四大譜在藥學(xué)中的應(yīng)用-最終版

紫外光譜、紅外光譜、核磁共振、質(zhì)譜技術(shù)在藥學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用班級(jí)藥學(xué)一班姓名學(xué)號(hào)紫外光譜、紅外光譜、核磁共振、質(zhì)譜技術(shù)在藥學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用[摘要]紫外光譜、紅外光譜、核磁共振、質(zhì)譜技術(shù)是重要的檢測(cè)手段。本文主要綜述了紫外光譜、紅外光譜、核磁共振、質(zhì)譜技術(shù)的發(fā)展歷程及其在藥學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用進(jìn)展。

[關(guān)鍵詞]紫外光譜；紅外光譜；核磁共振；質(zhì)譜；藥學(xué)；應(yīng)用；進(jìn)展

光譜法主要包括紫外光譜、紅外光譜、核磁共振、質(zhì)譜,這四種波譜簡(jiǎn)稱為有機(jī)四大譜.四大譜是集現(xiàn)代電子技術(shù)、光譜分析技術(shù)、計(jì)算機(jī)技術(shù)和化學(xué)計(jì)量學(xué)技術(shù)為一體的現(xiàn)代光譜技術(shù)。主要用于化合物尤其一些復(fù)雜的化合物的結(jié)構(gòu)與性能的鑒定。光譜法與其他分析方法如氣相色譜儀、液相色譜儀聯(lián)用，充分發(fā)揮各自優(yōu)勢(shì)，可以在一次測(cè)定中完成二三百個(gè)化合物的分離鑒定，并使微量結(jié)構(gòu)分析成為可能。波譜技術(shù)在生物醫(yī)藥、有機(jī)化學(xué)、生物化學(xué)、食品檢驗(yàn)、醫(yī)療衛(wèi)生、環(huán)境保護(hù)、腫瘤診斷、生命科學(xué)等各個(gè)領(lǐng)域和科研生產(chǎn)工作中都已得到了廣泛的應(yīng)用。隨著分光系統(tǒng)的日益完善和化學(xué)計(jì)量學(xué)軟件的功能不斷強(qiáng)大,有機(jī)四大波譜技術(shù)在藥學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用也將越來(lái)越廣泛。

紫外光譜技術(shù)在藥學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用一、紫外-可見(jiàn)分光光度法在藥物定量方面的應(yīng)用在遵循朗伯-比爾定律的基礎(chǔ)上，紫外分光光度法可以采用多種研究方法，如雙波長(zhǎng)、導(dǎo)數(shù)、顯色及層析-紫外聯(lián)用等方法，對(duì)中藥飲片及中成藥中的相關(guān)成分進(jìn)行定量分析。

1、單波長(zhǎng)法

此方法在藥物分析方面應(yīng)用較廣。比如:丁青龍等采用紫外分光光度法測(cè)定了復(fù)方苦參素膠囊中苦參堿的含量。線性范圍為1.512～7.560μg／ml，加樣回收率為97.286％，RSD為2.838％。方法簡(jiǎn)便準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可以用于復(fù)方苦參素膠囊中苦參堿的含量測(cè)定[1]。2、雙波長(zhǎng)法

此方法在飲片質(zhì)量控制中應(yīng)用較少，一般用于成藥制劑的檢測(cè)。

比如:陳新梅等對(duì)利咽顆粒劑中的綠原酸進(jìn)行了定量分析。以324nm及277.5nm作為測(cè)定波長(zhǎng)。綠原酸在0.46～46.00μg之間有良好的線性關(guān)系，r=0.9992；平均回收率為97.33%，RSD=1.49%。從試驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)可以看出，本法可以消除輔料及其它成分的干擾，具有快速、簡(jiǎn)便的優(yōu)點(diǎn)[2]。

3、顯色比值法

王宇等對(duì)半夏藥材采用超聲提取，依據(jù)酸性染料比色法的原理，在pH5.40緩沖液中加入0.1%溴麝香草酚藍(lán)顯色劑，在416nm處利用紫外分光光度法測(cè)定藥材中總生物堿的含量。在1.4O～7.OOμg范圍內(nèi)與吸收度呈良好的線性關(guān)系，r=0.9996；平均回收率為102.02％，RSD=2.38%。結(jié)果表明，方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確[3]。

