別由2名高年資的病理科主治醫(yī)師進(jìn)行獨(dú)立閱片，根據(jù)其評(píng)分的平均值采用VOLM雙評(píng)分法進(jìn)行判定。①按陽(yáng)性細(xì)胞百分率評(píng)分：光鏡10×20倍下，隨機(jī)選擇5個(gè)染色均勻視野，陽(yáng)性細(xì)胞百分率≤25%為1分，陽(yáng)性細(xì)胞百分率26%～50%為2分，陽(yáng)性細(xì)胞百分率>50%為3分；②按染色強(qiáng)度評(píng)分：無(wú)顯色為0分，黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。將上述兩項(xiàng)得分相加：0～2分判為+，3～4分判為++，5～6分判為+++。++和+++為陽(yáng)性表達(dá)，+為陰性表達(dá)。1.2.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果2.1OLC1蛋白在喉鱗狀細(xì)胞癌組織和癌旁組織中的表達(dá)OLC1蛋白染色陽(yáng)性定位于細(xì)胞漿，棕黃色粗顆粒狀。OLC1蛋白在癌旁組織中呈陰性表達(dá)，在喉鱗狀細(xì)胞癌組織呈陽(yáng)性表達(dá)（圖1），超過(guò)70%的喉鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞有不同程度OLC1表達(dá)，40.8%的腫瘤呈中等程度表達(dá)，31%的腫瘤呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，見(jiàn)圖1。2.2OLC1蛋白與喉鱗狀細(xì)胞癌臨床病理因素的關(guān)系OLC1蛋白在喉癌組織中的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、病理分級(jí)有關(guān)（P均<0.05），與臨床分型、腫瘤大小、年齡和性別無(wú)關(guān)，見(jiàn)表1。3討論OLC1基因是我國(guó)學(xué)者在肺癌組織中通過(guò)高通量實(shí)驗(yàn)篩選出的一個(gè)肺癌相關(guān)新基因。OLC1的全長(zhǎng)cDNA長(zhǎng)度為2383bp，其編碼一條長(zhǎng)度為360氨基酸的多肽，含有DUF292和Proline-rieh兩個(gè)保守結(jié)構(gòu)域。Yuan等研究發(fā)現(xiàn)OLC1基因在肺鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)量要顯著高于正常肺泡上皮細(xì)胞，隨后的研究發(fā)現(xiàn)OLC1不僅在肺鱗狀細(xì)胞癌中過(guò)度表達(dá)，在肺腺癌及小細(xì)胞肺癌中也呈過(guò)度表達(dá)，而且在肺鱗狀細(xì)胞癌發(fā)生的早期，OLC1的表達(dá)量就已經(jīng)升高；穩(wěn)定高表達(dá)OLC1的NIH/3T3細(xì)胞能在裸鼠皮下形成腫瘤，說(shuō)明OLC1具有癌基因的屬性；若沉默OLC1的表達(dá)能引起肺癌細(xì)胞系H520和H1299生長(zhǎng)變緩，集落形成減少和細(xì)胞凋亡發(fā)生；通過(guò)構(gòu)建OLC1穩(wěn)定高/低表達(dá)的食管鱗癌細(xì)胞系，研究細(xì)胞表型的改變，發(fā)現(xiàn)OLC1過(guò)表達(dá)可以促進(jìn)細(xì)胞增殖、抑制凋亡，而OLC1被敲除之后可得到相反的結(jié)果[1，2]。對(duì)OLC1的生物學(xué)功能進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，OLC1能在報(bào)告基因水平激活腫瘤細(xì)胞中NF-kappaB通路。在人食管鱗癌細(xì)胞研究中發(fā)現(xiàn)，OLC1過(guò)表達(dá)可下調(diào)BRCA1的表達(dá)，從而引起其下游靶基因Bcl-2的活化，進(jìn)而抑制凋亡蛋白酶Caspase-3的激活，最終抑制細(xì)胞凋亡的發(fā)生[3，4]。在乳腺癌與卵巢癌的研究中發(fā)現(xiàn)OLC1的過(guò)表達(dá)提示乳腺癌與卵巢癌患者預(yù)后不良[5，6]。但目前對(duì)于OLC1在喉鱗狀細(xì)胞癌中的作用研究尚少。本研究發(fā)現(xiàn)OLC1在喉鱗狀細(xì)胞癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于癌旁組織，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，Ⅲ～Ⅳ期者高于Ⅰ～Ⅱ期，低分化者高于高分化者和中分化者。提示在喉癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，OLC1可能起重要作用。隨著OLC1蛋白表達(dá)的增強(qiáng)，喉鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞侵襲性和轉(zhuǎn)移能力明顯增強(qiáng)，表明OLC1在喉鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生、發(fā)展、惡性進(jìn)展、侵襲轉(zhuǎn)移中起重要作用，這可能與一些相關(guān)的抑癌基因作用被抑制，致癌通路的異常激活及腫瘤轉(zhuǎn)移因子作用增強(qiáng)有關(guān)?？傊?，喉鱗狀細(xì)胞癌組織中OLC1蛋白呈高表達(dá)，通過(guò)測(cè)定OLC1蛋白的表達(dá)量及研究其與臨床病理特征之間的關(guān)系，可進(jìn)一步深入了解相關(guān)調(diào)節(jié)機(jī)制有助于人們更好地了解喉鱗狀細(xì)胞發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制，有望為其診斷、治療技術(shù)的進(jìn)一步發(fā)展奠定理論基礎(chǔ)。圖1OLC1在低分化喉鱗狀細(xì)胞癌組織呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)SP法參考文獻(xiàn)：[1]YuanJ，MaJ，ZhengH，ShiT，etal.OverexpressionofOLC1，cigarettesmoke，andhumanlungtumorigenesis[J].JNatlCancerInst，2008，100（22）：1592-1605.[2]楊龍海，肖汀，譚金晶，等.OLC1蛋白在非小細(xì)胞肺癌患者外周血血漿中的水平及其臨床意義[J].中華腫瘤雜志，2014，36（5）：362-365.[3]陳瑋.OLC1的泛素化降解機(jī)制研究以及β-catenin在人食管鱗癌中的表達(dá)和預(yù)后分析[D].中國(guó)優(yōu)秀碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)，2011，（04）.[4]李瀟.OLC1過(guò)表達(dá)對(duì)人食管鱗癌細(xì)胞的生物學(xué)作用及其分子機(jī)制研究[D].中國(guó)優(yōu)秀碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)，2008，（02）.[5]Ou-YangQH，DuanZX，JinZ，etal.OLC1isoverexpressedinbreastcanceranditsexpressioncorrelateswithpoorpatientsurvival[J].TumourBiol.2014，35（9）：8823-7.[6]Jiac，