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/挑選葡萄沖洗:用清水沖洗葡萄挑選葡萄沖洗:用清水沖洗葡萄1～2遍除去污物，注意不要反復多次沖洗，以免洗掉菌種。先沖洗后去枝梗,以免微生物污染果肉。酒精發(fā)酵果酒榨汁：對發(fā)酵瓶、紗布、榨汁機、盛葡萄汁的器皿等實驗用具進行清洗并消毒。先用溫水反復沖洗幾次,再用體積分數(shù)為70%的酒精擦拭消毒，晾干待用醋酸發(fā)酵果醋原理:酵母菌是兼性厭氧微生物，在有氧條件下，酵母菌進行有氧呼吸大量繁殖6H12O6+6O2→62+6H20在無氧條件下，酵母菌能進行酒精發(fā)酵，C6H12O6→2C2H52C02發(fā)酵條件:18℃一25℃。在缺氧，呈酸性的發(fā)酵液中，酵母菌可以生長繁殖，絕大多數(shù)其他微生物都因無法適應這一環(huán)境而受到抑制。發(fā)酵裝置發(fā)酵時間10—12d發(fā)酵檢驗：可以檢驗酒味、酒精的含量、進行酵母菌的鏡檢等工作。在酸性條件下，重鉻酸鉀與酒精反應呈現(xiàn)灰綠色進氣口：先通入氧氣，酵母菌進行有氧呼吸大量繁殖；再密封，酵母菌能進行酒精發(fā)酵。簡易的發(fā)酵裝置裝瓶體積為2/3出氣口：及時排氣，防止發(fā)酵瓶爆裂。簡易的發(fā)酵裝置，如瓶子，每天要擰松瓶蓋2～4次，進行排氣。安裝裝水彎曲玻璃管，可防止雜菌和氧氣進入。出料口：取樣檢測原理：醋酸菌是-種好氧性細菌，只有當氧氣充足時，才能進行旺盛的生理活動。變酸的酒的表面觀察到的菌膜就是醋酸菌在液面大量繁殖而形成的。實驗表明，醋酸菌對氧氣的含量特別敏感，當進行深層發(fā)酵時，即使只是短時間中斷通人氧氣，也會引起醋酸菌死亡。當氧氣、糖源都充足時，醋酸菌將葡萄汁中的果糖分解成醋酸,當缺少糖源時，醋酸菌將乙醇變?yōu)橐胰?，再將乙醛變?yōu)榇姿酑2H502→320發(fā)酵條件溫度：30－35℃空氣：充足的氧發(fā)酵裝置發(fā)酵時間：7～8d左右發(fā)酵檢驗進氣口：連接氣泵，輸入氧氣（無菌空氣）出氣口：排氣出料口：取樣檢測制作流程制作原理:多種微生物參與了豆腐的發(fā)酵如青霉、酵母、曲霉、毛霉等。其中起主要作用的是毛霉，毛霉是一種絲狀真菌，具有發(fā)達的白色菌絲。新陳代謝類型為異養(yǎng)需氧型。毛霉等微生物產生的蛋白酶能將豆腐的蛋白質分解成小分子的肽和氨基酸，脂肪酶可將脂肪水解為甘油和脂肪酸。讓豆腐長出毛霉:將豆腐塊平放在籠屜內，將籠屜中的溫度控制在15～18℃。傳統(tǒng)腐乳的生產中，豆腐塊上生長的毛霉來自空氣中的毛霉孢子，而現(xiàn)代的腐乳生產是在無菌條件下，將優(yōu)良毛霉菌種直接接種在豆腐上，這樣可以避免其他菌種的污染，保證產品質量加鹽腌制：分層加鹽，并隨層加高而增加鹽量，在瓶口表面鋪鹽厚些。加鹽腌制的時間約為8天左右。加鹽可以析出豆腐中的水分，使豆腐塊變硬，在后期的制作過程中不會過早酥爛。同時，鹽能抑制微生物的生長，避免豆腐塊腐敗變質。加鹵湯裝瓶：將黃酒、米酒和各種香辛料，按口味不同而配制成鹵湯。酒精含量控制在12％左右。加酒可以抑制微生物的生長，同時能使腐乳具有獨特的香味。香辛料可以調制腐乳的風味，也具有防腐殺菌的作用。密封腌制制作原理：乳酸菌是異養(yǎng)厭氧型細菌，在無氧條件下，將葡萄糖分解成乳酸。常見的乳酸菌有乳酸鏈球菌和乳酸桿菌，乳酸桿菌常用于制作酸奶。制作流程選擇原料（新鮮？）修整洗滌晾曬切分稱取食鹽配置鹽水（比例4：1）泡菜鹽水（煮沸消毒）加調味料裝壇（注意）發(fā)酵：將壇口水封，防止外界空氣進入，進行乳酸發(fā)酵。