邊鳳云等利用人參莖葉皂苷與香草醛高氯酸顯色，以540nm為測(cè)定波長(zhǎng)，采用紫外分光光度法測(cè)定葆青康膠囊中人參莖葉皂苷的含量。相關(guān)性很好，在對(duì)5批樣品進(jìn)行測(cè)定中，測(cè)定結(jié)果符合預(yù)期設(shè)想[4]。

4、導(dǎo)數(shù)法

在紫外-可見(jiàn)分光光度發(fā)中，一些多組分混合物的重迭吸收帶以及痕量成分顯示的“肩”，使定性和定量分析難以進(jìn)行。導(dǎo)數(shù)光譜法是解決這樣難題的最好途徑。對(duì)于多組分化合物的分析，導(dǎo)數(shù)光譜的優(yōu)越性就十分明顯，并且同樣可用標(biāo)準(zhǔn)曲線來(lái)進(jìn)行定量分析.感冒通片中含雙氯滅痛、人工牛黃、撲爾敏及輔料等，用一階導(dǎo)數(shù)分光光度法測(cè)定其中撲爾敏的含量，不僅可消除其它成分的干擾，而且回收率高，操作簡(jiǎn)單[5]；可以用二階導(dǎo)數(shù)UV—Vis法測(cè)定硫酸阿托品注射液[6].在使用該法測(cè)定時(shí)，樣品不需要復(fù)雜分離，就可消除干擾成分的影響，方法簡(jiǎn)便，快捷，準(zhǔn)確，是一種切實(shí)可行的方法。

5、薄層層析-紫外聯(lián)用

由于藥物成分一般很復(fù)雜，共存成分的干擾對(duì)直接的UV-Vis法產(chǎn)生很大的影響。傳統(tǒng)的Uv-Vis法為了解決此類問(wèn)題，將一些分離技術(shù)和UV—Vis法相配合而進(jìn)行測(cè)定。青霉素烷砜酸鈉可在稀NaOH溶液中，37℃置15分鐘后直接進(jìn)行測(cè)定[7]。薄層層析-紫外聯(lián)用測(cè)定藥物含量時(shí)，以薄層層析刮板-紫外聯(lián)用較多。如：常軍民等采用薄層分離新疆鼠尾草中6，7-去氫羅列酮，于330nm處采用紫外分光光度法測(cè)定其含量，含量為0.37％，在1O～15μg的范圍內(nèi)具良好的線性關(guān)系，r=0.9988；平均回收率為98.3％，RSD=2.58%[8]二、紫外-可見(jiàn)分光光度法在藥物定性方面的應(yīng)用紫外和可見(jiàn)光譜定性分析的根據(jù)是在一定的環(huán)境中，一定的生色團(tuán)只在一定的波長(zhǎng)顯示吸收，因此根據(jù)吸收光譜的最大值、最小值、形狀等，就可以推測(cè)生色團(tuán)的存在，以及分子的結(jié)構(gòu)。一定的生色團(tuán)之所以只在一定的顯示是由于電子躍遷的基本規(guī)律決定的。

紫外分光光度法是通過(guò)可見(jiàn)-紫外分光光度計(jì)，產(chǎn)生可見(jiàn)光，紫外線照射某些不同物質(zhì)，不同濃度的吸收光譜的不同，可獲得不同吸收光譜的曲線，同時(shí)它們的吸收峰數(shù)值與濃度成正比關(guān)系，遵循朗伯-比爾定律，不僅能鑒別物質(zhì)及測(cè)定物質(zhì)的含量，而且能和其他方法配合，研究物質(zhì)的組成。

1、比較光譜的一致性

兩個(gè)化合物若是相同，其吸收光譜應(yīng)完全一致，在鑒定時(shí)，試樣和標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)平行操作，以相同濃度配制在相同溶劑中，分別測(cè)定吸收光譜，比較光譜圖是否一致或者和現(xiàn)成的標(biāo)準(zhǔn)品光譜圖相比較。為了進(jìn)一步確證，有時(shí)換一種溶劑分別測(cè)定后再作比較，或者將標(biāo)準(zhǔn)品和產(chǎn)品以相同濃度配在同一溶劑中測(cè)定，所得光譜圖如果仍和標(biāo)準(zhǔn)品一致，那么二者可能是同一物質(zhì)了。如：周有華等研究了羚羊角粉及其骨角塞粉在乙醇浸出物的紫外吸收光譜。實(shí)驗(yàn)表明它們的圖譜是有明顯差別的。賽加羚羊角分別在203nm和207nm波長(zhǎng)處有最大吸收峰。在208～217nm處有4個(gè)小峰，在207nm處有一較寬較高的平坦峰。而骨角塞僅在210nm和215nm處有一最大吸收峰，在217nm處有一小峰。2種物質(zhì)的吸收曲線區(qū)別顯著，可以達(dá)到區(qū)別賽加羚羊角和骨角塞的目的[9]。

