血液自動(dòng)分析的檢測(cè)原理及臨床應(yīng)用（臨床檢驗(yàn)技術(shù)課件）

檢測(cè)原理目錄CONTENTⅠ電阻抗法檢測(cè)原理Ⅱ光化學(xué)檢測(cè)原理聯(lián)合檢測(cè)原理Ⅲ血栓與止血一般檢查Ⅵ血小板檢驗(yàn)Ⅴ電阻抗法檢測(cè)原理電阻抗法血細(xì)胞計(jì)數(shù)原理又名庫(kù)爾特原理。概述01電阻抗法血細(xì)胞計(jì)數(shù)原理01電阻抗法血細(xì)胞計(jì)數(shù)原理01電阻抗法血細(xì)胞計(jì)數(shù)原理根據(jù)電阻抗原理，將體積分為35～450fl的白細(xì)胞，分為256個(gè)通道，淋巴細(xì)胞位于35～90fl的小細(xì)胞區(qū)，中性粒細(xì)胞位于160fl以上的大細(xì)胞區(qū)，單核細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、原始細(xì)胞、幼稚細(xì)胞等，位于90～160fl的中間型細(xì)胞區(qū)。02白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)原理白細(xì)分類計(jì)數(shù)直方圖根據(jù)各亞群占總體的比例，計(jì)算出各亞群細(xì)胞的百分率，并同時(shí)計(jì)算各亞群細(xì)胞的絕對(duì)值02白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)原理光（化）學(xué)檢測(cè)原理01激光散射法用于細(xì)胞的分類計(jì)數(shù)01激光散射法用于細(xì)胞的分類計(jì)數(shù)02常用于血液分析儀檢測(cè)的染料

熒光染料非熒光染料主要用于核酸染色，被激光照射后產(chǎn)生熒光和散射光有：亞甲基藍(lán)、氯唑黑E和過氧化物酶等03非熒光染料亞甲基藍(lán)用于核酸染色過氧化物酶試劑用于單核細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞的染色氯唑黑E用于單核細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞顆粒及白細(xì)胞的膜結(jié)構(gòu)染色03非熒光染料經(jīng)過染色的細(xì)胞，隨鞘液流經(jīng)激光檢測(cè)區(qū)時(shí)，被染色部分可發(fā)生，光吸收現(xiàn)象，使光檢測(cè)器接收到的散射光強(qiáng)度發(fā)生改變，將各種光（化）學(xué)信息，進(jìn)行綜合分析，可準(zhǔn)確區(qū)分正常類型的細(xì)胞?？偨Y(jié)血液中血紅蛋白的測(cè)定，采用分光光度法，應(yīng)用的是朗伯比爾定律聯(lián)合檢測(cè)原理01體積、電導(dǎo)、光散射法應(yīng)用電阻抗原理可測(cè)定細(xì)胞體積采用高頻電磁探針，測(cè)量細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)，細(xì)胞核漿比例及細(xì)胞內(nèi)化學(xué)成分利用細(xì)胞內(nèi)顆粒物對(duì)單色光的散射程度不一，獲得細(xì)胞內(nèi)部顆粒信息02光散射與細(xì)胞化學(xué)法用各種白細(xì)胞在染色下，著色不同，進(jìn)行分類計(jì)數(shù)單個(gè)細(xì)胞通過激光束時(shí)，利用不同類型的白細(xì)胞對(duì)光的阻擋及散射特點(diǎn)不同，來進(jìn)行分類計(jì)數(shù)03多角度偏振散射光當(dāng)