白膜是由于產膜酵母的繁殖。成品測定亞硝酸鹽含量實驗注意事項①鹽的濃度過低，不足以抑制微生物的生長，可能導致豆腐腐敗變質；鹽的濃度過高會影響腐乳的口味。②鹵湯中酒的含量應控制在12%左右。酒精含量過高，腐乳成熟的時間將會延長；酒精含量過低，不足以抑制微生物的生長，可能導致豆腐腐敗。=3\*3③用來腌制腐乳的玻璃瓶，洗刷干凈后要用沸水消毒。=4\*3④裝瓶時，操作要迅速小心。整齊地擺放好豆腐、加入鹵湯后，要用膠條將瓶口密封。封瓶時，瓶口通過酒精燈的火焰，防止瓶口被污染。亞硝酸鹽為白色粉末，易溶于水。當人體攝入的亞硝酸鹽總量達到0.3～0.5g時，會引起中毒，達3g時會引起死亡。比色法：在鹽酸酸化條件下，亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應后，再與1－萘基乙二胺鹽酸鹽結合生成玫瑰紅色染料。將經過反應顯色后的待測樣品與標準液比色，即可估算出樣品中的亞硝酸鹽含量。物理狀態(tài):液體培養(yǎng)基——物理狀態(tài):液體培養(yǎng)基——擴大培養(yǎng)；固體培養(yǎng)基（凝固劑瓊脂）——微生物分離純化菌落觀察計數(shù)功能：鑒別培養(yǎng)基，選擇培養(yǎng)基——微生物篩選分離純化過程培養(yǎng)基培養(yǎng)基分類組成成分：組成成分：培養(yǎng)基培養(yǎng)基營養(yǎng)構成：一般都含有水、碳源（牛肉膏）、氮源（蛋白胨、牛肉膏）和無機鹽。還需要滿足微生物生長對、特殊營養(yǎng)物質以及氧的要求制備培養(yǎng)基制備培養(yǎng)基計算計算稱量稱量溶化：溶化：連同稱量紙一起放入燒杯。加瓊脂后攪拌防糊底燒杯破裂。調：調：細菌培養(yǎng)基中性或偏堿性，霉菌培養(yǎng)基呈酸性。分裝分裝滅菌滅菌：高壓蒸汽滅菌法，100、121℃維持15～30，將未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1～2天。倒平板：倒平板：平板倒置的目的是防止培養(yǎng)皿蓋上的水珠滴落到平板上造成污染；避免水分蒸發(fā)，以利微生物生長滅菌，消毒：滅菌，消毒：蛋白質凝固變性滅菌：滅菌則是指使用強烈的理化因素殺死物體內外所有的微生物，包括芽孢和孢子。灼燒滅菌法、干熱滅菌法、高壓蒸汽滅菌法(培養(yǎng)基等物體的滅菌)。消毒：消毒指使用較為溫和的物理或化學方法僅殺死物體表面或內部一部分對人體有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。煮沸消毒法、化學藥物消毒法、紫外線消毒法接種準備平板劃線法：平板劃線法：第一次劃線（殺死接種環(huán)上原有的微生物，避免污染培養(yǎng)物）及每次劃線（殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留的菌種，使下次劃線的菌種直接來源于上次劃線的末端，使每次劃線菌種數(shù)目減少）之前和劃線結束（避免細菌污染環(huán)境和感染操作者）都需要灼燒接種環(huán)滅菌。平板劃線法為什么要把第一次以后的每一次劃線的起點放在上一次劃線的末端：目的是使每一次劃線后菌體數(shù)目減少，培養(yǎng)之后形成的菌落是由單個菌體繁殖而成。灼燒接種環(huán)之后，要冷卻后才能伸入菌液，以免溫度太高殺死菌種。接種接種稀釋涂布平板法（稀釋涂布平板法（無菌技術）使聚集在一起的微生物分散成單個細胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落，以便于純化菌種。