2、比較最大吸收波長(zhǎng)及吸收系數(shù)的一致性

紫外吸收光譜相同，兩種化合物有時(shí)不一定為同一種化合物。因?yàn)樽贤馕展庾V通常只有2～3個(gè)較寬的吸收峰，具有相同發(fā)色團(tuán)的不同分子結(jié)構(gòu)，有時(shí)在較大分子中不影響發(fā)色團(tuán)的紫外吸收峰，導(dǎo)致不同分子結(jié)構(gòu)產(chǎn)生相同的紫外吸收光譜，但是它們的吸收系數(shù)是有差別的，所以在比較吸收波長(zhǎng)的同時(shí)還要比較吸收系數(shù)。如：賴德有研究了雞血藤的紫外光譜，結(jié)果表明，只有在(279±1)nm波長(zhǎng)處有最大吸收者為雞血藤，否則為偽品。在此波長(zhǎng)處吸收度達(dá)0.45以上，為合格品，否則為劣品[10]。

3、比較吸收度比值的一致性

有時(shí)物質(zhì)的吸收峰較多，往往規(guī)定在幾個(gè)吸收峰處吸收度或吸收系數(shù)的比值做鑒別標(biāo)準(zhǔn)。如果被鑒定的物質(zhì)吸收波長(zhǎng)相同，峰處吸收度或吸收系數(shù)的比值在規(guī)定范圍內(nèi)，則可考慮與標(biāo)準(zhǔn)品分子結(jié)構(gòu)基本相同。紅外光譜技術(shù)在藥學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用近紅外光譜技術(shù)在制藥工業(yè)中的應(yīng)用日趨廣泛，從藥物的定性、定量分析，到生產(chǎn)過(guò)程各個(gè)階段（包括合成、制劑、包裝等過(guò)程）的在線監(jiān)控都體現(xiàn)出近紅外光譜的巨大潛力。

1.藥物的定性和定量分析

近紅外光譜技術(shù)對(duì)藥物的定性、定量分析有明顯的優(yōu)勢(shì)。定性方面它可簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確識(shí)別假藥、劣藥，鑒別正品、偽品以及不同產(chǎn)地的中藥材，如大黃及其混偽品的鑒別[11]。定量方面可以廣泛應(yīng)用于中藥有效成分測(cè)量,如黃連浸膏粉中生物堿[12]，人參粉末中的其它復(fù)方乙酰水楊酸片中三種有效成分的定量分析等[13]。NIR測(cè)量結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，近紅外光譜分析法被列為標(biāo)準(zhǔn)方法，在藥品生產(chǎn)過(guò)程中已成為質(zhì)量檢測(cè)的重要手段。

2.固體制劑物化參數(shù)的定量表征

固體制劑是最常用的劑型，安全、有效、穩(wěn)定、均一是藥物的基本性質(zhì)。藥物的純度和含量決定藥效，其物理參數(shù)，如濕度、含量均一性、顆粒大小分布、結(jié)晶度及硬度等對(duì)藥物的穩(wěn)定性及生物利用度等也有很大影響。

2.1顆粒大小分布：藥物顆粒大小幾乎與所有固體制劑相關(guān)，可能是最終產(chǎn)品也可能是中間體，如散劑、顆粒劑、膠囊劑的顆粒是產(chǎn)品，而在片劑生產(chǎn)過(guò)程中是中間體。顆粒大小和分布不但影響藥物的流動(dòng)性、均勻性和外形美觀，而且影響藥物的崩解性、溶出性等。NIR結(jié)合漫反射技術(shù)，快速、非破壞性測(cè)定整批樣品中顆粒大小的真實(shí)分布，保證藥品的質(zhì)量。2.2結(jié)晶:大部分藥物都可以形成幾種結(jié)晶形式或多結(jié)晶，晶型會(huì)直接影響制劑療效，有些晶型問(wèn)題影響藥物的混合、壓片等生產(chǎn)過(guò)程，使制劑難以工業(yè)生產(chǎn)?？刂谱罴丫陀欣谒幬锏奈蘸屠谩Ｗ畛Ｓ玫木蜏y(cè)定方法是熱分析法（DSC），該方法用量少，破壞樣品，誤差較大。NIR是一種最佳的非破壞性質(zhì)量控制手段，快速測(cè)定藥物晶型，如Li,Weiyong等在濕顆粒處理過(guò)程中成功監(jiān)測(cè)藥物活性成分的多晶型變化[14]。NIR測(cè)定鎮(zhèn)痛新藥“鹽酸比西發(fā)定”的晶型比紅外和X-射線粉末衍射法準(zhǔn)確、方便[15]。