單個(gè)細(xì)胞通過激光束時(shí)，從0度、7度、90度及90度去偏振，4個(gè)不同位點(diǎn)收集光的信息，由于不同類型的白細(xì)胞體積大小，內(nèi)部結(jié)構(gòu)不一樣，對(duì)光的阻擋及散射都有著自己的特點(diǎn)，以此可對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行分類計(jì)數(shù)04電阻抗、射頻、流式細(xì)胞術(shù)與核酸熒光染色法04電阻抗、射頻、流式細(xì)胞術(shù)與核酸熒光染色法利用流式及核酸熒光染色法，獲得每個(gè)細(xì)胞的前向散射光（FSC）,側(cè)向散射光(SSC)，和側(cè)向熒光（SFL）三種光信號(hào)，綜合這些參數(shù)可以對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行分類計(jì)數(shù)。05雙鞘流技術(shù)和細(xì)胞化學(xué)染色非嗜堿性粒細(xì)胞分類計(jì)數(shù)通道嗜堿性粒細(xì)胞分類計(jì)數(shù)專用通道采用雙通道對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行分類計(jì)數(shù)05雙鞘流技術(shù)和細(xì)胞化學(xué)染色用氯唑黑E，將白細(xì)胞進(jìn)行染色分類利用激光流式細(xì)胞技術(shù)，檢測(cè)細(xì)胞信息綜合這些參數(shù)可以對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行分類計(jì)數(shù)臨床應(yīng)用目錄CONTENTⅠ血細(xì)胞分析儀的操作方法、注意事項(xiàng)Ⅱ血細(xì)胞分析儀檢測(cè)參數(shù)及臨床應(yīng)用細(xì)胞分布圖及臨床應(yīng)用Ⅲ血栓與止血一般檢查Ⅵ常見報(bào)警及干擾因素Ⅳ檢測(cè)結(jié)果顯微鏡復(fù)查規(guī)則Ⅴ血細(xì)胞分析儀的使用及注意事項(xiàng)血細(xì)胞分析儀的使用及注意事項(xiàng)

血細(xì)胞分析儀血細(xì)胞分析儀的使用及注意事項(xiàng)在使用血細(xì)胞分析儀前，必須先掌握分析儀的檢測(cè)原理血細(xì)胞分析儀的使用及注意事項(xiàng)不同類型、型號(hào)的儀器操作程序并不完全相同操作前應(yīng)仔細(xì)參閱儀器的說明書認(rèn)真學(xué)習(xí)實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)準(zhǔn)操作程序掌握正確的操作方法掌握正確的操作步驟開始使用儀器獨(dú)立檢測(cè)標(biāo)本血細(xì)胞分析儀的使用及注意事項(xiàng)標(biāo)本準(zhǔn)備：使用EDTA-K2抗凝全血，采集靜脈血適量，充分混勻，常溫保存，立即送檢儀器準(zhǔn)備：開機(jī)前檢查器配套試劑、環(huán)境溫度、廢物液桶，開啟電源，待儀器完成自檢室內(nèi)質(zhì)控：完善室內(nèi)質(zhì)控的檢測(cè)，確定儀器在控開始檢測(cè)：將待測(cè)血清置于檢測(cè)架上，編制檢測(cè)命令，啟動(dòng)檢測(cè)程序結(jié)果審核與報(bào)告：審核檢測(cè)的結(jié)果，發(fā)出檢測(cè)報(bào)告操作步驟血細(xì)胞分析儀細(xì)胞分布圖及臨床應(yīng)用01紅細(xì)胞直方圖的臨床應(yīng)用是一條近似正態(tài)分布的單峰曲線，通常位于36～360fl范圍內(nèi)，橫坐標(biāo)表示紅細(xì)胞體積，縱坐標(biāo)表示,不同體積紅細(xì)胞,出現(xiàn)的頻率。