菌落形態(tài)：形狀、大小、隆起程度和顏色。菌落形態(tài)：形狀、大小、隆起程度和顏色。根據菌落的特征可以判斷是哪一種菌。統(tǒng)計菌落數(shù)目：測定微生物數(shù)量的常用方法有稀釋涂布平板法和顯微鏡直接計數(shù)菌種保藏（1）對于頻繁使用的菌種臨時保藏的方法：固體斜面培養(yǎng)基上4℃的冰箱中保藏。②缺點：這種方法保存的時間不長，菌種容易被污染或產生變異。（2）對于需要長期保存的菌種，可以采用甘油管藏的方法。將1培養(yǎng)的菌液轉移到甘油瓶中，與1滅菌甘油充分混勻后，放在－20℃的冷凍箱中保存。結果尿素分解菌尿素分解菌分離的原理：配制選擇培養(yǎng)基，把尿素作為培養(yǎng)基中的唯一氮源，原則上只有能夠利用尿素的微生物才能夠生長，其他微生物則不能在此培養(yǎng)基上生長，細菌合成的脲酶將尿素分解成3，使培養(yǎng)基堿性增強，升高，酚紅指示劑變紅。。原理土壤取樣：土壤取樣：距地表3-8樣品稀釋樣品稀釋實驗設計接種培養(yǎng)：實驗設計接種培養(yǎng)：稀釋涂布平板法挑選菌落挑選菌落鑒定鑒定剛果紅染色法篩選纖維素分解菌的原理:剛果紅纖維素這樣的多糖物質形成紅色復合物，但并不和水解后的纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應。當我們在含有纖維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅時，剛果紅能與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復合物。當纖維素被纖維素酶分解后，剛果紅－纖維素的復合物就無法形成，培養(yǎng)基中會出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透剛果紅染色法篩選纖維素分解菌的原理:剛果紅纖維素這樣的多糖物質形成紅色復合物，但并不和水解后的纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應。當我們在含有纖維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅時，剛果紅能與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復合物。當纖維素被纖維素酶分解后，剛果紅－纖維素的復合物就無法形成，培養(yǎng)基中會出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透。明圈。這樣，我們就可以通過是否產生透明圈來篩選纖維素分解菌。原理土壤取樣土壤取樣富含纖維素的環(huán)境選擇培養(yǎng)用選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)，以增加纖維素分解菌數(shù)量選擇培養(yǎng)用選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)，以增加纖維素分解菌數(shù)量實驗設計樣品稀釋樣品稀釋接種培養(yǎng)接種培養(yǎng)將樣品涂布于鑒別培養(yǎng)基上挑選菌落挑選菌落挑選產生透明圈的菌落發(fā)酵產酶實驗發(fā)酵產酶實驗無菌技術：獲得純凈培養(yǎng)物的關鍵是防止外來雜菌的入侵，要注意以下幾個方面：①對實驗操作的空間、操作者的衣著和手，進行清潔和消毒。

