水產(chǎn)養(yǎng)殖用枯草芽孢桿菌培養(yǎng)技術(shù)規(guī)程

1水產(chǎn)養(yǎng)殖用枯草芽孢桿菌培養(yǎng)技術(shù)規(guī)程本文件規(guī)定了水產(chǎn)養(yǎng)殖用枯草芽孢桿菌（Bacillussubtilis）生產(chǎn)中所涉及的術(shù)語(yǔ)和定義、生和設(shè)備要求、培養(yǎng)基、菌液生產(chǎn)技術(shù)流程、指標(biāo)檢測(cè)和儲(chǔ)運(yùn)的相關(guān)技GB/T26428飼用微生物制劑中GB4789.28食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量枯草芽孢桿菌bacillussubtilis速度較快，菌落表面粗糙不透明，灰白色或微24生產(chǎn)環(huán)境和設(shè)備要求4.1生產(chǎn)環(huán)境——發(fā)酵生產(chǎn)場(chǎng)地及發(fā)酵相關(guān)設(shè)施應(yīng)符合安全、環(huán)保、消防等條件要求。4.2生產(chǎn)設(shè)備5培養(yǎng)基5.1一般要求培養(yǎng)基所使用的原材料應(yīng)滿(mǎn)足菌液生產(chǎn)要求，具體按GB4789.28的規(guī)定執(zhí)行。對(duì)于首5.2種子培養(yǎng)基初級(jí)菌種及一級(jí)菌種使用的種子培養(yǎng)基中應(yīng)含有易被菌種吸收利用的碳氮源，營(yíng)養(yǎng)豐富。種子培5.3發(fā)酵培養(yǎng)基來(lái)源豐富、成本低廉、營(yíng)養(yǎng)緩釋的培養(yǎng)基原料，培養(yǎng)基中還應(yīng)添加緩沖劑穩(wěn)定pH值。發(fā)酵培養(yǎng)基見(jiàn)附用于枯草芽孢菌種分離、鑒定及活菌計(jì)數(shù)使用。固體培養(yǎng)基見(jiàn)附錄A中3——用于發(fā)酵的枯草芽孢桿菌應(yīng)明確菌種來(lái)源的相關(guān)信息。——發(fā)酵罐接種前應(yīng)檢測(cè)上一級(jí)菌種的純度和濃度，不應(yīng)有雜菌污染，菌液濃度應(yīng)達(dá)到1.0×108件為115℃~121℃,0.1MPa～0.15MPa，滅菌20min～30min。滅菌后無(wú)菌操作取培養(yǎng)基染色鏡檢，無(wú)接種針經(jīng)火焰滅菌,待冷卻后沾取少量初級(jí)菌種，轉(zhuǎn)接至裝有種子培養(yǎng)基的三角瓶?jī)?nèi)，完成一級(jí)菌b)發(fā)酵溫度為35℃~37℃;c)初始攪拌轉(zhuǎn)速為250rpm～300rpm；d)接種量為裝液量的2%～5%；），4每噸海水或淡水加入500mL～800mL次氯酸鈉溶液，處理24小時(shí)后以適量的硫代硫制水浴溫度在60℃~65℃,保持30min，對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行加熱溶解和消殺處理。趁熱將培養(yǎng)基轉(zhuǎn)入裝有擴(kuò)培體積80%發(fā)酵用水的發(fā)酵容器內(nèi)，待培養(yǎng)基混合均勻且溫度降至28℃~32℃時(shí)，快速將種子液倒入其b)發(fā)酵溫度為28℃~32℃;c)接種量為裝液量的2%～3%；——將枯草芽孢桿菌發(fā)酵液用無(wú)菌的0.85%生理鹽水做10倍梯度連續(xù)稀釋。5——選取3個(gè)連續(xù)適宜稀釋倍數(shù)的菌液，用無(wú)菌移液管取100μL接種于固體培養(yǎng)玻璃珠或涂布棒均勻涂布于培養(yǎng)基表面，每個(gè)稀釋樣品做3次重復(fù)。涂布好的平皿翻轉(zhuǎn)后置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h～48h?！囵B(yǎng)后，選取菌落數(shù)在30個(gè)～300個(gè)之間的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，可得到發(fā)酵液中枯草芽孢桿菌的菌從測(cè)定有效活菌數(shù)的稀釋樣品中，選取3個(gè)連續(xù)適宜稀釋倍數(shù)的樣本，進(jìn)行枯草芽孢桿菌發(fā)酵液中化學(xué)品，遠(yuǎn)離熱源。長(zhǎng)途運(yùn)輸時(shí)，防止日曬、雨淋，避