2.3濕度：濕度對(duì)固體制劑的影響較大，顆粒濕度太小，含結(jié)晶水的藥物易失去較多的結(jié)晶水，影響藥物性質(zhì)，壓片易造成裂片、松片等。顆粒濕度過(guò)大，藥物容易發(fā)生氧化、還原、水解等反應(yīng)，影響其化學(xué)穩(wěn)定性，又容易造成藥物水溶性成分的“遷移”，使藥物的有效成分分布不均勻，形成花斑。NIR技術(shù)可以成功測(cè)定粉末、包衣片的濕度[16]。

3.藥物生產(chǎn)過(guò)程的在線檢測(cè)與監(jiān)控

NIR能夠反映樣品的綜合信息，更易于在線應(yīng)用，從而滿足原料藥到中間體到成品的完全檢測(cè)和監(jiān)控，保證藥品質(zhì)量。如采用近紅外漫反射光譜法可快速、準(zhǔn)確分析頭孢拉定膠囊，并用于工業(yè)現(xiàn)場(chǎng)的實(shí)時(shí)在線分析[16]。利用NIR技術(shù)進(jìn)行大批黃芩藥材[17]、冰片[18]等有效成分的含量測(cè)定及藥物生產(chǎn)的在線質(zhì)量監(jiān)控,提高中成藥的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，加快中藥現(xiàn)代化的進(jìn)程。核磁共振技術(shù)在藥學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用1.藥物的質(zhì)量控制藥物的質(zhì)量控制包括有效成分鑒別、雜質(zhì)檢查、藥物含量測(cè)定等項(xiàng)目,對(duì)于已上市的藥物,可按照藥典中的各個(gè)項(xiàng)目進(jìn)行操作;但對(duì)于創(chuàng)新藥,尚無(wú)可依據(jù)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),須建立新的分析方法并對(duì)其進(jìn)行評(píng)價(jià)。與傳統(tǒng)檢測(cè)手段相比,NMR法的優(yōu)勢(shì)之一就是無(wú)需待測(cè)樣品的對(duì)照品即可進(jìn)行定量測(cè)定,現(xiàn)已被用于多種藥物的質(zhì)量控制,并被美國(guó)、歐洲等國(guó)藥典收載。1.1確定化學(xué)對(duì)照品及化學(xué)原料藥的含量以往在化學(xué)藥物質(zhì)量控制中,一般采用色譜法,并以含量已知的對(duì)照品對(duì)待測(cè)成分進(jìn)行定量;但若待測(cè)樣品為無(wú)對(duì)照品的創(chuàng)新藥,則必須首先確定對(duì)照品含量。新藥對(duì)照品含量一般通過(guò)協(xié)作標(biāo)定來(lái)確定,包括使用化學(xué)滴定法、色譜法和重量分析等方法,其中化學(xué)滴定法特異性不強(qiáng),色譜法則因使用歸一化計(jì)算法忽略了校正因子的差異而導(dǎo)致定量結(jié)果不夠準(zhǔn)確;而在使用NMR法確定對(duì)照品含量時(shí),具有特異性強(qiáng)、快速及準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)[19].Malz等通過(guò)摸索,對(duì)實(shí)驗(yàn)參數(shù)及圖譜處理方式進(jìn)行了優(yōu)化,使由不同NMR儀器(Bruker、Varian和Jeol品牌下的各種型號(hào))及操作者所得結(jié)果的不確定度小于115%(置信區(qū)間為95%,k=2),表明NMR法準(zhǔn)確可靠,可滿足藥品對(duì)照品的含量測(cè)定要求[20]。原料藥一般與新藥對(duì)照品相似,均具有待測(cè)成分含量高的特點(diǎn),故使用QNMR法同樣能得到可靠的含量測(cè)定結(jié)果。如美國(guó)藥典在測(cè)定亞硝酸異戊酯在原料藥和制劑(如吸入劑)中的含量時(shí)采用的就是NMR絕對(duì)定量法,其中,定量峰為亞硝酸異戊酯的A-亞甲基氫原子(化學(xué)位移為4.18)及內(nèi)標(biāo)苯甲酸卞酯中的亞甲基氫原子(化學(xué)位移為5.13)所產(chǎn)生的信號(hào)峰[21]。1.2化學(xué)藥物制劑的含量測(cè)定因制劑中藥物含量較低,且輔料對(duì)測(cè)定可能造成影響,故NMR法在用于制劑的含量測(cè)定時(shí),過(guò)程相對(duì)較復(fù)雜。