正常紅細(xì)胞主要分布在50～200fl范圍內(nèi)02異常紅細(xì)胞直方圖分析紅細(xì)胞直方圖時(shí)，應(yīng)注意觀察直方圖峰的位置、峰底開口寬度、峰頂形狀及有無雙峰現(xiàn)象03對(duì)紅細(xì)胞直方圖的分析一方面有助于貧血的診斷，如缺鐵性貧血、巨幼細(xì)胞性貧血及鐵粒幼細(xì)胞性貧血；另一方面，也可用于貧血的療效觀察。缺鐵性貧血巨幼細(xì)胞性貧血地中海貧血缺鐵性貧血治療有效后03對(duì)紅細(xì)胞直方圖的分析正常紅細(xì)胞直方圖小紅細(xì)胞且大小不均紅細(xì)胞直方圖03對(duì)紅細(xì)胞直方圖的分析正常紅細(xì)胞直方圖大紅細(xì)胞且大小不均紅細(xì)胞直方圖03對(duì)紅細(xì)胞直方圖的分析IDA治療有效紅細(xì)胞直方圖呈雙峰正常紅細(xì)胞直方圖03對(duì)紅細(xì)胞直方圖的分析MA治療有效紅細(xì)胞直方圖呈雙峰正常紅細(xì)胞直方圖04白細(xì)胞直方圖的臨床應(yīng)用04白細(xì)胞直方圖的臨床應(yīng)用淋巴細(xì)胞增多白細(xì)胞直方圖04白細(xì)胞直方圖的臨床應(yīng)用原始幼稚白細(xì)胞增多正常紅細(xì)胞直方圖04白細(xì)胞直方圖的臨床應(yīng)用中間細(xì)胞增多白細(xì)胞增多04白細(xì)胞直方圖的臨床應(yīng)用中間細(xì)胞增多白細(xì)胞增多05血小板直方圖的臨床應(yīng)用05血小板直方圖的臨床應(yīng)用06散點(diǎn)圖的臨床應(yīng)用平面二維（X、Y軸）圖像三維（X、Y、Z軸）圖像07白細(xì)胞散點(diǎn)圖的臨床應(yīng)用08紅細(xì)胞散點(diǎn)圖顯示光散射與細(xì)胞體積、血紅蛋白濃度的關(guān)系，它提供紅細(xì)胞的原始測(cè)定數(shù)據(jù)，和紅細(xì)胞的計(jì)數(shù)結(jié)果。血細(xì)胞分析儀常見報(bào)警和干擾因素概述報(bào)警形式圖形符號(hào)文字顏色變化當(dāng)檢測(cè)結(jié)果,超出實(shí)驗(yàn)室設(shè)定的參考區(qū)間時(shí),儀器可出現(xiàn)報(bào)警。01血細(xì)胞分析儀常見報(bào)警白細(xì)胞檢測(cè)常用的報(bào)警提示有原始細(xì)胞?未成熟粒細(xì)胞?異型淋巴細(xì)胞?有核紅細(xì)胞?WBC散射圖異常核左移01血細(xì)胞分析儀常見報(bào)警紅細(xì)胞檢測(cè)常用的報(bào)警提示有紅細(xì)胞大小不均小紅細(xì)胞增多低色素性貧血紅細(xì)胞聚集？紅細(xì)胞碎片？HGB

干擾？RBC溶血不良大紅細(xì)胞增多乳糜血01血細(xì)胞分析儀常見報(bào)警血小板檢測(cè)常用的報(bào)警提示有PLT直方圖異常大血小板？血小板

聚集？02常見的干擾因素干擾RBC、Hb、MCV、MCH和MCHC等參數(shù)的常見因素冷凝集標(biāo)本血液中存在冷凝集素，使紅細(xì)胞在離體后發(fā)生聚集。判斷方法：儀器出現(xiàn)“RBC聚集？”的報(bào)警，或MCV＞llOfl，標(biāo)本管壁有小的RBC聚集塊。糾正方法：將標(biāo)本置37℃孵育30分鐘，立即上機(jī)檢測(cè)。脂血標(biāo)本脂血是最常見的干擾因素判斷方法：儀器出現(xiàn)“乳糜/血紅蛋白干擾”的報(bào)警；或MCHC≥365g/L；離心可見血漿出現(xiàn)渾濁。