維生素c含量測定方法

維生素C含量測定方法綜述

摘要目前研究維生素C測定方法的報道較多，如滴定法、光度分析法、高效液相色譜法等，各種方法各有特點。特別是高效液相色譜法是近年來發(fā)展較快的一種方法。本文對近年來有關維生素C的測定方法進行了綜述。01030204維生素C滴定法光度分析法高效液相色普法等關鍵詞概述維生素C是可溶于水的無色結晶，是一種分子結構最簡單的維生素。維生素C有防治壞血病的功能，所以在醫(yī)藥上常把它叫做抗壞血酸。維生素C能保持巰基酶的活性和谷胱甘肽的還原狀態(tài)，起解毒作用等。其廣泛存在于植物組織中，新鮮的水果、蔬菜，特別是棗、辣椒、苦瓜、柿子葉、獼猴桃、柑橘等食品中含量尤為豐富。準確測定維生素C的含量，對飲食健康、醫(yī)療保健都具有十分重要的意義。近年來報道的測定方法主要有滴定法、光度法、高效液相色譜法等。維生素C的結構式維生素C：六碳的多羥基內酯測定方法高效液相色譜法測定維生素C滴定法測定維生素C分光光度測定維生素CAB微量滴定法2，6一二氯靛酚法1滴定法測定維生素C2,6-二氯酚靛酚滴定法測定維生素C含量其能還原2,6-二氯酚靛酚染料。維生素C具有還原性的烯二醇基，我們通過氧化還原滴定來測定維生素C原理2，6-二氯靛酚是一種染料，其氧化型在酸性介質中為紅色，堿性介質中為藍色，與Vc反應后，生成無色的還原型酚亞胺，因此，在酸性條件下，用2，6-二氯靛酚滴定至溶液顯玫瑰紅色，即為終點；無需另加指示劑?！?，6-二氯靛酚法——2，6-二氯靛酚法方法取本品適量（約相當于Vc50mg），用適量水溶解，置100ml量瓶中，加偏磷酸-醋酸試液20ml,再用水稀釋置刻度，搖勻；精密量取稀釋液適量（約相當于Vc2mg）置50ml的錐形瓶中,加偏磷酸-醋酸試液5ml,用2,6-二氯靛酚滴定液滴定,至溶液顯玫瑰紅色,并持續(xù)5s不褪；空白試驗：取偏磷酸-醋酸試液5.5ml，加水15ml，用2，6-二氯靛酚滴定液滴定。計算：(V-V0)×F×T×WW×標示量