但因NMR法無(wú)需經(jīng)過(guò)復(fù)雜的分離步驟便可直接對(duì)多種劑型進(jìn)行測(cè)定,故在樣品預(yù)處理方面比傳統(tǒng)分析方法更具優(yōu)勢(shì).如Sharma等在用1H-NMR對(duì)注射液中的阿托品和雙復(fù)磷進(jìn)行同時(shí)測(cè)定時(shí),使用三甲基硅丙磺酸鈉為內(nèi)標(biāo),90%H2O-10%D2O為溶劑,實(shí)現(xiàn)了對(duì)待測(cè)物的準(zhǔn)確定量,阿托品和雙復(fù)磷的回收率分別為96.18%～102.10%和98.19%～102.10%,RSD分別為4%和1%(n=3)。[22]對(duì)于口服液等黏度大、基質(zhì)復(fù)雜的藥物,可采用稀釋、提取等預(yù)處理方法?？傊?相對(duì)于其它分析方法,NMR法的樣品處理更加簡(jiǎn)單、快速。1.3化學(xué)藥雜質(zhì)檢查NMR法在用于測(cè)定雜質(zhì)方面的優(yōu)勢(shì)仍是可不經(jīng)分離純化而直接測(cè)定,并能提供藥物中所有成分的信息。但在雜質(zhì)檢查方面,NMR法目前仍不夠成熟,尚有待改進(jìn)。1.4天然藥物的質(zhì)量控制NMR法可有效測(cè)定天然產(chǎn)物中活性成分含量,如Li等使用固相萃取與NMR相結(jié)合的方法測(cè)定了來(lái)源于42個(gè)不同產(chǎn)地的黨參中3種季銨生物堿的含量,結(jié)果顯示不同產(chǎn)地的黨參藥材質(zhì)量差異很大。該方法對(duì)3種生物堿的回收率分別為10019~102.15%、96.18~102.18%和97.19~103.11%,RSD分別為2.17%、2.17%和1.17%。由于天然藥物成分復(fù)雜,其中的雜質(zhì)種類通常均為未知,故采用NMR法更為合適[23]。2.新藥的研發(fā)在目前的新藥研發(fā)過(guò)程中,常采用化學(xué)合成或組合化學(xué)方法對(duì)先導(dǎo)化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾,得到一系列化合物,然后從中選出活性較高的化合物作為候選藥物;或從天然產(chǎn)物中篩選具有藥效活性的物質(zhì)。由于得到的化合物眾多,量少且無(wú)對(duì)照品,故用不需對(duì)照品即可確定純度的QNMR法進(jìn)行含量測(cè)定較為方便。2.1確定所合成候選藥物的純度經(jīng)組合化學(xué)法得到的產(chǎn)物中,化合物種類多,經(jīng)高通量提取后得到的粗品量小且仍含有雜質(zhì),傳統(tǒng)的純度測(cè)定方法操作繁雜,費(fèi)時(shí)費(fèi)力,甚至無(wú)法使用,而NMR法則不受待測(cè)物量少的限制,還可鑒定出未知物小分子結(jié)構(gòu),分析過(guò)程比較簡(jiǎn)單。對(duì)某些化合物的含量測(cè)定結(jié)果與其它分析方法相近,例如Rizzo等比較了NMR法與元素分析法對(duì)組合化學(xué)合成的89種化合物的含量測(cè)定結(jié)果,以NMR法確定的純度為橫坐標(biāo),元素分析法確定的純度為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸,所得標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)(r)為0.1952,表明這兩種方法測(cè)定的結(jié)果較為一致[24].2.2確定天然產(chǎn)物含量或純度目前,NMR法在天然藥物研究領(lǐng)域除可用于質(zhì)量控制外,還能用來(lái)確定天然產(chǎn)物中某活性成分的純度,為確定待測(cè)組分的體內(nèi)、外活性,及其進(jìn)一步結(jié)構(gòu)優(yōu)化提供參考依據(jù)。2.3體內(nèi)藥物及其代謝物的定量分析在進(jìn)行藥物體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)和有效性研究時(shí),需要測(cè)定的是生物樣品中的藥物或其代謝物,由于受取樣量等因素限制,通常在生物樣品中原形藥物及其代謝物濃度很低,而且存在影響樣品測(cè)定的內(nèi)源性干擾物。