②將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進行滅菌。

③為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實驗操作應在酒精燈火焰附近進行。

④實驗操作時應避免已經滅菌處理的材料用具與周圍的物品相接觸。菌落計數(shù)：當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。為了保證結果準確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進行計數(shù)。統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目低。因為當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落。為使結果接近真實值，要設置重復組，取其平均值?？蓪⑼幌♂尪鹊臉悠方臃N到三個或三個以上的平板上，經涂布、培養(yǎng)計算出菌落平均數(shù)。設置對照可排除實驗組中非測試因素對實驗結果的影響，提高實驗結果的可信度。專題三植物的組織培養(yǎng)技術課題1菊花的組織培養(yǎng)原理(全能性)：具有某種生物全套遺傳信息的任何一個活細胞，都具有發(fā)育成完整個體的能力。脫分化：由高度分化的植物組織或細胞產生愈傷組織的過程，稱為脫分化，又叫去分化。再分化：脫分化產生的愈傷組織繼續(xù)進行培養(yǎng)，又可以重新分化成根或芽的過程。愈傷組織：愈傷組織是通過細胞分裂形成的，其細胞排列疏松而無規(guī)則，高度液泡化呈無定形狀態(tài)的薄壁細胞。外植體愈傷組織長出叢芽生根移栽成活外植體：外植體：植物的種類、材料的年齡和保存時間的長短等都會影響實驗結果。容易進行無性繁殖的植物容易進行組織培養(yǎng)。選取生長旺盛嫩枝進行組培的原因是嫩枝生理狀態(tài)好，容易誘導脫分化和再分化。營養(yǎng)：常用的培養(yǎng)基是培養(yǎng)基，其中含有的大量元素是營養(yǎng)：常用的培養(yǎng)基是培養(yǎng)基，其中含有的大量元素是N、P、S、K、、，微量元素是、、B、、、、、、I、，有機物有甘氨酸、煙酸、肌醇、維生素、蔗糖等。培養(yǎng)基中還需添加植物激素。激素激素：生長素和細胞分裂素是啟動細胞分裂、脫分化和再分化的關鍵激素。二者濃度、使用的先后順序、用量的比例等都影響結果其他條件環(huán)境條件：，溫度，光照。其他條件環(huán)境條件：，溫度，光照。過程配制培養(yǎng)基：配制培養(yǎng)基：1.配置各種母液（大量元素濃縮10倍，微量元素濃縮100倍，維生素等有機物和激素按1單獨配置），2.配置培養(yǎng)基，3.滅菌（連同其他器械高壓蒸汽滅菌）外植體消毒外植體消毒：流水沖洗后，放入裝有清水的培養(yǎng)皿中，加入少許洗衣粉，用毛筆輕輕刷洗，后用流水沖洗20，無菌吸水紙吸干外植體表面水分，放入70%的酒精中，輕輕搖動2-3次，持續(xù)6-7s，用無菌水漂洗干凈。無菌吸水紙將外植體表面水分吸干，然后放入質量分數(shù)為0.1%的2溶液中浸泡1-2，取出，用無菌水漂洗至少3次，漂凈消毒液。無菌操作:無菌操作:用70％的酒精消毒工作臺，點燃酒精燈。注意所有接種工作都必須在酒精燈旁進行，器械使用前后都要用火焰灼燒滅菌。方向:接種過程中插入外植體時形態(tài)學上端朝上接種注意事項方向:接種過程中插入外植體時形態(tài)學上端朝上接種注意事項培養(yǎng)：培養(yǎng)：菊花組培所需為5.8，溫度為18-22℃，光照條件為每日用日光燈照射12小時。在無菌箱中進行，并定期進行消毒移栽、栽培移栽、栽培課題2月季花藥培養(yǎng)一、原理花粉發(fā)育被子植物的花粉的發(fā)育要經歷

小孢子四分體時期，單核期和雙核期等階段。

在正常情況下，一個小孢子母細胞可以產生8個精子；在一枚花藥中可以產生若干個花粉

單倍體植株產生途徑(取決于激素的種類和配比)花粉花粉花粉胚狀體愈傷組織從芽從芽生根移栽脫分化分化再分化誘導二、影響因素影響花粉植株成功與否和成功率的主要因素：材料選擇和培養(yǎng)基組成材料選擇

：材料選擇

：親本植株的生理狀況

和生長條件、材料的低溫預處理及接種密度等對誘導成功率有影響。①從花藥來看，應當選擇初花期的花藥；②從花粉來看，應當選擇單核期的花粉。；③從花蕾來看，應當選擇完全未開放的花蕾。