糾正方法：可采用離心，血漿置換后，再進(jìn)行檢測(cè)溶血標(biāo)本標(biāo)本溶血時(shí)，由于紅細(xì)胞破壞導(dǎo)致紅細(xì)胞計(jì)數(shù)較真實(shí)值偏低，MCV減低，HCT也較真實(shí)值，偏低；MCH和MCHC都增高。解決方法：重新采集標(biāo)本檢測(cè)02常見的干擾因素干擾RBC的常見因素有核紅細(xì)胞（NRBC）：在某些病理情況下外周血出現(xiàn)有核紅細(xì)胞糾正方法：利用手工分類計(jì)數(shù)對(duì)白細(xì)胞計(jì)數(shù)進(jìn)行校正。紅細(xì)胞溶血不良：見于某些疾病，標(biāo)本進(jìn)行前處理時(shí)，不能將紅細(xì)胞完全溶解破壞解決辦法：采用手工方法分類計(jì)數(shù)WBC。02常見的干擾因素干擾WBC的常見因素有核紅細(xì)胞（NRBC）：在某些病理情況下外周血出現(xiàn)有核紅細(xì)胞糾正方法：利用手工分類計(jì)數(shù)對(duì)白細(xì)胞計(jì)數(shù)進(jìn)行校正。紅細(xì)胞溶血不良：見于某些疾病，標(biāo)本進(jìn)行前處理時(shí)，不能將紅細(xì)胞完全溶解破壞解決辦法：采用手工方法分類計(jì)數(shù)WBC。02常見的干擾因素干擾PLT的常見因素小細(xì)胞性貧血標(biāo)本：某些貧血患者的小紅細(xì)胞，被當(dāng)成血小板進(jìn)行計(jì)數(shù)，使PLT假性增高。糾正方法：用手工方法計(jì)數(shù)PLT。血小板聚集或血小板衛(wèi)星現(xiàn)象：血小板聚集及血小板衛(wèi)星現(xiàn)象，使PLT計(jì)數(shù)假性降低。解決方法：解決血小板聚集的問題，再上機(jī)檢測(cè)。細(xì)胞碎片：儀器PLT計(jì)數(shù)異常增高；儀器出現(xiàn)“紅細(xì)胞溶血不良”或“碎片”的報(bào)警。解決辦法：采用手工方法計(jì)數(shù)PLT。02常見的干擾因素干擾網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的常見因素瘧原蟲和豪-焦（Howell-Jollys）小體使網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（RET）假性增高。血細(xì)胞分析儀各項(xiàng)檢測(cè)參數(shù)及臨床應(yīng)用概述01紅細(xì)胞體積分布寬度RDW其參考區(qū)間為11.5%～14.5%。RDW有助于貧血的診斷與鑒別診斷用紅細(xì)胞體積的變異系數(shù)RDW-CV%表示RDW：紅細(xì)胞不均一性的參數(shù)02RDW的臨床應(yīng)用包括結(jié)合RDW和MCV兩個(gè)參數(shù)，作為貧血形態(tài)學(xué)分類的依據(jù)鑒別缺鐵性貧血和地中海貧血缺鐵性貧血患者的早期診斷和療效觀察02RDW的臨床應(yīng)用包括未成熟粒細(xì)胞（IG）及大型未染色細(xì)胞（LUC）的臨床意義。未成熟粒細(xì)胞（IG）IG增高可見于感染、腫瘤、類白血病反應(yīng)、骨髓增生性疾病和慢性粒細(xì)胞白血病等。大型未染色細(xì)胞（LUC）增多，主要見于感染、免疫性疾病、白血病等。02RDW的臨床應(yīng)用包括平均血小板體積（MPV）、血小板分布寬度（PDW）、大血小板比率（P-LCR）及血小板比容（PCT）的臨床應(yīng)用：1．平均血小板體積（MPV）MPV增高：見于血小板，在周圍血液中破壞增多，骨髓代償生成，增加時(shí)；也可見于骨髓纖維化、血栓性疾病及血栓前狀態(tài)、脾切除、慢性粒細(xì)胞白血病、巨大血小板綜合征等。