羊肚菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

DBXX/XXXXX—XXXXICSFORMTEXT點(diǎn)擊此處添加ICS號(hào)FORMTEXT點(diǎn)擊此處添加中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)文獻(xiàn)分類號(hào)FORMTEXT?????DBXXDBXX/XXXXX—XXXXFORMTEXT?????羊肚菌菌種生產(chǎn)FORMTEXT技術(shù)規(guī)程TechnicalRegulationforSpawnProductionofMorchellaspp.FORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX發(fā)布FORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX實(shí)施FORMTEXT江西省市場(chǎng)監(jiān)督管理局???發(fā)布前??言本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由江西省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出。本文件由江西省經(jīng)濟(jì)作物標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)（JX/TC019）歸口。本文件起草單位：江西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)應(yīng)用微生物研究所。本文件主要起草人：馬吉平、張誠(chéng)、王素貞、肖銀潤(rùn)、王赟萍、鐘國(guó)祥、鐘啟萍、李偉紅、李娟、熊小文。羊肚菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程1范圍本文件規(guī)定了羊肚菌菌種的術(shù)語(yǔ)和定義，菌種生產(chǎn)要求，母種、原種和栽培種生產(chǎn)與抽樣檢測(cè)，生產(chǎn)記錄與留樣及標(biāo)簽、標(biāo)志、包裝、運(yùn)輸。本文件適用于江西省區(qū)域羊肚菌菌種生產(chǎn)要求。2規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB5749生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB9688食品包裝用聚丙烯成型品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB/T12728-2006食用菌術(shù)語(yǔ)NY5099食用菌栽培基質(zhì)安全技術(shù)要求NY/T528食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程N(yùn)Y/T1731食用菌菌種良好作業(yè)規(guī)范NY/T1742食用菌菌種通用技術(shù)要求NY/T1846食用菌菌種檢驗(yàn)規(guī)程N(yùn)Y/T1935食用菌栽培基質(zhì)質(zhì)量安全要求3術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。3.1羊肚菌Morchellaspp.羊肚菌隸屬于真菌界(Fungi),子囊菌門(mén)(Ascomytina)，盤(pán)菌綱(Pezizomycetes)，盤(pán)菌目(Pezizales),羊肚菌科(Morchellaceae),羊肚菌屬(Morchella)。子實(shí)體菌蓋呈蜂窩狀，圓錐形，一般呈褐色。菌柄近柱形，白色或淺白色，中空。3.2菌種spawn生長(zhǎng)在適宜基質(zhì)上具結(jié)實(shí)性的菌絲培養(yǎng)物，包括母種、原種和栽培種。3.3母種stockculture經(jīng)各種方法選育得到的具有結(jié)實(shí)性的菌絲體純培養(yǎng)物及其繼代培養(yǎng)物。也稱一級(jí)種、試管種。3.4原種motherspawn由母種移植、擴(kuò)大培養(yǎng)而成的菌絲體純培養(yǎng)物。常以菌種瓶（玻璃菌種瓶或塑料菌種瓶）或（12～17）cm×（22～28）cm×（0.004～0.005）cm聚丙烯塑料袋為容器。也稱二級(jí)種。3.5栽培種plantingspawn由原種移植、擴(kuò)大培養(yǎng)而成的菌絲體純培養(yǎng)物。常以玻璃瓶、塑料瓶或（15～17）cm×（30～35）cm×（0.004～0.005）cm聚丙烯塑料袋為容器。