NMR法法具有簡(jiǎn)便性、高分辨和多目標(biāo)性,且不破壞化合物結(jié)構(gòu),可提供比LC-MSn法更多的結(jié)構(gòu)信息[25]。質(zhì)譜技術(shù)在藥學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用質(zhì)譜儀種類非常多，工作原理和應(yīng)用范圍也有很大的不同。從應(yīng)用角度，質(zhì)譜儀主要為氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（GC-MS）和液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（LC-MS）.一．在色譜聯(lián)用儀中,氣相色譜和質(zhì)譜聯(lián)用儀(GC—MS)是開(kāi)發(fā)最早的色譜聯(lián)用儀器，自1957年霍姆斯(Holmesjc)和莫雷爾(MorrellFA)首次實(shí)現(xiàn)氣相色譜和質(zhì)譜聯(lián)用以后。這一技術(shù)得到長(zhǎng)足的發(fā)展。由于從氣相色譜柱分離后的樣品呈氣態(tài)．流動(dòng)相也是氣體，與質(zhì)譜的進(jìn)樣要求相匹配，最容易將這兩種儀器聯(lián)用。而且氣～質(zhì)聯(lián)用法綜合了氣相色譜和質(zhì)譜的優(yōu)點(diǎn)，彌補(bǔ)了各自的缺陷，因而具有靈敏度高、分析速度快和鑒別能力強(qiáng)的特點(diǎn)，可同時(shí)完成待測(cè)組分的分離和鑒定，特別適用于多組分混合物中未知組分的定性和定量分析．判斷化合物的分子結(jié)構(gòu)，準(zhǔn)確地測(cè)定化合物的分子量，是只前能夠?yàn)槠た思?jí)試樣提供結(jié)構(gòu)信息的工具．故ⅡJ用于測(cè)定生物樣品和體液中藥物和代謝物的痕量分析。對(duì)揮發(fā)件成分可直接進(jìn)行定性和定量分析，對(duì)不揮發(fā)性成分和熱不穩(wěn)定的物質(zhì)，可進(jìn)行適宜的衍生化再進(jìn)行分析。GC—MS法現(xiàn)已廣泛用于藥物濫用監(jiān)測(cè)、興奮劑檢測(cè)、臨床疾病診斷、藥動(dòng)學(xué)研究等體內(nèi)藥物分析。比如,葉云鵬fzol用氣相層析一質(zhì)譜研究了人體尿中的川芎嗪代謝產(chǎn)物，采用氣相層析一質(zhì)譜f美國(guó)惠普公司的HP5890ⅡGC—HP597IAMSD)和HP—l石英毛細(xì)管柱02m)。柱濕700℃．2．5min以后以20'Umin程序升溫至2400C。進(jìn)樣口溫度250℃。GC—MS接口溫度280℃，載氣為氦氣，化學(xué)電離(chemicalionization)用甲烷氣，掃描范圍100—350m／z證實(shí)主要代謝產(chǎn)物為3，5，6一三甲基吡嗪甲酸，為進(jìn)一步闡明人體代謝對(duì)川芎嗪藥效和毒性的影響和指導(dǎo)對(duì)JII芎嗪的結(jié)構(gòu)改造等打下基礎(chǔ)[26]。江驥?J以氘標(biāo)記川I芎嗪(TMPz)為內(nèi)標(biāo)，根據(jù)同位素反稀釋法的原理，采用GC—MS定量技術(shù)測(cè)定了一組(5例)正常成人在接受恒速靜脈輸注川芎嗪180min時(shí)血漿川I芎嗪的濃度變化，并依此進(jìn)行了藥代動(dòng)力學(xué)的計(jì)算[27]。二．高效液相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)自Horning于20世紀(jì)70年代進(jìn)行開(kāi)創(chuàng)性研究以來(lái),各種商品化儀器相繼問(wèn)世,且應(yīng)用日益廣泛。HPLC－MS聯(lián)用技術(shù)集液相色譜的高分離與質(zhì)譜的高靈敏度,極強(qiáng)的定性專屬性于一體。質(zhì)譜檢測(cè)器具有更高的靈敏度,樣品用量少,分析速度快,應(yīng)用范圍廣,在選擇合適電離方法的前提下,一般化合物都能被電離得到檢測(cè),從而能獲得更多的化合物結(jié)構(gòu)信息。HPLC可分離極性的、離子化的、不易揮發(fā)的相對(duì)分子質(zhì)量大和對(duì)熱不穩(wěn)定的化合物,同時(shí)HPLC－MS聯(lián)機(jī)彌補(bǔ)了傳統(tǒng)檢測(cè)器的不足。