標示量%=反應摩爾比１﹕１×100％維生素C2,6-二氯酚靛酚維生素C2,6-二氯酚靛酚（還原型）（氧化型，粉紅色）（氧化型）（還原型）+2,6-二氯酚靛酚染料的鈉鹽在水溶液中顯藍色，在酸性溶液中呈紅色，被還原后紅色消失。+====12345碘量法04030102原理：由于維生素C分子中的烯二醇基有極強的還原性，能被碘氧化，用碘滴定VCEC6H6O6/C6H8O6=0.18,EI2/I-=0.535終點：淀粉為指示劑，溶液出現(xiàn)穩(wěn)定的藍色即為終點反應式：03計算式：02反應式：01碘的濃度由已知濃度的Na2S2O3標準溶液標定04Wvc=C(I2)V(I2)M(vc)/m(vc)*100%碘量法注意！測定時：加HAC使溶液呈弱酸性原因:Vc還原性很強，在空氣中很容易被氧化，在堿性介質中更甚I2在堿性介質中會發(fā)生歧化反應加HAC可減少VC的副反應，避免實驗誤差碘量法電位滴定法原理：根據滴定過程中電池電動勢的變化來確定反應終點.Pt為指示電極，甘汞作參比電極E池＝E+-E-+E液接電位＝EI2/I-+k(常數(shù))隨著滴定劑的加入，由于發(fā)生化學反應，待測離子濃度將不斷變化；01導致電池電動勢發(fā)生相應變化；03從而指示電極電位發(fā)生相應變化；02計量點附近離子濃度發(fā)生突變；引起電位的突變，因此由測量工作電池電動勢的變化就能確定終點。04原理(具體來說:)電位滴定法右圖：電位滴定法基本儀器裝置電位滴定法計算式：(與碘量法相同)Wvc=C(I2)V(I2)M(vc)/m(vc)*100%優(yōu)點：解決了滴定分析中遇到有色或渾濁溶液時無法指示終點的問題01030204其他方法鉬藍比色法2，4一二硝基苯肼分光光度法CBA2分光光度測定維生素C2，4一二硝基苯肼分光光度法原理：維生素C在空氣中尤其在堿性介質中極易被氧化成脫氫抗壞血酸反應式：pH>5,脫氫抗壞血酸內環(huán)開裂，形成二酮古洛糖酸二酮古洛糖酸2，4一二硝基苯肼分光光度法脫氫抗壞血酸，二酮古洛糖酸均能和2，4－二硝基苯肼生成可溶于硫酸的脎1脎在500nm波長有最大吸收2脎的結構：32,4一二硝基苯肼分光光度法分光光度法樣品溶液與VC標準溶液按上述方法同樣處理500nm處測吸光度下圖：721型分光光度計鉬藍比色法馬占玲等用鉬藍比色法測定青椒中還原型維生素C含量的基本原理和方法。測定波長839nm，維生素C含量在0．004～0．024mg／mL范圍內呈線性關系，回收率為97．2％。該方法簡單、快速、準確。鉬藍比色法逯家輝等提出了一種測定維生素C的新方法，它是基于FolinB試劑與抗壞血酸在pH=3的三氯乙酸酸性介質中反應生成脫氫抗壞血酸，反應產物在910nm波長處有最大吸光度進行定量分析。該方法的線性范圍為0～50．0μg／mL，相關系數(shù)r=0．99986，回收率為98．12％～102．15％?！钍拘夥ㄔ矸椒ńY果維生素C片在不同PH值的溶液中旋光度有顯著差異，而片劑輔料旋光度保持不變差示旋光法消除輔料的影響，直接測出該制劑的含量討論與——差示旋光法方法TEXT1）標準溶液的配制準確稱取維生素C精制品5.0g，乙二胺四乙酸鈉0.37g,置于100mL容量瓶中,用新沸冷卻的蒸餾水溶解,加水到指定刻度,配制成50mg/mL的維生素C標準溶液。TEXT原理方法結果討論與——差示旋光法2）比旋光度與溶液pH值的關系量取10.0mL維生素C標準液于50mL量瓶中,用水稀釋至50mL。測定溶液的pH及旋光度,然后逐次分批加入氫氧化鈉固體(每次約50mg),每次溶解后,測定一次溶液的pH及其旋光度,得到維生素C溶液的pH及旋光度關系原理方法結果討論與——差示旋光法選定pH為2.2和6.2——差示旋光法2）差示旋光度與溶液濃度關系吸取2.0、4.0、8.0、16.0、20.0mL的維生素C標準液各兩份,分別置于50mL的容量瓶,一份用pH2.2的鹽酸鹽緩沖液定容；一份用pH6.2的磷酸鹽緩沖液定容，靜置3min后,用220mm測定管，以前者為空白，測定后者的差示旋光度(△a)。文獻結果：線性方程為△a=0205*C+0．05，r=0．9964原理方法結果討論與——差示旋光法3）輔料干擾試驗取混合輔料20mg(淀粉、硬脂酸鎂、EDTA、糊精等按處方比例混勻)兩份分別置于50mL的容量瓶,一份用pH2.2的鹽酸鹽緩沖液定容,一份用pH6.2的磷酸鹽緩沖液定容,濾去不溶物,濾液在兩種pH值測定差示旋光度。文獻結果：輔料的差示旋光度為零，說明輔料對維生素C含量的測定不干擾。原理方法結果討論與——差示旋光法4）穩(wěn)定性試驗同一測試樣品，在120min內，每隔3min測定一次差示旋光度。文獻結果：差示旋光度基本不變原理方法結果討論與——差示旋光法5）回收率試驗精密稱取維生素C精制品500.0mg兩份，分別置于50mL容量瓶中，各加入20mg輔料，分別用鹽酸鹽緩沖液及磷酸鹽緩沖液配制成50mL溶液，測定差示旋光度。文獻結果：平均回收率為97.8％，變異系數(shù)cv為1.03％原理方法結果討論與——差示旋光法方法TEXT6）樣品測定取維生素C片劑10片，稱重研碎后分別用鹽酸鹽緩沖液及磷酸鹽緩沖液配制成50mL溶液(相當于含Vc20mg/mL)，濾去不溶物，測定濾液的差示旋光度，根據回歸方程計算其含量。TEXT原理討論方法結果與——差示旋光法方法TEXT1）維生素易被氧化,空氣及水中的氧均可使其氧化分解，配制溶液時使用新沸冷卻水,同時加人EDTA作為穩(wěn)定劑；2）樣品測定時，片劑部分物質不能完全溶解，必須過濾除去，然后測定濾液的差示旋光度。TEXT原理討論方法結果與HYPERSIL—C8色譜柱法VenusilXBP—C18柱法其他方法3高效液相色譜法測定維生素CHYPERSIL—C8色譜柱法采用HYPERSIL—C8色譜柱，用0．1％低濃度的草酸作流動相，陳昌云等采用0．05mol／L磷酸二氫鉀緩沖液：甲醇=80：20(v／v)作流動相。流速為1．0mL／min，二極管陣列檢測器，檢測波長為254nm。3.2VenusilXBP—C18柱法系統(tǒng)采用VenusilXBP—C18柱(4．6x250mm，5μg)，用0．2％的偏磷酸的水溶液作為流動相，流速1ml／min，檢測波長240nm；維生素C濃度在0．1-1．0mg／mL范圍內有良好的線性關系。該方法回收率99．89％，標準偏差0．91，操作簡便、靈敏、可靠薄層掃描法原理維生素C具有較強還原性，可使藍色染料2，6-二氯靛酚鈉定量地還原成無色的酚亞胺，而本身被氧化成去氫抗壞血酸，利用此特征進行薄層掃描法測定含量。試紙的制備2,6-二氯靛酚鈉(DCP-Na)溶于無水乙醇配成0.05%的DCP-Na乙醇溶液，濾紙在盛有DCP-Na乙醇溶液的展開缸中浸漬3min，邊浸邊搖展開缸，使濾紙均勻著色，充分被染料溶液所飽和。取出懸掛于暗處，晾干后，立即放入干燥器中避光保存，備用。12操作方法與結果薄層掃描法薄層掃描法緩沖溶液的配制稱取檸檬酸水合物10g，放入1000ml容量瓶中，加入1M氫氧化鈉420ml，并用蒸餾水稀釋至刻度，此溶液的pH應為3.5。否則，用酸或堿調整pH值，保存于冰箱中。薄層掃描法3）掃描條件確定在制備的染料試紙上定量點上維生素C對照品進行掃描，維生素C在290nm處有最大吸收，420nm處無吸收，故選擇1=290nm，2=420nm．雙波長反射式鋸齒掃描。原理方法結果討論與薄層掃描法4）線性實驗4.1）對照品溶液的配制精密稱取維生素C標準品100mg，用緩沖溶液配成lmg/ml的標準溶液。精密稱取維生素C標準溶液1、2、3、4、5ml，分別置于10ml容量瓶中，用緩沖溶液稀釋至刻度。4.2）測定用5