栽培種只能用于栽培，不可再次擴(kuò)大繁殖菌種。也稱三級(jí)種。4菌種生產(chǎn)要求4.1人員羊肚菌菌種生產(chǎn)所需要的技術(shù)人員和檢驗(yàn)人員經(jīng)過(guò)專業(yè)培訓(xùn)，掌握羊肚菌基礎(chǔ)知識(shí)及菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程要求。4.2場(chǎng)所和廠房要求菌種生產(chǎn)應(yīng)選擇地勢(shì)高燥、通風(fēng)良好、空氣清新、水源近、排水通暢和交通便利的場(chǎng)所。周邊無(wú)污染源。菌種生產(chǎn)廠房要求有各自隔離的攤曬場(chǎng)、原材料庫(kù)和配料分裝庫(kù)。配套有配料室、攪拌室、裝袋（瓶）室、滅菌室、冷卻室、接種室、培養(yǎng)室、貯存室、菌種檢驗(yàn)室及菌種冷藏庫(kù)等各環(huán)節(jié)的設(shè)施。4.3生產(chǎn)設(shè)備菌種生產(chǎn)需要電子秤、攪拌機(jī)、裝袋（瓶）機(jī)、高壓滅菌鍋或常壓滅菌鍋、臭氧離子發(fā)生器、超凈工作臺(tái)或接種箱、恒溫培養(yǎng)箱、培養(yǎng)架、冰箱、空調(diào)、顯微鏡等設(shè)備。符合NY/T528的規(guī)定。5母種生產(chǎn)母種應(yīng)從具有相應(yīng)資質(zhì)的供種單位引進(jìn)，選擇抗逆性強(qiáng)、抗雜性強(qiáng)、優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)、適合本地栽培的六妹羊肚菌、七妹羊肚菌或梯棱羊肚菌等優(yōu)良菌株。菌種質(zhì)量符合NY/T1742的要求。5.1培養(yǎng)基配方見(jiàn)附錄A。5.2容器試管一般選用18mm×180mm或者20mm×200mm；培養(yǎng)皿選用直徑7cm～9cm玻璃培養(yǎng)皿或一次性塑料培養(yǎng)皿。5.3分裝和滅菌5.3.1斜面培養(yǎng)基分裝和滅菌按配方配制培養(yǎng)基，分裝培養(yǎng)基至試管1/4～1/3處，試管口塞上硅膠塞或棉塞，每5支試管為1捆，牛皮紙或報(bào)紙包棉塞，棉線扎緊，硅膠塞朝上放置。121℃～124℃（0.11MPa～0.12MPa）下滅菌30min。滅菌后將培養(yǎng)基擺放成斜面。5.3.2平板培養(yǎng)基分裝和滅菌按配方配制培養(yǎng)基，培養(yǎng)基裝入300mL～500mL三角瓶至刻度的2/3處，瓶口塞上硅膠塞，放入滅菌鍋；121℃～124℃（0.11MPa～0.12MPa）滅菌30min～45min。在無(wú)菌條件下分裝入已滅菌的培養(yǎng)皿內(nèi)。5.4接種接種過(guò)程嚴(yán)格按照無(wú)菌操作。在超凈工作臺(tái)或接種箱內(nèi)，先用75%酒精棉球進(jìn)行表面消毒，再將3mm～5mm大小的菌種塊接種在培養(yǎng)皿或試管的中部。5.5培養(yǎng)培養(yǎng)溫度15～18℃，空氣相對(duì)濕度60%～75%，通風(fēng)避光培養(yǎng)。接種后第2d開(kāi)始檢查有無(wú)雜菌及菌絲長(zhǎng)勢(shì)，及時(shí)挑出不合格母種。菌種質(zhì)量符合NY/T1731規(guī)定。6原種生產(chǎn)6.1原料的選擇6.1.1主料選擇小麥、玉米芯、麥麩、木屑等。木屑為闊葉樹(shù)雜木屑，顆粒在1.0mm～8.0mm×2.0mm～10mm，提前一個(gè)月堆放腐熟；小麥要求新鮮無(wú)霉變、無(wú)蟲(chóng)害，顆粒度飽滿，質(zhì)量應(yīng)符合NY5099的規(guī)定。原料質(zhì)量及貯藏應(yīng)符合NY/T1935要求。6.1.2輔料選擇谷殼、菜餅、石膏、石灰等。原料質(zhì)量及貯藏應(yīng)符合NY/T1935要求。6.1.3水符合GB5749要求。6.2培養(yǎng)料配方見(jiàn)附錄A。6.3培養(yǎng)料的配制按配方比例將細(xì)木屑、谷殼或玉米芯、菜餅等預(yù)濕，小麥先用1%的石灰水浸泡12h，然后用水煮沸騰約15min，并攪動(dòng)，煮至麥粒保持完整，捏開(kāi)后里面沒(méi)有“白芯”時(shí)撈出，稍控水，與木屑拌勻，加入配方中其他原料，攪拌均勻，培養(yǎng)料含水量60%～65%，pH值在6.5～7.5之間。6.4裝瓶（袋）采用規(guī)格為500mL或750mL的菌種瓶或（12cm～17cm）×（22cm～28cm）×（0.004cm～0.005cm）的聚丙烯塑料袋，當(dāng)天拌好的料當(dāng)天裝完，裝好的瓶要做到上緊下松，料面平整，打孔。