作為一種具有廣泛應(yīng)用前景的檢測(cè)方法,HPLC－MS聯(lián)用技術(shù)在藥學(xué)領(lǐng)域中已得到廣泛應(yīng)用。1.在化學(xué)合成藥物中有關(guān)物質(zhì)的檢查HPLC－2MS聯(lián)用技術(shù)在有關(guān)物質(zhì)檢查方面應(yīng)用廣泛,可隨時(shí)檢測(cè)合成過(guò)程中的中間體、副產(chǎn)物或降解產(chǎn)物等。牛長(zhǎng)群等[28]采用HPLC－MS法報(bào)道了氨芐西林、阿莫西林中有關(guān)物質(zhì)的檢查,分析確定了氨芐西林、阿莫西林中的有關(guān)物質(zhì)。用HPLC－ESI－MS對(duì)加速實(shí)驗(yàn)樣品進(jìn)行分析,結(jié)果確定了13種氨芐西林的有關(guān)物質(zhì)及9種阿莫西林的有關(guān)物質(zhì),并定量分析了樣品中的有關(guān)物質(zhì),為控制氨芐西林及阿莫西林中的有關(guān)物質(zhì)提供了依據(jù)。利用HPLC－MS分析混合樣品,和其他方法相比具有高效、快速,靈敏度高,只需對(duì)樣品進(jìn)行簡(jiǎn)單預(yù)處理或衍生化,尤其適用于含量少、不易分離得到或在分離過(guò)程中易丟失的組分,因此在天然藥物研究中具有重要意義。2.在天然藥物化學(xué)研究中的應(yīng)用2.1在定性分析及結(jié)構(gòu)鑒定中的應(yīng)用在樣品量很少的情況下,用HPLC－MS結(jié)合HPLC－二極管陣列檢測(cè)器(diodearraydetector,DAD)檢測(cè)技術(shù),通過(guò)對(duì)照品和標(biāo)準(zhǔn)化合物的保留時(shí)間、紫外吸收光譜以及質(zhì)譜中的準(zhǔn)分子離子峰[M+H]+、[M+Na]+和特征碎片峰等可快速鑒定提取物中的已知成分。比如。孫秀燕等[29]采用HPLC－MS聯(lián)用儀,ESP2IT2MS對(duì)濱蒿中利膽保肝活性成分進(jìn)行了分離和結(jié)構(gòu)鑒定,鑒定出濱蒿中的利膽有效成分除含有綠原酸、對(duì)羥基苯乙酮、6、7－二甲氧基香豆素外,還首次分離鑒定出具有保肝活性的茵陳色原酮。銀杏萜內(nèi)酯為銀杏葉和銀杏葉提取物中主要的藥效成分,具有廣泛的藥理作用,盧定強(qiáng)等[30]用HPLC－ESI－MS法分析銀杏葉中銀杏萜內(nèi)酯的成分和含量,鑒別出白果內(nèi)酯和銀杏內(nèi)酯A,B,C,J。2.2在定量分析中的應(yīng)用:HPLC－MS與多級(jí)反應(yīng)監(jiān)測(cè)技術(shù)結(jié)合可進(jìn)行天然藥物提取物中成分的定量分析。在一級(jí)MS中選定母離子,通過(guò)碰撞誘導(dǎo)裂解產(chǎn)生該化合物的某一特征子離子,這一特征子離子在二級(jí)MS中得以檢測(cè),只有當(dāng)一級(jí)MS中選定的母離子在二極檢測(cè)器上檢測(cè)到特征子離子時(shí),才能檢測(cè)到信號(hào),故稱為多級(jí)反應(yīng)監(jiān)測(cè)。其具有高靈敏度、高選擇性,適用于對(duì)熱不穩(wěn)定化合物的分析等特點(diǎn)。3.在藥物代謝研究中的應(yīng)用國(guó)內(nèi)外曾多有采用HPLC－MS法進(jìn)行藥物代謝研究的報(bào)道,不僅可以避免復(fù)雜的分離純化代謝物樣品,而且能分離鑒定難于辨識(shí)的痕量代謝產(chǎn)物。秦三海等[31]利用HPLC－ESI－MS,用電化學(xué)檢測(cè)器分析黃芩苷在體內(nèi)的代謝產(chǎn)物,結(jié)果達(dá)到了很好的分離鑒定目的,此方法在血液中的檢測(cè)限為5ng/mL。丁黎等又研究了大鼠服藥后膽汁中鹽酸非洛普Ⅱ相代謝產(chǎn)物[32]。參考文獻(xiàn)[1]丁青龍,惲宏偉．復(fù)方苦參素膠囊中苦參堿的穩(wěn)定性研究【J】．《江蘇藥學(xué)與臨床研究》，2004，01．[2]陳新梅,郭喜紅．利咽顆粒劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究【R】．《中國(guó)藥學(xué)雜志》,2001,02．(6)：486．