培養(yǎng)基組成：（水）培養(yǎng)基組成：（水）大量元素，微量元素，有機物，植物激素。三、過程材料選?。哼x擇花藥時一般通過材料選?。哼x擇花藥時一般通過鏡檢確定花粉發(fā)育時期，此時需要對花粉細胞核進行染色，最常用的方法是醋酸洋紅。不易著色需采用焙華青—鉻礬法。外植體消毒：花蕾用為外植體消毒：花蕾用為70%的酒精浸泡30秒，無菌水清洗，無菌吸水紙吸干花蕾表面的水分，放入質量分數(shù)為0.1%的氯化汞溶液中2~4分鐘（也可質量分數(shù)為1%的次氯酸鈣溶液或飽和漂白粉溶液）無菌水沖洗3~5次。接種（1）．剝取花藥：消毒后的花蕾，要在接種（1）．剝取花藥：消毒后的花蕾，要在無菌條件下除去花萼、花瓣。在剝離花藥時，要盡量不損傷花藥，否則接種后易從受傷部位產生愈傷組織；還要徹底除去花絲，因為與花絲相連的花藥不利于愈傷組織或胚狀體的形成。（2）．接種花藥：剝取的花藥要立刻接種到

培養(yǎng)基上，每個培養(yǎng)瓶接種7—10個花藥。

培養(yǎng)：培養(yǎng)：（1）花藥培養(yǎng)利用的培養(yǎng)基是培養(yǎng)基中添加2,4—D、、的培養(yǎng)基，為

5.8

，溫度為25

℃，幼苗形成之前不需要光照（2）培養(yǎng)20－30d后，花藥開裂，長出愈傷組織或釋放出胚狀體。前者還要轉移到分化培養(yǎng)基上進行分化培養(yǎng)成再生植株；后者要盡快幼小植株分開并轉移到新的培養(yǎng)基上。篩選鑒定：篩選鑒定：通過愈傷組織形成的植株，常常會出現(xiàn)染色體組的數(shù)目的變化，因而需要鑒定和篩選。專題六植物有效成分的提取天然香料的植物、動物。不同植物的根、莖、葉、花、果實、種子都可以提取芳香油。芳香油的提取方法：蒸餾（揮發(fā)性強化學性質穩(wěn)定的芳香油）水中蒸餾、水上蒸餾、水汽蒸餾。壓榨：原料不適宜于水中蒸餾，如柑橘、檸檬等易焦糊，有效成分容易水解。萃取：芳香油易溶于有機溶劑，溶劑揮發(fā)后得到芳香油。有機溶劑中的雜質影響芳香油品質。芳香油的性質：揮發(fā)性強，成分復雜，以萜類化合物及其衍生物為主。玫瑰精油的提取玫瑰油的化學性質穩(wěn)定，難溶于水，易溶于有機溶劑，能隨水蒸氣一同蒸餾。蒸餾時間不能過短，溫度不能過高。鮮玫瑰花+清水（1:4）鮮玫瑰花+清水（1:4）水蒸氣蒸餾水蒸氣蒸餾：蒸餾瓶中加幾粒沸石，防止液體過度沸騰冷凝：促使油水混合物（乳濁液）中油和水的分離冷凝：促使油水混合物（乳濁液）中油和水的分離，減少玫瑰油揮發(fā)油水混合物油水混合物加入：加入：促使油水混合物（乳濁液）中油和水的分離分離油層分離油層分液漏斗分液漏斗分液除水除水加入無水24加入無水24：：吸收油層中的水分，然后過濾玫瑰油玫瑰油(二)橘皮精油的提取石灰水浸泡：石灰水浸泡：破壞細胞結構,分解果膠。防止壓榨時滑脫，提高出油率，降低壓榨液黏稠度，過濾不堵塞篩眼漂洗漂洗壓榨：壓榨：小蘇打、硫酸鈉：促進油和水的分離（用量分別為橘皮質量的0.25％和5％）過濾過濾：用布袋過濾，濾液再高速離心處理，分離出上層橘皮油。靜置靜置：將橘皮油在5～10℃冰箱中靜置5～7d，分離出上層澄清橘皮油，除去果蠟和水分再次過濾：再次過濾：將下層橘皮油用濾紙過濾，濾液與上層橘皮油合并橘皮油橘皮油(三)胡蘿卜素的提?、?、萃取劑的選擇水溶性的：