DB22T 2688.2-2017 飼料中三種致病菌檢測(cè)微滴數(shù)字PCR法 第2部分：?jiǎn)魏思?xì)胞增生李斯特氏菌　　_第1頁(yè)
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備案號(hào)：56302-2017DB22DB22/T2688.2—2017飼料中三種致病菌檢測(cè)微滴數(shù)字PCR法第2部分：?jiǎn)魏思?xì)胞增生李斯特氏菌DeterminationofthreepathogenicbacteriainfeedbydropletdigitalPCRmethodPart2：Listeriamonocytogenes吉林省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布I本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2015給出的規(guī)則1警示——使用本標(biāo)準(zhǔn)的人員應(yīng)有正規(guī)實(shí)驗(yàn)室工作的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。本標(biāo)準(zhǔn)并未指出所有可能的安全問(wèn)本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了飼料中單核細(xì)胞增生李斯特氏菌檢測(cè)微滴數(shù)字PCR法的試劑和材料、儀器和設(shè)備GB4789.1食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)總則GB4789.30-2016食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)單核細(xì)胞WS/T230-2002臨床診斷中聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）技理及陽(yáng)性微滴的個(gè)數(shù)與比例得出靶分子的起始拷貝數(shù)或濃度。本標(biāo)準(zhǔn)通針特異性引物和探針進(jìn)行數(shù)字4.4裂解液：2%CTAB(cetyltrithylammoniumbromide，十六烷基三甲基溴化銨)，Tris(trishydroxymethylaminomethane，三羥甲基氨基甲烷)，1.4mol/LNaCl4.5酚/氯仿/異戊醇（25:24:1，v/2按照GB/T14699.1對(duì)飼料進(jìn)行采樣吸取單核細(xì)胞增生李斯特氏菌增菌液1mL（6.3加到1.5mL無(wú)菌離心管中，12000r/mi），nm和280nm處的吸收值，從而確定DNA濃度最優(yōu)濃度311143反應(yīng)條件：95℃/5min，1個(gè)循環(huán)；95℃/15s，60℃/1min，40個(gè)循環(huán)；98℃/1根據(jù)數(shù)字PCR體系中陰性分割體系的終點(diǎn)熒光值設(shè)定熒光的閾值限。閾值限需要對(duì)空白和陽(yáng)性擴(kuò)增8.3.1樣品基因沒(méi)有得到擴(kuò)增，擴(kuò)增終點(diǎn)熒光信號(hào)小于閾值，可判定樣品結(jié)果8.3.2樣品基因得到擴(kuò)增，擴(kuò)增終

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