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22TechnicalcodeofpracticeonisolationandpurificationofcommonpathogenicbacteriaofintestinalbacteriaforfreshwaterfishI本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定本文件主要起草人：張東鳴、陳玉珂、王秋舉、郭志欣、藺麗麗、劉洪健、趙云龍、吳振1淡水魚腸道常見致病菌分離與純化技術(shù)規(guī)程GB4789.28食品微生物學(xué)檢驗(yàn)培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量SN/T2632—2010微生物菌種常注：淡水魚腸道中常見的致病菌有：金黃色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）、嗜水氣單胞菌（Aeromonas和溫和氣單胞菌（Aeromonassobria）等。24789.28的規(guī)定。序號(hào)1胰蛋白胨2酵母提取物3氯化鈉4瓊脂5蒸餾水菌20min。將LB培養(yǎng)基置于錐形瓶中經(jīng)高壓蒸汽滅菌(121℃滅菌20min)后放置于提前滅菌的無(wú)菌操作3制備懸液（見7.3）接種（見7.4）培養(yǎng)（見7.5）純化（見7.6）檢驗(yàn)純度（見7.7）保種（見7.8）記錄（見8）后，打開腹腔，再用75%酒精棉球7.3.1用約2倍腸道內(nèi)容物體積的無(wú)菌生理鹽水將腸7.3.2將7.3.1的細(xì)菌懸液在無(wú)菌條件下涂布在倍數(shù)的稀釋菌液。建議稀釋倍數(shù)為：10-3、10-4培養(yǎng)基上，至液體全部被培養(yǎng)基吸收,每個(gè)濃度的菌液做4在培養(yǎng)皿上蓋表面標(biāo)注樣品名稱、日期和采樣地等信息。置于恒溫培養(yǎng)箱中28℃~37℃倒置培養(yǎng)24h。表面進(jìn)行連續(xù)劃線分離。在培養(yǎng)皿上蓋表面做好標(biāo)注，置于恒溫培養(yǎng)箱中28℃~37℃培養(yǎng)24h。重復(fù)7.6.1操作2～3次。待培養(yǎng)基上均勻的長(zhǎng)出顏色和形態(tài)相同的單個(gè)菌落時(shí)便可以進(jìn)行細(xì)品名稱、日期和采樣地等信息，然后將試管置于恒溫振蕩器中，在溫度28℃~37℃,轉(zhuǎn)速每分鐘120轉(zhuǎn)的條件下，培養(yǎng)16h～18h。培養(yǎng)結(jié)束后按照7.4和7.5的方法再進(jìn)行分離培養(yǎng)，若新平板中長(zhǎng)出

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