l定量毛細管，分別吸取上述溶液各5

l，點于試紙上。點樣后晾干，并將試紙固定在20cm×20cm玻璃板上，放入薄層掃描儀。測定△A的積分值(峰面積)作為縱坐標Y，點樣量為橫坐標X，得一直線方程Y=15692X+130225，r=0．9991原理方法結果討論與薄層掃描法方法TEXT5）樣品的含量測定取維生素C片10片，研細，精密稱取平均片重一片的粉末，放入100ml容量瓶中，加入緩沖液至刻度，振搖，使維生素C溶解，放置、澄清，用吸液管取3ml移至10ml容量瓶中，用緩沖液稀釋至刻度。用5

l定量毛細管點樣品溶液與不同濃度的標準液于同一試紙上，然后掃描測定峰面積，由工作曲線法計算維生素C片中的維生素C含量。TEXT原理方法結果討論與薄層掃描法回收率實驗精密稱取維生素C對照品20mg，其它原輔料適量，置10ml容量瓶中，加緩沖液稀釋至刻度，振搖，濾過，棄初濾液。分別吸取續(xù)濾液與對照品維生素C液各5l點于同一試紙上，按上述條件進行掃描測定。薄層掃描法點樣時各點間距應大于10mm，掃描測不定期波長可做少量變動，但每次測定必須固定同一測定波長點樣量在3～8l之間線性關系較好，當點樣量為10l，線性關系較差。

原理方法結果討論與結束語總之，維生素C的測定方法很多，各種方法各有特點，常用的滴定法方法簡單，但在滴定有色物質終點不易判斷，分光光度法操作費時，高效液相色譜法是目前發(fā)展較快的一種方法，方法靈敏，選擇性好，有較好的發(fā)展前景。毛細管電泳n51是近幾年新興的分析方法，具有效率高、分析時間短、樣品處理簡單等特點，但有待于進一步完善。01吳春艷．水果中維生素C含量的測定及比較[J]．武漢理工大學學報，2oo7，29(3)：90—91．02王元秀，莊海燕．微量滴定法測定獼猴桃中維生素C的含量[J1．濟南大學學報(自然科學版，2001，15(4)：374，03張穎，等．不同產地枸杞子中維生素C含量測定[J]．中國醫(yī)院藥學雜志，2004，24(8)：500—501．04袁葉飛，甄漢深，歐賢紅．分光光度法測定大棗中的維生素C含量[J]．安徽中醫(yī)學院學報，2006，25(2)：40--41．05馬占玲，等．青椒中還原型維生素C含量的測定[J]．渤海大學學報(自然科學版)，2006，27(2)：111-113．參考文獻01逯家輝，等．F0linB分光光度法測定蔬菜中維生素C的含量[J]．分析檢測，2oo5，26(8)：171—172．02王艷穎，等．高效液相色譜法測定草莓中維生素C含量[J]．大連大學學報，2006，27(2)：21—22．03姜波，