瓶口用封口膜封口，袋口用無(wú)棉蓋體封口。6.5滅菌一般采用高壓滅菌。料瓶或料袋在121℃～124℃（0.11MPa～0.12MPa）下滅菌2.5～3h。滅菌后待料瓶（袋）溫度降至25℃以下接種。6.6接種無(wú)菌條件下按無(wú)菌操作要求接種，手部和試管母種表面用75%酒精棉球消毒，再將母種接到料瓶（料）袋內(nèi)。接種量符合NY/T528的規(guī)定。6.7菌絲培養(yǎng)培養(yǎng)室溫度控制在15℃～18℃，當(dāng)菌絲長(zhǎng)滿菌瓶（袋）后，降低溫度至3℃～8℃；培養(yǎng)室內(nèi)空間相對(duì)濕度控制在60%～75%；培養(yǎng)室全程避光管理；保持培養(yǎng)室通風(fēng)良好，每天通風(fēng)1次～2次，每次25min～30min。培養(yǎng)過(guò)程中及時(shí)挑揀出雜菌感染等不合格原種。7栽培種生產(chǎn)7.1塑料袋的選擇根據(jù)滅菌方式不同，一般采用低壓聚乙烯或高壓聚丙烯塑料袋，塑料袋規(guī)格為（15cm～17cm）×（30cm～35cm）×（0.004cm～0.005cm）。7.2培養(yǎng)料配方見(jiàn)附錄A。7.3培養(yǎng)料的配制按配方比例將細(xì)木屑或玉米芯、谷殼預(yù)濕，小麥用水浸泡。小麥完全浸入水中浸泡，視溫度情況浸泡1天～3天，浸泡至麥粒保持完整，捏開(kāi)后里面沒(méi)有“白芯”時(shí)撈出，稍控水，與配方中其他原料攪拌均勻，含水量達(dá)到60%～65%。7.4裝袋裝袋機(jī)裝袋，裝好的料袋要做到松緊一致，料面平整。袋口用無(wú)棉蓋體封口。7.5滅菌可采用高壓滅菌和常壓滅菌。高壓滅菌：料袋在121℃～124℃（0.11MPa～0.12MPa）下滅菌2.5h～3h。常壓滅菌：在3h之內(nèi)使滅菌倉(cāng)內(nèi)溫度升至100℃，恒溫保持18h～22h。滅菌后待料袋溫度降至25℃以下可以接種。7.6接種無(wú)菌條件下按無(wú)菌操作要求接種，手部和原種表面用75%酒精棉球消毒，再將原種接種到料袋內(nèi)。接種量符合NY/T528的規(guī)定。7.7菌絲培養(yǎng)培養(yǎng)室溫度控制在15℃～18℃，空間相對(duì)濕度控制在60%～75%，全程避光管理；保持培養(yǎng)室通風(fēng)良好，每天通風(fēng)1次～2次，每次25min～30min。培養(yǎng)過(guò)程中及時(shí)挑揀出雜菌感染等不合格栽培種。7.8抽樣與檢測(cè)7.8.1抽樣按照NY/T1846中抽樣標(biāo)準(zhǔn)抽樣。7.8.2檢測(cè)按照NY/T1846中感官檢驗(yàn)、霉菌、細(xì)菌檢驗(yàn)、菌絲生長(zhǎng)速度測(cè)定進(jìn)行，任何一項(xiàng)不符合標(biāo)準(zhǔn)要求的，為不合格菌種；均符合要求的，為合格菌種。7.9貯藏備用將檢查合格的菌種放于潔凈的1℃～4℃冷庫(kù)中短期保存?zhèn)溆谩?生產(chǎn)記錄與留樣8.1生產(chǎn)記錄建立獨(dú)立、完整的生產(chǎn)記錄檔案，對(duì)生產(chǎn)過(guò)程中各環(huán)節(jié)進(jìn)行有效記錄，記錄保留二年。8.2留樣菌種來(lái)源、制作方法和接種時(shí)間分批編號(hào)。按批隨機(jī)抽取樣品留存，抽樣量分別為該批菌包量的1%，量大時(shí)可以采取兩級(jí)抽樣。每批抽樣數(shù)量不少于10袋，保存于潔凈的1℃～4℃冷庫(kù)中，直到本次栽培種接種后正常出菇結(jié)束。9標(biāo)簽、標(biāo)志、包裝和運(yùn)輸符合NY/T528關(guān)于標(biāo)簽、標(biāo)志、包裝和運(yùn)輸?shù)囊?guī)定。附錄A（資料性附錄）羊肚菌菌種培養(yǎng)基（料）配方表表A.1母種培養(yǎng)基配方配方培養(yǎng)基配方配方一馬鈴薯200g，葡萄糖20g，蛋白胨0.5g，牛肉膏0.5g，瓊脂20g，水1000mL。配方二馬鈴薯200g，葡萄糖20g，磷酸二氫鉀1g，蛋白胨1g，瓊脂20g，純凈水1000mL。表A.2原種培養(yǎng)料配方配方培養(yǎng)料配方配方一小麥50%、細(xì)木屑20%、谷殼20%、麥麩8%、石灰1%、石膏1%。配方二小麥50%、玉米芯28%、麥麩15%、菜餅5%、石灰1%、石膏1%。表A.3栽培種培養(yǎng)料配方配方培養(yǎng)料配方配方一小麥60%、玉米芯20%、谷殼16%、碳酸鈣2%、石灰2%。配方二小麥50%、細(xì)木屑40%、谷殼8%、石灰1%、石膏1%。附錄B(資料性附錄)羊肚菌菌種生產(chǎn)記錄表生產(chǎn)情況記錄表單位名稱：負(fù)責(zé)人：