3顯微鏡計數(shù)死活細胞的鑒

實驗三、顯微鏡計數(shù)、死活細胞

的鑒別一、實驗目的

1、學習使用血球記數(shù)板測定微生物數(shù)量的方法。2、學習區(qū)分酵母菌死活細胞的實驗方法。實驗1：微生物數(shù)量的測定

平板計數(shù)法；比濁法（分光光度計）；

顯微直接計數(shù)法。實驗材料（1）酵母菌懸液載玻片蓋玻片血球計數(shù)板計數(shù)器顯微鏡酵母菌顯微直接計數(shù)

方法：總菌計數(shù)法——血球計數(shù)板或霍瑟（PeroffHausser）細菌計數(shù)板。不要從高處往下滴！取清潔無油的血球計數(shù)板，在計數(shù)室上面加蓋血蓋片。取酵母菌液，搖勻，用滴管由蓋玻片邊緣滴一小滴，使菌液自行滲入，計數(shù)室內(nèi)不得有氣泡。用10×鏡觀察并將計數(shù)室移至視野中央。在40×鏡下計數(shù)：計數(shù)5個中格的平均值，然后求得每個中格的平均值。乘上25就得出計數(shù)區(qū)總菌數(shù)，最后再換算到每mL菌液中的含菌數(shù)。每個記數(shù)室體積為0.1立方毫米。注意事項：計上不計下，計左不計右。出芽計一半計數(shù)步驟：注意事項：①

從蓋玻片與計數(shù)室縫隙間滴進樣品液；②

加樣后靜置3-5min，酵母菌均勻到一個水平上；※濁度：a、每格5—10個菌體為宜；

b、兩個計數(shù)室計得的值來計算樣品的含菌量。計算：通常數(shù)五個中方格的總菌數(shù)（A），然后求得每個中方格的平均值，再乘上25（25個中方格），就得出大方格中的總菌數(shù)，然后再換算成1ml菌液中的總菌數(shù)，乘上稀釋倍數(shù)（B），即原液中的總菌數(shù)?？偩鷶?shù)（個/ml）=A/5×25×10000×B。

實驗報告1、結果記錄在P92的表格：各中格中菌數(shù)AB二室平均值菌數(shù)/ml12345第一室第二室實驗2：酵母菌死活鑒定死活鑒定：美藍是一種無毒性的染料，它的氧化型呈藍色，還原型呈無色。用美藍對酵母的活細胞進行染色時，由于細胞的新陳代謝作用，細胞內(nèi)具有較強的還原能力，能使美藍由藍色的氧化型變?yōu)闊o色的還原型。因此，具有還原能力的酵母活細胞是無色的，而死細胞或代謝作用微弱的衰老細胞則成藍色或淡藍色。器材（2）1、染液：呂氏堿性美藍染液2、菌種：釀酒酵母液3、儀器和其他用具：顯微鏡、載玻片、蓋玻片等操作步驟2

美藍浸片的觀察：（斜面）1）在載玻片中央加一滴0.1%呂氏堿性美藍染色液，然后按無菌操作用接種環(huán)挑取少量酵母菌苔放在染液中，混合均勻。染液不宜過多或過少，否則在蓋上蓋玻片時菌液會溢出或出現(xiàn)大量氣泡而影響觀察。2）用鑷子取一塊蓋玻片，先將一邊與菌液接觸，然后慢慢將蓋玻片放下使其蓋在菌液上。蓋玻片不宜平放著放下，以免產(chǎn)生氣泡影響觀察。3）將制片放置約3min后鏡檢，先用低倍鏡然后用高倍鏡觀察酵母的形態(tài)和出芽情況，并據(jù)顏色來區(qū)別死活細胞。4）染色約0.5h后再次進行觀察，注意死活細胞數(shù)量是否增加。美藍浸片的觀察：（斜面）在載玻片中央加一滴0.1%呂氏堿性美藍染色液，然后按無菌操作用接種環(huán)挑取少量酵母菌菌液放在染液中，混合均勻。思考題根據(jù)你的