[3]王宇，張明，于超，等．紫外可見(jiàn)分光光度法測(cè)定不同產(chǎn)地半夏藥材中生物堿的含量【U】．重慶中草藥研究，2001，43：34．

[4]邊風(fēng)云，趙慧新，曹麗娟，等．薄層法和紫外可見(jiàn)分光光度法測(cè)定人參莖葉皂苷穩(wěn)定性研究【J】．中國(guó)公共衛(wèi)生，2001，17(7)：580．[5]張琴，李小軍，撲晉華．一階導(dǎo)數(shù)分光光度法測(cè)定感冒通片中撲爾敏的含量【J】．藥物分析雜志，1996，16(6)：403-404．[6]何衛(wèi)民，姜喜安，陳雪云．硫酸阿托品注射液的二階導(dǎo)數(shù)分光光度測(cè)定【J】．中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志。1996，27(8)：369—370．

[7]王宇，張明，于超，等．紫外可見(jiàn)分光光度法測(cè)定不同產(chǎn)地半夏藥材中生物堿的含量【U】．重慶中草藥研究，2001，43：34．[8]常軍民，堵年生，王青，等．紫外分光光度法測(cè)定新疆鼠尾草中6,7一去氫羅列酮的含量【J】．中成藥，2001，23(8)：600．[9]周友華,王振忠,黃振宇,冀玉清.羚羊角及其骨角塞的紫外光譜鑒別,基層中藥雜志,中草藥,1996,01.[10]劉玉琴,包保全等,紫外分光光度法測(cè)定雞血藤的吸收度,藥學(xué)分析雜志,1998,01.[11]楊成英．大黃及其混偽品的鑒別[J]．時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2003，14(12)：747[12]瞿海斌，劉全，程翼宇．近紅外漫反射光譜法測(cè)定黃連浸膏粉中生物堿含量[J]．分析化學(xué)，2000，32(4)：477-480

[13]王桂芳，李光和，竇英等．偏最小二乘法測(cè)定復(fù)方乙酰水楊酸片中的有效成分[J]．化學(xué)分析計(jì)量，2005，14（1）：40-42

[14]Li,Weiyong;Worosila,GregoryDetal．DeterminationofpolymorphconversionofanactivepharmaceuticalingredientinwetgranulationusingNIRcalibrationmodelsgeneratedfromthepremixblends[J],JournalofPharmaceuticalSciences,2005，94(12)：2800-2806(English)

[15]McArdle,Patricketal．Determinationofthepolymorphicformsofbicifadinehydrochloridebydifferentialscanningcalorimetry-thermogravimetricanalysis,X-raypowderdiffraction,attenuatedtotalreflectance-infraredspectroscopy,andattenuatedtotalreflectance-near-infraredspectroscopy[J],AppliedSpectroscopy,2005，59(11)：1365-1371(English)[16]Mullins,JamesEetal．Moisturedeterminationinpowderandtablets,G.I.T.LaboratoryJournal,Europe,2005,9(4),28-30(English)

[17]王東，王玲.近紅外光譜法測(cè)定黃芩藥材中黃芩甘的含量[J].中醫(yī)研究，2007，20（2）：20-21

[18]谷筱玉，汪曣，徐可欣等.冰片的近紅外光譜法檢測(cè)[J].光譜學(xué)與光譜分析，2004,24(2)：155～157

[19]胡敏,胡昌勤,劉文英.核磁共振波譜法測(cè)定藥物基準(zhǔn)物質(zhì)的絕對(duì)含量[J].分析化學(xué),2004,32(4):451-4551[20]MalzF,JanckeH.ValidationofquantitativeNMR[J].JPharmBiomedAnal,2005,38(5):813-8231[21]TheUnite