MPV減低：骨髓造血系統(tǒng)衰竭時(shí)MPV下降，病情越嚴(yán)重，MPV越低；另外，嚴(yán)重感染伴敗血癥、脾亢、化療后、再生障礙性貧血及巨幼細(xì)胞性貧血時(shí)MPV減低。2．血小板分布寬度，增高見于急性白血病化療后、巨幼細(xì)胞性貧血、慢性粒細(xì)胞白血病、脾切除、巨大血小板綜合征、血栓性疾病等。血小板分布寬度減低：見于反應(yīng)性血小板增多癥、再生障礙性貧血。3．大血小板比率（P-LCR）P-LCR增高見于免疫性血小板減少、慢性出血、血小板增多癥、感染等。4．血小板比容（PCT）增高見于反應(yīng)性及原發(fā)性血小板增多癥、慢性粒細(xì)胞白血病早期。血小板比容減低，見于再生障礙性貧血、化療后及血小板減少癥時(shí)。02RDW的臨床應(yīng)用包括血細(xì)胞分析儀網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟度分類血細(xì)胞分析儀網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟度分類熒光(RNA)強(qiáng)度ReticulocytesPLTRBC高熒光強(qiáng)度低熒光強(qiáng)度中熒光強(qiáng)度WBC前向散射光(細(xì)胞大小)03網(wǎng)織紅分類的臨床應(yīng)用血細(xì)胞分析儀網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟度分類未成熟網(wǎng)織紅細(xì)胞比率（IRF）的值，可作為評(píng)價(jià)骨髓造血功能，最早、且較靈敏的指標(biāo)。紅細(xì)胞血型分類及命名01血型的概念血型（BG）是血液成分的一種遺傳多態(tài)性，是產(chǎn)生抗原抗體的遺傳性狀。血型是由血型基因決定的，不僅紅細(xì)胞表面存在抗原差異，白細(xì)胞、血小板、各種組織細(xì)胞表面亦存在抗原差異，并且血漿及體液中也存在抗原或抗體的差異。人類血型不僅與輸血有密切的關(guān)系，也與器官移植、骨髓移植、溶血性疾病、法醫(yī)鑒定及考古等有關(guān)。02紅細(xì)胞血型分類國(guó)際輸血協(xié)會(huì)（ISBT）紅細(xì)胞表面抗原命名委員會(huì)根據(jù)紅細(xì)胞血型抗原的生化特性、遺傳學(xué)特性、血清學(xué)表現(xiàn)等特點(diǎn)將所發(fā)現(xiàn)的人類紅細(xì)胞血型抗原分為血型系統(tǒng)、血型集合、高頻抗原組和低頻抗原組。03紅細(xì)胞血型命名對(duì)紅細(xì)胞血型的命名長(zhǎng)期以來沒有統(tǒng)一規(guī)定，習(xí)慣上有的血型抗原用大寫英語字母表示，如ABO血型系統(tǒng)的A、B抗原；有的以大、小寫字母混合組成，如Lewis系統(tǒng)的Lea、Leb抗原；有的則以字母加數(shù)字來表示，如Duffy系統(tǒng)的Fy3、Fy5。03紅細(xì)胞血型命名1996年，ISBT紅細(xì)胞抗原命名委員會(huì)確定了紅細(xì)胞血型的命名和表述方法：6位數(shù)字和字母/數(shù)字兩種表述方式，前者適用于計(jì)算機(jī)語言，后者適用于一般閱讀、書寫和印刷。ISBT還規(guī)定，已有的命名不改變，新發(fā)現(xiàn)的抗原必須按“字母＋數(shù)字”符號(hào)系統(tǒng)標(biāo)記。04紅細(xì)胞血型表述6位數(shù)字的前3位數(shù)字表示某一血型系統(tǒng)（001～030），后3位數(shù)字表示抗原的特異性。如001001、001002、001003、分